全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
虎杖苷在大鼠体内的药动学特点和组织分布研究
吕春艳，张兰桐+，袁志芳，景秀娟，刘 洋，刘伟娜
(河北医科大学药学院药物分析教研室．河北石家庄050017)
摘要：目的建立RP—HPLC测定大鼠血浆及组织样本中虎杖苷的方法，研究虎杖苷在大鼠体内的药动学行为
和组织分布特点。方法采用DiamonsilC-8色谱柱(250mm×4．6mm。5肛m)，乙腈一水(26：74)为流动相，体积
流量为1．0mL／min，检测波长为303nm。结果虎杖苷在大鼠血浆及各组织中一定质量浓度范围内线性关系良
好，其高、中、低3种不同质量浓度的回收率及日内、日问精密度均符合方法学要求。大鼠ig虎杖有效部位后，虎杖
苷在大鼠体内的药动学行为符合二室开放模型，在体内分布广泛，以脾、心、肺、胃中分布较高。结论建立了大鼠
血浆及组织匀浆中虎杖苷的RP—HPLC测定方法，此方法简便、快速，结果准确、可靠；并首次阐明了虎杖苷在大鼠
体内的药动学特点和不同组织内的分布情况。
关键词：RP—HPLC；虎杖苷；药动学；组织分布
中图分类号：R286．61 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)02—0235一04
Pharmacokineticcharacteristicsandtissuedistributionofpolydatininratsinvivo
LUChun—yan，ZHANGLan—tong，YUANZhi—fang，JINGXiu—juan，LIUYang，LIUWei—na
(DepartmentofPharmaceuticalAnalysis，SchoolofP armacy，HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050017，China)
Abstract：ObjectiveToestablishaRP—HPLCmethodto eterminethepolydatininplasmaand
tissuesofratsinvivoandtostudyitspharmacokineticbehav ourandtissuedistributioncharacteristics．
MethodsChromatographicseparationwasachievedbyRP—HPLCusingC18column(250mm×4．6mm，5
“m)asstationaryphaseandacetonitrile-water(26：74)asmobilephasewithaflowrateof1．0mL／min．
TheUVdetectivewavelengthwas303nm．ResultsGoodlineartieswereobtainedinplasmaandevery
kindoftissueoveracertainrange．Therecovery，intra-dayandinter—dayprecisionofthreedifferent
concentrationsofp lydatininplasmaandtissuesmettherequirementsofmethodology．The
pharmacokineticcharacteristicsofpolydatinfterigadministrationtoratscompliedwiththeopentwo—
compartmentmodel．Theresultsoftissuedistributionshowedthatpolydatinwasdistribu／edwidelyin
rats．Thehighestlevelwasfoundinspleen，heart，lung，andstomachfterigadministration(50mg／kg)
ofpolydatin．ConclusionTheRP—HPLCmethodis establishedtod terminetheconcentrationof
polydatininplasmaandtissues．Themethodisquick，precise，andreproducible．ItisthefirsttimetO
