全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·551·
mg／kg能剂量依赖性降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠
和正常小鼠血糖，提示Jat也是黄连治疗糖尿病的
有效成分之一。但其降糖作用不及同量的Ber，推测
可能是Ber对a肾上腺素受体的阻断作用强于
Jat[7]，而更强地降低交感神经张力，抑制肾上腺皮
质功能，从而抑制糖异生。为进一步研究Jat与Ber
以天然比例配伍是否存在相互作用，本实验又观察
了按Ber和Jat天然比例配制的模拟方对小鼠血糖
的影响。结果表明，模拟方的降糖作用与单用同剂量
的Ber相当，提示Ber和Jat以天然比例配伍未见
明显协同或拮抗作用，但不能排除黄连中可能还存
在其他的重要成分与Ber、Jat之间有着复杂的相互
作用，或Ber和Jat之间存在更佳的比例组合，仍须
进一步研究验证。而HLD的降血糖作用比单用
Ber、Jat和模拟方都强，恰好提示了黄连中除了Ber
和Jat之外，可能还有其他成分起着重要作用。
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川芎嗪含药血清对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用
丰俊东，徐晓玉
(重庆医科大学中医药学院，重庆400050)
摘 要：目的 观察川芎嗪(TMP)含药血清对人肝癌细胞HepG：增殖的影响。方法选用SD雄性大鼠30只，
随机分成3组，分别ipTMP143．0、71．5mg／kg、生理盐水0．8mL，制备TMP大、小剂量组及生理盐水组含药血
清，采用KP—HPLC法测定含药血清中TMP的质量浓度。将各组含药血清作用于人肝癌细胞HepG。48h，MTT
法测定不同质量浓度TMP含药血清对人肝癌细胞HepG：增殖的抑制作用。结果TMP大剂量组血清(20％、
10％、5％)，TMP小剂量组血清(20％、10％)对人肝癌细胞HepG。增殖较生理盐水组有显著抑制作用(P<
0．05)，最高抑制率可达46．1％。结论TMP含药血清对人肝癌细胞HepG。增殖有一定的抑制作用。
关键词：川芎嗪；人肝癌细胞HepG：；高效液相色谱；MTT法
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)04—0551—03
Inhibitionoftetramethylpyrazine-containingserumonproliferation
ofhumanlivercancerc llsHepG2
FENGJun—dong．XUXiao—yu
(CollegeofTraditionalChineseMedicine，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400050，China)
Abstract：ObjectiveToobserveth ffectsofratetramethylpyrazine(TMP)一containingserumOD
theproliferationofhumanlivercancerc llsHepG，．MethodsThirtySDmaleratsweredividedintothree
gr9upsrandomlyandtheserumwascollectedafteripTMPwiththedosageof143．0。71．5mg／kgorNS
O．8mLtopreparethTMP—containingserumlarge—andsmall-dosegroupsandNSgroupaswell．Are—
versed-phasehighperformanceliquidhromatography(RP—HPLC)methodwasusedtodeterminee
TMPconcentrationinratserum．Humanliverca cercellsHepG2wastreatedwithratTMP—containing
serumfor48h．InhibitionoftheTMP—containingserumo proliferationofHepG2wasdetectedbyMTT
收稿日期：2004—07—18
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30070915)
作者简介：丰俊东(1978一)，女，黑龙江人，在读博士，主要从事中药药理研究。
