全 文 ：·1726· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
用成分有关。由于我国是乙肝病毒高发地区，对叶下
珠的需求与日俱增，加之对叶下珠的组织培养技术
研究还甚少，利用叶下珠愈伤组织培养技术来提取
愈伤组织药用有效成分有待于进一步研究，能否进
一步通过器官分化途径再生出完整的植物，正在试
验中，以期减少对自然资源的采挖压力。
参考文献：
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空心莲子草的高效毛细管电泳指纹图谱研究
师磊，朱红，王佳馨，马 卓，刘焱文‘
(湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室，湖北武汉430061)
摘要：目的利用高效毛细管电泳技术建立空心莲子草药材的指纹图谱。方法采用60am×75pm毛细管柱，以
50mmol／L硼砂溶液一50mmol／L磷酸盐溶液为缓冲液．运行电压为20kV，检测波长220nm。柱温25℃。结果建
立的指纹图谱中共有18个共有峰，且方法学考察符合规定的标准。结论该法准确简便，可作为控制空心莲子草药
材内在质量的有效手段。
关键词：空心莲子草；高效毛细管电泳；指纹图谱
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1726-04
HPCEFingerprintofAlternantheraphiloxerodes
SHILei，ZHUHong，WANGJia—xin，MAZhuo，LIUYall—wen
(Provincea dMinistryCo—EstablishedKeyLaboratoryofResourceSeienceandComplexPrescriptioninTraditionalChinese
Medieine．MinistryofEducation，HubeiCollegeofTraditionalChineseMedicine，Wuhan430061，China)
Abstract：ObjectiveToin estigatethehighperformancecapillaryelectrophoresis(HPCE)
fingerprintofAl ernantheraphiloxerodes．MethodsSeparationwasperformedona 60emX75pm
uncoatedcapillarywith50mmol／Lboratesolution一50mmol／Lphosphatesolution(pH8．76)asPCE
buffer．Therunningvoltagewas20kV，thed tectionwavelengthwas220amandtemperature25℃．
ResultsFingerprintwasestablishedwith18commonpeaks．ConclusionThemethodiSaccurate。
simple。andsuitabletothequalitycontrolofA．philoxerodes．
Keywords：Alternantheraphiloxerodes(Mart．)Griseb．；HPCE；fingerprint
空心莲子草Alternantheraphiloxerodes
(Mart．)Griseb．为苋科莲子草属(Alternanthera
Forst．)多年生宿根草本植物，又名空心苋、螃蜞菊、
水花生等[1]。曾收载于《中国药典》1997年一部，具
有清热解毒、凉血利尿的功效。现代药理研究表明，
空心莲子草具有抗流感病毒[z]、流行性出血热病
毒[3]、抗乙型肝炎病毒[4]等多种抗病毒药理作用。空
心莲子草药材在我国资源丰富，分布广泛，各地品质
差异较大。然而，到目前为止，对于空心莲子草药材
的品质研究尚未见报道，本实验室运用高效毛细管
电泳技术对采自湖南、湖北、江苏、浙江、江西、福建
等6个省份10个不同地市的空心莲子草进行指纹图
收稿日期：2008—03—06
蕹喜蓄异：霈家i磊自然(1科98学1--基)i981餐器需晏箔艾j翌舅翥北中医学院在读硕士研究生，主要从事中药及其制剂有效成分的研究。作者简介：师 ，男．河南安阳人，现为湖北中医学院在读硕士研究生，主要从事中 刑 敢 研究。