studythepharmacokineticcharactersandtissuedistributionofp lydatininrats锄vivoafterig
administration．
Keywords：RP—HPI。C；polydatin；pharmacokinetics；tissuedistribution
虎杖苷(3，47，5一三羟基二苯乙烯一3—0—8一D一葡
萄糖苷)是从虎杖RhizomaetRadixPolygoni
国spidati中分离得到的多羟基芪类化合物，近年研
究表明，虎杖苷在防止动脉内皮损伤性血栓形成，改
善休克微循环，提高休克大鼠存活率，提高移植皮瓣
存活率和减轻缺血一再灌注、自由基、内毒素等造成的
组织器官损伤等诸方面有良好作用。本实验室自虎杖
中分离提取虎杖有效部位，首次研究了口服给药后虎
杖苷在大鼠体内的药动力学特点和不同组织的分布
情况，为该药合理的临床应用提供了理论依据。
1实验材料
1．1仪器：Waters1525液相色谱仪；Waters2996
DAD检测器；Waters2487紫外检测器；Empower
Project色谱工作站；XW一80A旋涡混合器(3c海
医科大学仪器厂)，LGl6一w高速离心机(北京医
用离心机厂)。
1．2药品与试剂：虎杖苷对照品(中国药品生物制
品检定所提供，供定量测定用)；虎杖有效部位由本
收稿日期：2006—06—09
基金项目：河北省药学重点学科资助项目
作者简介：吕春艳(1980一)，女，河北医科大学药学院2003级硕士研究生，研究方向为中药有效成分的药动学研究。
*通讯作者张兰桐Tel：(0311)86266419Fax：(03 1)86052053E—mail：zhanglantong@263．net
万方数据
·236· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
实验室自虎杖药材中提取制得，经RP—HPLC法测
得其中含虎杖苷77．25％；柱色谱用硅胶(青岛海
洋化工厂生产)；虎杖生药购于安国药材市场，经河
北医科大学生药教研室聂凤裎教授鉴定；乙腈(色
谱纯)，重蒸水(自制)，其他所用试剂均为国产分析
纯试剂。
1．3实验动物：健康雄性SD大鼠，体重170～200
g，由河北医科大学实验动物中心提供。
2实验方法
2．1 色谱条件：色谱柱为DiamonsilC，。色谱柱
(250mm×4．6mm，5弘m)；流动相为乙腈一水
(26：74)；体积流量1．0mI。／rain；检测波长303
I-lm；灵敏度0．5AUFS。
2．2对照品溶液的配制：精密称取虎杖苷对照品适
量，加甲醇溶解，配成质量浓度为60．625t-tg／mL的
标准储备液。按倍比稀释法配成一系列质量浓度
(12．125、6．063、3．031、1．213、1．OlO、0．758、0．606、
0．303、0．152、0．076／,g／mL)的甲醇溶液。
2．3虎杖有效部位的制备：以50％乙醇回流提取
虎杖粉末(50目筛)，减压回收乙醇至无醇味，浓缩
成1：2的水溶液，用1mol／LNaOH溶液调pH至
7．8后，以醋酸乙酯萃取，减压回收溶剂，得提取物；
将所得的提取物上硅胶柱(300400目)，用氯仿一
甲醇(50：10)等度洗脱，以薄层色谱法进行监测
[展开剂：氯仿一丙酮一甲酸一水(4：4：0．8：0．2)，
300nm下检视蓝色斑点]，收集流份，合并相同组
分，回收溶剂即得虎杖有效部位，经RP—HPLC外标
法测定虎杖苷质量分数为77．25％。
2．4 供试药品的配制：取制备的虎杖有效部位适
量，精密称定，加入蒸馏水少量，超声10min使溶
解，制成3mg／mL虎杖苷混悬液。
2．5生物样本的制备
2．5．1血样的制备：雄性SD大鼠6只，给药前禁
食12h，自由饮水。大鼠ig虎杖有效部位，给药剂量
为50mg／kg(以虎杖苷计)，给药后，分别于5、10、
15、25、30、45、60、90、120、150、180、240min从大鼠
眼底静脉丛取血0．3mL，置1rnL肝素化的离心管
中，以10000r／min离心10min，取血浆，于一20
℃冷冻保存，待测。
2．5．2组织样本的制备：雄性SD大鼠18只，随机