Tel：(023)89014331E—mail：FengJunDon92001@sohu．corn
万方数据
·552· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
assay．ResultsTheserumoflargedoseTMP(20％，10％，and5％)andsmalldoseTMP(20％and
10％)couldobviouslyinhibitHepG2multiplication(PConclusionTheTMP—containingserumcaninhibittheproliferationofhumanlivercancercellsHepG2．
Keywords：tetramethylpyrazine(TMP)；humanlivercancercellsHepG2；HPLC；MTTassay
中医的活血化瘀法是治疗肿瘤的重要方法之
一。我国是肝癌的高发区之一，从中医理论出发，“气
滞血瘀”是其病机关键。川芎活血行气，是搜风定痛、
调经活血的常用药，川芎嗪(TMP)是其有效成分
之一。在以往的实验中已证实TMP具有抑制黑色
素瘤生长[1]、体外抑制血管内皮细胞增殖等作用[2]。
本实验采用MTT法观察TMP对人肝癌细胞Hep
G：增殖的影响。
1材料与方法
1．1材料：盐酸川芎嗪注射液，天津金耀氨基酸有
限公司，40mg／2mL，批号0206151。川芎嗪对照
品，购自中国药品生物制品检定所，批号
817200104。氯化钠注射液，西南药业股份有限公司，
批号66040023。人肝癌细胞株HepG。由重庆医科
大学超生研究所引进。RPMI一1640培养基(Gibco
产品)，新生小牛血清(杭州四季青公司)，胰蛋白酶
(Amresco公司)，MTT(Sigma公司)。甲醇(色谱
纯)。Agilent1100高效液相色谱仪、MettlerTo do
AGl35(十万分之一)电子天平、超声清洗器。
1．2含药血清制备：将体重250～400g清洁级SD
雄性大鼠(购自第三军医大学大坪医院实验动物中
心)30只，随机分成3组，即TMP大、小剂量组和
生理盐水组(阴性对照组)，3组大鼠体重经统计学
处理差异无显著性(P>o．05)。TMP大、小剂量组
分别ip盐酸川芎嗪注射液143．0、71．5mg／kg，生
理盐水组每只ip生理盐水0．8mL，各组每日ip1
次，连续7d。末次给药后0．5h，3．5％水合氯醛
(O．9mL／100g)麻醉，在严格无菌条件下经股动脉
取血。血液经4℃静置过夜后，4℃、3000r／min离
心10min，分离血清，取上清液，同组血清混合，再经
0．45／2m滤膜抽滤除菌，分装，一20℃保存备用。
1．3 RP—HPLC法测定血清中TMP[31
1．3．1色谱条件：色谱柱LichrospherC18(250mm×
4．6mm，5弘m)；流动相为含0．5mmol／L三乙胺
的50％甲醇水溶液；体积流量：1．0mL／min；检测
波长：279nm；柱温：30℃；进样量：20弘L；理论塔板
数按川芎嗪峰计不低于8000。
1．3．2 血清预处理：取TMP大剂量组含药血清
0．5mL，加4倍体积甲醇，摇匀，超声震荡5min，
1000r／min离心10min，将溶液转移至烧杯中，空
气中挥去溶剂，再加0．5mL甲醇复溶，备用。
1．3．3 线性关系考察：精密称取JlI芎嗪对照品
15．1mg，加甲醇溶解并稀释至10mL量瓶中，作为
对照品储备液。分别精密量取该储备液0．5、1．0、
2．0、3．0、4．0mL至10mL量瓶中，用甲醇稀释至
刻度，摇匀。在前述色谱条件下进样分析。
1．3．4样品测定：取1．3．2项处理后的血清样品
进样检测。
1．4 细胞培养：人肝癌细胞株HepG。常规培养于
含10％小牛血清、100U／mL青霉素、100U／mL
链霉素的RPMI一1640培养液中。置CO。恒温培养
箱(37℃、5％CO。、饱和湿度)中常规培养，3～4d
传代1次。
1．5 MTT法检测细胞增殖抑制：将处于对数生长
期的HepG。细胞进行消化，以1×104／mL(含20％
新生小牛血清的RPMI一1640培养基)接种于96孔
细胞培养板中，每孔200肚L，培养24h使细胞贴
壁。弃原液，换用含0．5％新生小牛血清的RPMI一
1640培养液，培养24h。弃旧液，换用TMP大、小
剂量组及生理盐水组大鼠血清，分别以体积分数
20％、10％、5％血清作用于细胞。并设立空白对照
组(用含20％新生小牛血清的RPMI一1640培养液
培养)。每组设6个重复孑L。作用48h后，96孔培
养板离心，弃原液，每TLJm入200弘L无血清的RP—