Tel：(027)88920834E．mail：shilei2967627@163．corn
-通讯作者刘嶷文．教授，博士生导师。Tel：(027)62623577E—mail：ywliu@puplic．wh．hb．crl
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万方数据
中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 727·
谱研究，旨在找出空心莲子草药材在不同生长地区
及不同生态环境下的品质差异，为空心莲子草的质
量评价提供一定的科学依据。
1仪器与试药
P／ACEMDQ毛细管电泳仪(美国贝克曼库尔
特公司)，包括32Karat工作站，二极管阵列紫外检
测器，自动进样器，未涂层毛细管总长60am，有效长
度45am，内径75弘m；BP一211D型十万分之一分析
天平；万分之一分析天平(METTLERTOLEDO
AL204)。
对照品穆坪马兜铃酰胺、异茜草素，莲子草素均
为本实验室自制、HPLC法测定其质量分数98％以
上。实验用水为二次蒸馏水，甲醇、醋酸乙酯、石油醚
为分析纯(上海振兴化工一厂)。空心莲子草分别采
自湖北、湖南、江苏、浙江、江西、福建6省，经湖北中
医学院中药鉴定教研室吴和珍副教授鉴定为苋科莲
子草属植物空心莲子草。
2方法与结果
2．1供试品溶液的制备：取空心莲子草粉末(过4
号筛)10g，精密称定置于锥形瓶中，加入甲醇溶液
i00mL精密称质量，浸渍1h后，40℃超声提取30
min，室温静置20min，再称定其质量，用甲醇溶液补
足减失质量，摇匀，静置后滤过，取续滤液75mL置
于蒸发皿中，水浴加热挥去甲醇，量取蒸馏水20mL
溶解，转移至分液漏斗中，先以石油醚萃取3次(50、
50、40mL)，弃去石油醚液，水液再加入醋酸乙酯萃
取3次(50、50、40mL)，弃去水液，合并醋酸乙酯液，
水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至10mL，0．45弘m
微孔滤膜滤过，即得。
2．2对照品溶液的制备：精密称取穆坪马兜铃酰胺
1．35mg、异茜草素1．01mg、莲子草素1．22mg，置
于25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，
0．45弘m微孔滤膜滤过，即得。对照品高效毛细管电
泳图谱见图1一A。
2．3毛细管电泳条件：未涂层毛细管柱(60CITI×75
pm，有效长度为45cm)，以50mmol／L硼砂溶液一50
mmol／L磷酸盐溶液(pH8．76)为运行缓冲液，运行
电压为20kV，检测波长220rlm，柱温25℃。进样前，
毛细管先用0．1mol／LNaOH、重蒸水各冲洗3min，
再以运行缓冲液冲洗2min。压力进样，压力为
0．5kPa，进样时间为5s。
2．4指纹图谱的确立
2．4．1共有指纹峰的建立：按照上述供试品溶液制
备方法，将所采集到空心莲子草药材制成供试品溶
液，每个样品进样2次，记录时间1h，发现电泳图在
25min后没有峰出现，又通过空白对照试验发现前
8min内为溶剂峰，故记录8～25min内电泳图。通
过对药材与对照品二者的毛细管电泳图谱进行比
较，确认了3号峰为穆坪马兜铃酰胺，6号峰为异茜
草素，7号峰为莲子草素。以异茜草素为参照物，计
算10批药材电泳图中各峰的相对迁移时间，通过对
相对迁移时间比较与RSD计算，确定了18个共有
峰。药材高效毛细管电泳图谱见图1一B。
0 5 10 15 20 250
t／rain
图1
Fig．1
对照品(A)和药材样品(B)HPCE图
HPCEFingerprintspec raof eference
substance(A)andA．philoxerodes(B)
2．4．2精密度试验：取同一供试品溶液，连续进样5
次，共有指纹峰的相对保留时间RSD<2．84％，共有
峰相对峰面积RSD<3．03％。
2．4．3重现性试验：取同一产地药材按供试品溶液
制备方法平行制备空心莲子草供试液5份，在高效
毛细管电泳仪上进样分析，共有峰相对保留时间
RSD<2．25％，共有峰相对峰面积RSD<3．78％。
2．4。4稳定性试验：取一新制备的供试品溶液于0、
2、4、8、12、24h测定其峰面积，共有峰相对保留时
间RSD<2．05％，共有峰相对峰面积RSD<3．32％。
2．4．5不同产地空心莲子草药材的指纹图谱比较：