分为3组，每组6只。给药前禁食12h，自由饮水。
大鼠ig给予虎杖有效部位，给药剂量为50mg／kg
(以虎杖苷计)，分别于吸收相(10min)、分布相(30
min)和消除相(120min)各断头处死6只大鼠
(以上时间点根据其血药浓度一时间曲线确定)，立即
取出心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、睾丸、脑，除小肠和
胃剪开去除内容物后用生理盐水清洗外，其余器官
用生理盐水洗净表面浮血，置一20℃冷冻保存。测
定前取出组织样本，解冻，称质量，剪碎，加2倍量
生理盐水在冰浴中制成匀浆。
．6生物样本处理[1]：取2．5项下生物样本0．1
mL，置1mL离心管中，加甲醇0．3mL沉淀蛋白，
涡流混旋30S，1000r／rain离心10min，取上清液
20肛L进样，测定。
2．7 药动学参数的获得：采用3P97药动学软件对
血药浓度一时间数据进行拟合，以理论血药浓度值与
实验测定值的相关系数最大和AIC值最小作为判
断标准，选择适当的房室模型，计算药动学参数。
2．8数据处理：组织含药物量(p-g／g)一测得质量
浓度(ug／mL)×2(mL／g)，计算平均值及标准偏
差，绘制给药后不同时间组织中药物分布柱形图。
3 结果
3．1 方法专属性考察：取大鼠空白生物样本，按
2．6项下方法处理并分析，得到空白样品的色谱图；
将一定质量浓度虎杖苷对照品溶液加入大鼠空白生
物样本中，同法操作，获得相应的色谱图；同法得到
大鼠给药后生物样本色谱图，典型色谱图见图1和
2。在上述色谱条件下，生物样本色谱图中虎杖苷保
留时间为5．8min，虎杖苷与内源性物质分离良好，
无其他峰干扰，理论塔板数不低于5000，虎杖苷与
内源性物质分离度大于2．0。
0 2 4 6 0 2 4 6 0 2 4 6
t／min
1一虎杖苷
1一polydatin
图1 空白血浆(A)、空白血浆加虎杖苷对照品(B)
和血浆样品色谱图(C)
Fig．1Chromatogramsfbl nkplasmasample(A)，
blankplasmasamplespikedwithpolydatin
(B)，andplasmas mple(C)
3．2标准曲线制备：取空白生物样本各0．1mL，置
1mL离心管中，加入一定量的虎杖苷对照品溶液，
涡旋混匀，按预试验结果确定各组织不同的标准曲
线的质量浓度范围，分别制成系列质量浓度的样本，
按2．6项下方法进行样品处理和测定。以虎杖苷在
万方数据
中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·237·
o 2 4 6 0 2 4 6 0 2 4 6
t|min
1一虎杖苷
1一polydatin
图2空白肝脏(A)、空白肝脏加虎杖苷对照品(B)
和肝脏样品色谱图(C)
Fig．2Chromatogramsofbl nkliversample(A)。
blankliversamplespikedwithpolydatin(B)，
andliversample(C)
生物样本中的质量浓度(p-g／mL)为横坐标，峰面
积为纵坐标，经线性回归求得回归方程。分别为血
浆：Y一5．876×10X一0．0098，r一0．9994(卵一
9)；心脏：Y=5．282×10-5X+ ．0368，r一0．9995
(以=8)；肝脏：Y一5．608×10-5X+0．0028，r一
0．998(胛=7)；脾脏：Y一4．974×10-5X+0．084
8，厂一0．9993(胛一9)；肺：Y一5．009×10-5X+
0．0726，r=0．9975(咒一7)；肾脏：Y一5．421×
10_X+0．0222，r一0．9954(咒=7)；胃：Y一
5．480x10一X一0．0066，r一0．9967(胛一6)；小
肠：Y一5．552×10一X一0．0044，r一 ．9993(卵一
6)；睾丸：Y=5．532x10_5X+0．0057，，．一0．9976
(行一6)；脑：Y一5．216×10_5X+ ．0418，，．一
0．9998(n=7)。
根据回归方程，血浆中虎杖苷测定的线性范围
为0．076～12．125p．g／rnL，定量下限(S／N>5)为
0．015／*g／mL；心脏、肺、脑中虎杖苷测定的线性范