MI一1640培养液及20弘LMTT液，继续孵育6h。
离心弃上清液，每孔加入DMSO200弘L，振荡15
rain，以酶联免疫检测仪在590nm波长下测定各孔
吸光度(A)值H’5]，计算细胞生长抑制率。
细胞生长抑制率一(1--Ag验／A对照)x100％
1．6统计学处理：各项参数均以z±s表示，数据用
SPSSll．0软件分析，并用Newman—Keuls和Dun—
nett’S进行组间比较。
2结果
2．1 RP—HPLC法测定血清中的TMP：以TMP
质量浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标进行
回归计算。回归方程为Y一0．14X一0．75，，．一
0．9993。表明TMP在75．5～604．0／19／mL与峰面
积积分值呈良好线性。血清样品的峰面积积分值为
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·553·
2755．8，根据回归方程计算得TMP大剂量组血清
中含TMP385．1Fg／mL。色谱图见图1。
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 8 1012 14
t|min
*一川芎嗪
*一TMP
图1川芎嗪对照品(A)和血清样品(B)的HPLC色谱图
Fig．1HPLCchromatogramsfTMPreference
substance(A)andserums mple(B)
2．2 TMP对人肝癌细胞HepG：的增殖抑制作用：
结果显示，生理盐水组各体积分数血清之间比较，A
值差异不显著(P>0．05)，TMP大剂量组血清
(20％、10％、5％)，TMP小剂量组血清(20％、
10％)与生理盐水组相比对HepG：细胞增殖有显著
抑制作用(P<0．05)，TMP小剂量组血清(5％)与
生理盐水组比较差异不显著(P>o．05)。说明TMP
大剂量组血清(20％、10％、5％)，TMP小剂量组血
清(20％、10％)抑制HepG。细胞增殖。见表1。
表1 TMP含药血清对人肝癌细胞HepG：
增殖的抑制作用(席一6)
Table1 InhibitionofTMP—containingserum
onproliferationofHepG2cells(n一6)
组别 血清体积分数／％ A(=士s)抑制率／％
与空白对照组比较：。P<0．05
与生理盐水组比较：AP<0．05
+P<0．05vsblankcontrolgroup
▲P<0．05vsNScontrolgroup
3讨论
近年来TMP应用于治疗肿瘤的报道越来越
多，TMP被用于治疗肝炎，其对肝癌细胞增殖的影
响尚未见报道。本实验采用血清药理学方法，它可以
反映药物中可吸收部分的直接作用，药物代谢产物、
药物诱生的机体内源性物质的间接结果，最大程度
地模拟体内环境，其所得结果较直接体外药物实验
更为可信。在血药浓度高峰期取血，采用新鲜的含药
血清。结果显示TMP大剂量组血清(20％、10％、
5％)、TMP小剂量组血清(20％、10％)具有抑制
肝癌细胞HepG。增殖的作用，最高抑制率可达
46．1％。以往血清药理学研究中对于血清中有效作
用成分的浓度多未检测，这对药理学与毒理学研究
是不全面的。而且机体的不同状态对药物有不同的
敏感性，血清中的药物浓度、代谢产物和诱生内源性
物质的质和量会有所不同，需要进行血清中有效成
分的定量分析。本实验在这方面进行尝试，使实验结
果更为全面可靠。TMP在体内可直接吸收，以原形
直接发挥作用，本实验采用HPLC法对TMP大剂
量组含药血清中TMP进行检测，结果显示TMP
质量浓度为385．1弘g／mL，则TMP大剂量组血清
20％、10％、5％作用于ECV304细胞的TMP质量
浓度分别为77．0、38．6、19．3pg／mL。对其通过何
种途径发挥作用有待进一步研究。TMP无明显毒
性，能抑制人肝癌细胞的增殖，提示TMP在治疗肝
癌方面可能具有较好的应用价值。
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万方数据
川芎嗪含药血清对人肝癌细胞Hep G2增殖的抑制作用
作者： 丰俊东， 徐晓玉， FENG Jun-dong， XU Xiao-yu
作者单位： 重庆医科大学中医药学院,重庆,400050
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(4)
被引用次数： 10次

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