取10批不同产地空心莲子草药材，制成供试品溶
液，然后按照上述毛细管电泳色谱条件测定，结果见
表1、2及图2。
3讨论
3．1 检测波长的选择：本实验通过对一供试品进行
紫外检测器全波长扫描，确定了214、220、274及325
rim。而后，通过毛细管电泳仪的检测，发现在检测波
长220D．m下，基线比较稳定，出峰较多，且各峰之间
的分离度较好，确定220nm为本实验的检测波长。
3．2运行缓冲液的选择：本实验通过对硼砂缓冲
液(10～100mmol／L)、磷酸盐缓冲液(10～100
mmol／L)、硼砂一磷酸盐缓冲液进行比较，发现硼砂一
磷酸盐缓冲液分析效果最好，电泳图中出峰最多。再
通过考察缓冲液pH值8．50、8．58、8．68、8．76、9．18
万方数据
·1728· 中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
哀1不同产地空心莲子草的指纹图谱中共有峰的相对保留时间
Table1 RelativeretentionmefcommonpeakinfingerprintofA。philoxerodesf mifferenthabitats
相对保冒时同
；●：‘_f～
一
峰1 峰2 峰3 峰4 峰5 峰6 峰7 峰8 蜂9峰lo峰11峰12峰13峰14峰15峰16峰17峰18
福建福州
福建厦门
江西九江
江西鹰潭
湖南怀化
湖北武汉
湖北黄石
浙江宁波
扛苏徐州
江苏南京
0。7120．7860。8210．8450．9431．0001．0741．1571．2161．2651．3301．3461．3991．4441．5141．5461．5741．623
0．7110．7870．8350．8340．9461．0001．0861．1551．2191．2761．3261．3481．3941．4351．5291．5421．5431．646
0．7250．7340．8330．8550．9391．000I．076I．1581．2441．2631．3181．3641．3761．433I．5441．5461．5251．631
0．7130．7810．8210．8490．943I．0001．0701．1591．2451．2641．3341．3401．3991．4341．5151．546I．5551．642
0．7120．7890．8310．8870．9441．000I．0821．1541．Z131．2641．3261．3431．3951．4321．5221．5361．5621．655
0．7100．7860．8210．8450．9431．0001．0871．1571．2161．2651．3301．3461．3991．4441．5141．5461．5741．623
0．7120．7890．8310．8870．9441．0001．0721．1541．Z131．2641．3261．3431．3951．4321．5621．5461．5621．655
0．7290．7760．8470．8590．9411．0001．0741．1481．249I．261．345I．3271．3931．4341．535I．5431．522I．643
0．7100．7810．8390．8670．9501．0001．0721．151．2321．265I．3271．3441．3981．4131．5421．5461．5451．629
0．7140．7810．8210．8490．9431．0001．0701．1591．2451．2641．3341．3401．3991．4341．5151．5461．5551．642
表2不同产地空心莲子草的指纹图谱中共有峰的相对峰面积
Table2 RelativeretentionpeakareaofcommonpeakinfingerprintofA．philoxerodesf mdifferenthabitats
产地
相对峰面积
峰1 峰2 蜂3 峰4 峰5 峰6 峰7 峰8 峰9峰10峰11蜂12峰13峰14蜂15埤16峰17峰18
福建福州
福建厦门
江西九江
江西鹰潭
湖南怀化
湖北武汉
湖北黄石
浙江宁波
江苏徐州
江苏南京
0．2480．3271．0370．1110．5181．0002．4101．7060．1022．4463．2513．3901．4471．3620．6700．0270．2761．043