围为0．152～6．063,ug／mL，定量下限为0．013P-g／
mL；肝脏、肾脏、胃、小肠中虎杖苷测定的线性范围
为0．152～3．031弘g／mL，定量下限为0．021弘g／
mL；脾脏中虎杖苷测定的线性范围为0．152～
12．125／*g／mL，定量下限为0．019>g／mL；睾丸中
虎杖苷测定的线性范围为0．152～1．213弘g／mL，
定量下限为0．015pg／mL。
3．3 回收率与精密度试验：按3．2项下同法配制
虎杖苷在组织匀浆样品中的高、中、低3个不同质
量浓度的质量控制(QC)样品，按2．6项下同法处
理，用其峰面积与相应对照品溶液直接进样得到的
峰面积进行比较，计算绝对回收率。将组织样品测得
的峰面积代人各自的标准曲线方程，求出虎杖苷的
质量浓度，根据测得值与加入值之比计算其相对回
收率。高、中、低3种质量浓度的组织样品的绝对回
收率均高于70％，相对回收率均高于90％，RSD均
小于15％。配制虎杖苷在各组织样品中的高、中、低
3个不同质量浓度的QC样品，每个质量浓度平行
做5份，连续测定3d，随行标准曲线，计算QC样品
的测得质量浓度，求得各组织样品测定方法的精密
度，日内及日间精密度RSD均小于15％。
3．4药动学研究结果：大鼠ig给予虎杖有效部位
后，血药浓度一时间曲线经拟合后，发现大鼠以50
mg／kgig给予虎杖有效部位后，虎杖苷在大鼠体内
的药动学行为符合二室开放模型；主要药动学参数
见表1，血药浓度一时间曲线见图3。
表1大鼠堙给予虎杖有效部位后主要药动学参数
(；±s，n一6)
Table1 Pharmacokineticparametersof xtractf erig
administrationtorats(；±s，n一6)
二、
-
2·5
g 2．0
望1·5
盖1·0
耍0．5
警0．0
图3大鼠ig虎杖有效部位后平均血药浓度一时间曲线
(j±S，n一6)
Fig．3Meanplasmaconcentration—timecurveofextract
afterigadministrationtorats(；±s，n一6)
3．5虎杖苷(ig给药)在大鼠体内的分布情况：大
鼠ig给予虎杖有效部位后10、30、120min的组织
分布实验结果见图4。结果表明，大鼠ig给予虎杖
苷后，组织分布迅速，10或30rain各组织中虎杖苷
浓度即达峰值，单位组织中以脾、心、肺、胃中分布较
高，肝、脑、肾次之，小肠、睾丸组织中分布再次之。
4讨论
4．1药动学：对SD大鼠一次性ig虎杖有效部位
后血药浓度一时间曲线呈二室开放模型。从药动学参
数可以看出，虎杖苷口服吸收较快，tmax为(20．80--+
4．37)min；t1脚为(89．84±27．52)min，CL为
(O．42±0．12)L／(kg·rain)，说明虎杖苷在血中清
除较快，虎杖苷在大鼠体内很快消除，不易蓄积中毒。
YL为(20．24±5．92)L／kg，远大于大鼠的体液总
lfllf}、、
万方数据
·238· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
障，验证了虎杖苷可对一些因素引起的脑损伤起到
保护作用跚。虎杖苷在睾丸中也有分布，10rain即
达峰浓度，这显示虎杖苷也可通过血睾屏障，因此虎
杖苷对生殖器官的作用在今后的临床研究中需要引
起高度的重视，监测其不良反应。另外，在研究药物
体内分布的同时，还应探索其药理作用的本质，尤其
是对某些在体内发生转化的药物，应将其分布与结
图4大鼠ig虎杖有效部位(50mg／kg)后的 构转化及作用机制研究结合进行，从而扩大药物的
组织分布(i±s，n一6) 用途，提高药物作用的选择性，并可以加强对药物不
Fig·4Tissuedistributionofextractf erigadminis一 良反应的防范。
trationt rats(50mg／kg)(善±s·押一6’ 4．3在组织检测当中未检测到虎杖苷的代谢物，在
容积，表明虎杖苷可能与组织大量结合，而与血浆蛋 各组织中的代谢产物还有待采用灵敏度更高的检测
白结合较少。组织分布研究结果也证实了这一推测。 仪器进行研究。
4·2组织分布：药物在体内的分布与药理作用有密 4．4本实验首次研究了虎杖苷在大鼠体内的组织分