0．0810．2520．4510．0720．2691．000．9850．5870．1860．6251．4991．0500．9190．0920．0850．0990．0930．873
0．2050．2510．9740．1650。6181．000l。9261．2190．4492．0150．7355．1210．4470．3580．3860．2140．1961．096
0，0750．2480．4610．0720．2681．0000．9630．5320．1430．6391．4741．0680．9230．1250．0780．1210．0830．882
0．2560．3361．1270．1310．5381．0002．3461．5160．091．3263．0913．1291．661I．3210．5570．110．221．171
0．2440．2230．6420．2240．7431．0001．7471．3590．5192．1160．8994．3410．5820．3430．3570．3540．1181．236
0．0820．2450．4670．0650．2561．000．9560．5770．1450．645I．5031．0580．9200．1140．0930．1020．0910．863
0．2010．3151．0970．0810．4861．0002．3571．9240．1372．1163．5463．6331．5741．3150．8420．5340．6421．257
0．1450．4530．6420．1320．4251．0001．4661．4220．472．4252．6571．1430．4320．4380．6320．4340．6341．543
0．2430．5271．4240．4230．2641．0002．3431．1630．4232．2423．3463．5431．4541．6430．3530．3630．4261．426
0 5 10 15 20 25
t／min
图2不同产地10批样品指纹图谱叠加固
Fig．2HPCEFingerprintspectraoftenbatches
ofA．philoxerodesf mifferenthabitats
及9．50时的分离效果。发现pH值在8．76时，各组分
分离度最高，且具有良好的重现性。因此，本实验采
用50mmol／L硼砂溶液用50mmol／L磷酸盐溶液
调节pH至8．76。
3．3运行电压的选择：本实验考察了分离电压分别
为8、12、16、20、25kV时的电泳分离效果，发现在8、
12kV下分离速度比较慢，分析时间延长到45rain
以后且分离效果不佳。在16、25kV下，虽然分析时
间缩短，但是分离效果不好，且基线飘移严重。在20
kV下，25min之内可以较好地完成分离，且重现性
好，故最终确定分离电压为20kV。
3．4共有峰面积与总峰面积比值的计算：对各样品
的峰面积进行统计，计算各样品指纹图谱中的18个
共有峰的总面积各占总峰面积的比值。结果显示所
有样品的共有峰总面积占总峰面积的比值均大于
90％，满足指纹图谱的技术要求。
3．5不同产地空心莲子草指纹图谱的比较：由表1、
2可以看出，不同产地空心莲子草药材虽然在化学
成 组成上有较好的相似性，但在组成成分的量上
确有较大差异，尤其表现在10、11、12号共有峰上。
江苏、浙江地区这3种化合物在同一植物中量接近，
且每种化合物地区之间量相差不大；福建、江西地区
这3种化合物在同一植物中量相差很大，且每种化
合物地区之间量也有较大差距。这说明空心莲子草
药材的品质受地域和生态环境的影响很大，不同地
区之间的药材品质差异较大。
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 729·
参考文献：
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甘肃道地黄芪种苗的离体快繁研究
张延红1，何春雨2．，刘晓博1，杜彼1，陈红刚1
(1．甘肃中医学院药学系，甘肃兰州 730000，2．甘肃省冬小麦研究所，甘肃兰州730020)
摘 要：目的 筛选出适于无菌短枝快繁的培养基及研究试管苗移栽驯化技术。方法 以MS为基本培养基添加不
同质量浓度的BA和NAA，对黄芪的不同外植体进行组织快繁研究。结果一年生植株的带芽茎段在MS+BA0．1
mg／L培养基上短枝长势最好；一年生植株的新生芽和两年生植株的带芽茎段，在MS+BA0．8mg／L+NAA0．1
mg／L培养基上均能产生丛生芽。将短枝接种于1／2MS+0．1％活性炭或1／2MS+NAA1．5mg／L+0．1％活性炭的