切关系，组织分布决定了药效的强弱和作用的持续 布，色谱分离良好，无其他色谱峰的干扰。采用RP一
时间。大鼠ig虎杖有效部位后，经血液循环流经组HPLC法测定组织匀浆中虎杖苷的质量浓度，样品预
织而分布于各组织中。组织分布实验研究发现，随着 处理方法简便快速，力-N#N性强，结果准确。
时间的变化，各组织中的药量呈动态分布，给药后 R。f。，。n。。。：
10或30min时各组织中的药量即达到最高，然后 [1]LinJH，LiXH，TangYN，et以HPLCDeterruinationand
逐渐下降。大鼠ig虎杖苷后，以脾脏、心脏、肺中虎 蒜n分et析ic杂st志ud)y，02f。pol，olyd2alti(n5)in：p3i295埘I-J]．8．c1^⋯川％””
杖苷的量最高，这可能与心脏、脾脏中血管丰富，血 [2]TianJW，YangJx，FuFH．以以Protectiveeffectof
流量大有关。在给药后30rain虎杖苷在脑组织中分 ：o，ly．daotHin[J]aga．i“美iratP三象甜mBito删cho(n中dri国a药inj理ury学器冀
布也较丰富，可见虎杖苷经一定时间可透过血脑屏 2003．19(】1)．1287—1289．
黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖一再灌注损伤的保护作用
朱陵群1，李伟华2，王硕仁1，牛福玲1，崔巍1，李澎涛3
(1．北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室，北京100700；2．北京佑安医院，北京100054；
3．北京中医药大学基础医学院，北京100029)
摘 要：目的 观察黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖一再灌注损伤的保护作用，在细胞水平阐明黄芩苷治疗脑缺血一再灌
注损伤的作用机制。方法选用SH—SY5Y神经细胞，采用缺氧一复氧结合缺糖一复糖的方法，对其进行攻击，模拟人
体神经细胞的缺血一再灌注损伤，观察黄芩苷对此损伤的治疗作用。结果 缺氧、缺糖8h结合复氧、复糖12h对神
经细胞可造成明显损伤，导致SH—SY5Y细胞线粒体的活性下降，凋亡率明显上升；而黄芩苷可以显著减轻上述损
伤。结论 黄芩苷对缺氧、缺糖一再灌注损伤的神经细胞有保护作用。
关键词：黄芩苷；SH—SY5Y；缺氧缺糖一再灌注损伤
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)02—0238一04
Protectionofbaicalinonoxygen—glucosedeprivationndreperfusioninjuryi neurons
ZHULing—qunl，LIWei—hua2，WANGShuo—renl，NIUFu—lin91，CUIWeil，LIPeng—ta03
(1．TheK yLaboratoryofChineseInternalMedicine，MinistryofEducation，DongzhimenHospital，BeijingUn versity
收稿日期：2006—04—28
基金项目：国家重点基金研究发展规划(973)项目(G1999054404)
作者简介：朱陵群(1962一)，男，湖南长沙人，主任医师，研究员，硕士生导师，主要从事中西医结合防治脑血管疾病的临床与应用基础研
究及进行中药新药开发、设计、药理(药效)的研究。
Tel：(010)840131961366 276736E—mail：lingqunzh@vip．sina．corn
万方数据
虎杖苷在大鼠体内的药动学特点和组织分布研究
作者： 吕春艳， 张兰桐， 袁志芳， 景秀娟， 刘洋， 刘伟娜， L(U) Chun-yan， ZHANG Lan-
tong， YUAN Zhi-fang， JING Xiu-juan， LIU Yang， LIU Wei-na
作者单位： 河北医科大学药学院,药物分析教研室,河北,石家庄,050017
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(2)

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