培养基上，经诱导产生有效根。小苗经沙培驯化后。移栽成活。结论利用蒙古黄芪的无菌短枝快繁优良种苗是一
种经济、快速、可行的育苗方式。
关键词：黄芪，离体快繁，无菌短枝；炼苗；移栽
中围分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1729一04
黄芪AstragalusmembranaceusBge．var．
mongholicus(Bge．)Hsiao为豆科黄芪属多年生草
本植物，以根人药，是常用大宗中药材[1]，也是甘肃
道地药材之一。甘肃陇西就素有“中国黄芪之乡”的
美称。近年来，由于市场需求量逐年增加，野生资源
El渐匮乏，采用育苗移栽进行人工栽植成为黄芪的
主要来源[2]。但是黄芪生长周期长、种子硬实现象严
重[3]，且易受黄芪小蜂危害，所以播种时用种量大、
繁殖系数低，造成药农经济成本增加。同时，黄芪种
植历史悠久，传统栽培中往往不重视优良性状的选
育，存在性状变异多、品系混杂严重等现象，对药材
产量和品质产生不良影响[4]。目前，陇西地区育苗也
出现了一定困难，一年生小苗易遭受病虫侵染，导致
根部出现黑斑甚至断根。因此，寻找一种新的育苗方
式迫在眉睫。
利用植物组织培养的方法，采用黄芪带腋芽及
顶芽的茎段作外植体，进行植物离体快繁，可于短期
内获得大量遗传性状一致的幼苗，比用种子繁殖节
省育苗空间和成本，成苗迅速且便于集中精细管
理[5]。虽然国内外对黄芪的组织培养有一些报道，但
主要研究愈伤诱导和植株再生，利用短枝进行快繁
种苗未见报道。本试验旨在建立黄芪无菌短枝快繁
的育苗体系。
1材料与方法
1．1材料采自甘肃陇西县马河镇产一年和二年生
黄芪，经林丽高级实验师鉴定，剪取实生苗的新生芽
及地上茎段。
1．2短枝诱导：用软毛刷及洗衣粉水轻轻刷洗黄芪
枝条，然后用流水冲洗12h。在超净工作台上先用
75％乙醇漂洗30S，然后用2％次氯酸钠溶液灭菌10
min，再用0．1％升汞溶液灭菌10min，最后用无菌水
冲洗5次，接种于添加不同质量浓度6-BA及NAA
的培养基上。将材料置于室温25℃、光照时间13
h／d左右、光照强度2000Ix的条件下培养。
1．3根的诱导：当短枝长到6-8cm高时，切除基
部较老化部分，然后将形态学下端近节处插入生根
培养基中，在与1．2项相同的培养条件下诱导生
根[6]。生根培养基为1／2MS培养基添加不同质量浓
度NAA和0．1％活性炭。
1．4炼苗和移栽：当短枝基部形成较发达的根系
后，打开瓶塞，炼苗2d，然后轻轻取出小苗，小心洗
去根部的培养基[引，然后将试管苗栽植于蛭石一河
沙一腐殖土(5；4，1)的基质中，用打孔的透明塑料
杯罩住保湿。用半透明塑料膜遮荫，每日喷水2次，
收稿日期：2008—01—11
基金项目：本科生毕业专题专项基金资助
作者简介：张延红(1977一)，女．讲师．硕士，主要从事药用植物育种和组织培养方面的研究和教学工作。
*通讯作者何春雨Tel：13919459087E-mail：hchyr@lzcc．edu．cn
万方数据
空心莲子草的高效毛细管电泳指纹图谱研究
作者： 师磊， 朱红， 王佳馨， 马卓， 刘焱文， SHI Lei， ZHU Hong， WANG Jia-xin， MA
Zhuo， LIU Yan-wen
作者单位： 湖北中医学院,中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室,湖北,武汉,430061
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)
被引用次数： 2次

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8. 林文津.林玉霖.林力强.徐榕青 枇杷叶药材高效毛细管电泳指纹图谱研究[期刊论文]-世界中西医结合杂志
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引证文献(2条)
1.臧鹏.于燕波.赵书武.陈斌 毛细管电泳法建立六味地黄丸指纹图谱[期刊论文]-时珍国医国药 2011(7)
2.孟岩.郑旭光.郑燕.张兰桐 色谱指纹图谱在中药与天然产物研究中的应用[期刊论文]-河北医药 2009(18)

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