全 文 ：·1570· 中草葫ChineseTraditionalandHerl忸lDrugs第38卷第10期2007年10月
的来源并确定为道地药材。
本实验比较了不同提取溶剂(95％乙醇，70蹦乙
醇、45％乙醇、50％甲醇、甲醇)的水浴回流、索氏提
取、超声提取等不同提取方法的提取效果，同时还考
察了不同提取时间的提取效果。结果表明，以甲醇为
提取溶剂，当超声提取20rain时，各色谱峰的响应
值不再增加，且方法稳定，重现性好。
本实验采用200nm作为检测波长。紫菀酮的
结构特殊o]，具有末端吸收。有文献报道口3在316
nm下进行检测，紫菀酮在此波长下无吸收，所得图
谱不能涵盖紫菀中的特征成分。本研究经HPLC—
DAD分析，得到三维全波长紫外扫描图，根据图谱
选择各成分紫外吸收均较强的波长，除突出紫菀酮
色谱峰特征外，也同时突出其他特征。
中药化学成分的多样性与复杂性是其发挥疗效
的物质基础，在其有效成分尚未被阐明的情况下，只
采用单一或少数几个成分做指标进行质量评价，往
往不能全面反映其质量情况。而仅仅通过指纹图谱
又不能阐明其成分的确切含量，本实验以有效成分
之一的紫菀酮为内参照进行定量并结合指纹图谱进
行全面评价，为全面评价中药材质量提供了一种有
效手段。
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牛膝营养器官中蜕皮甾酮的积累动态研究
李金亭“2，滕红梅1，胡正海“
(1．西北大学生命科学学院，陕西西安 710069}2．河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007)
摘要：目的揭示蜕皮甾酮在牛膝不同营养器官中的积累规律。方法高效液相色谱法。结果在牛膝根，茎和
叶3种营养器官中都含有蜕皮甾酮，但不同器官中蜕皮甾酮的量有显著差异。幼嫩的器官中蜕皮甾酮的量较高，随
着营养器官发育成熟，其蜕皮甾酮的量随物候期的变化差异显著。至采收期(11月)时，牛膝营养器官中蜕皮甾酮的
量为t叶>根>茎。结论牛膝根中蜕皮甾酮的量高峰与其产量高峰一致，都在11月初地上部分枯萎时，因此，此
时应为牛滕的适宜采收期，与传统的牛膝采收期相昀合。但此时叶和茎中也古有较高量的蜕皮甾酮，因此，建议对
牛膝地上部分进行综合开发利用。
关键词：牛滕；营养器官；蜕皮甾酮；高教液相色谱
中田分类号：R282．2 文献标识码：A 一文章编号：0253—2670(2007)10—1570—04
Accumulationdynamicofe dysteroneinveg tativeorgansofAchranthesbridentata
LIJin—tin91”。TENGHong—meil．HUZheng—hail
(1．CollegeofLifeSciences，NorthwestUniversi y，Xi’all710069，ChioaI2．CollegeofLifeSciences，
HenanNormalUniversity，Xinxiang453007，China)
Keywords：AchyranthesbidentataBlume；vegetativeorgans}ecdysterone；HPLC
牛膝是苋科的多年生草本植物牛膝Achyran—
thes&dentataBlume的干燥根，主产于河南省古怀
庆府地区。故称为怀牛膝。具有补肝肾、强筋骨、活血
逐瘀、引血下行之功效。牛骧根内含有皂苷类，甾酮
类、多糖类、甜菜碱等多种药用成分，其中蜕皮甾酮
为其主要活性成分之一。蜕皮甾酮广泛存在于80个
科的植物中[“，具有促进蛋白质的合成、抑制由于药
物引起的血糖升高、降低血浆胆甾醇作用、使受损的
收稿日期：2007一Ol—i7
荐妻需异：孽霎霉嚣戛翳絮需蔷嘉爹雯搿娶擗溜嬲茎攀黯嚣‰学研究．Email：Ljt66882004(。126．corn
o埔讯作者胡正拇Tel}(029)88302684
万方数据
中革蒋 ChineseTraditionalandHerbalDrugs尊38卷第10期2007年10月
细胞再生等作用[2“]，与牛膝“补肝肾．强筋骨”功效
相吻合。有关蜕皮甾酮分离鉴定、化学结构和生物活
性及其在不同植物中的分布、积累和测定等方面已
有许多研究报道口~1“，但有关蜕皮甾酮在牛膝营养
器官中的积累规律报道较少。本实验用高效渣相色
谱法对牛膝根、茎、叶在生长发育过程中蜕皮甾酮的
积累规律进行了研究，为牛膝的科学栽培、合理采收
及综合开发利用提供科学依据。
1材料和方法
1．1材料：牛膝AchyranthesbidentataBIume种子
由河南温县农科所提供，于2006年6月23日播种
于西北大学生物园内，7月初出苗。分别于8～12月
每月上旬随机取牛膝全株的根、茎、叶于60℃烘干
后粉碎，过40目筛备用。由于12月气温较低，叶子
已完全干枯脱落，故未取此时期的叶。
1．2仪器与条件：日本岛津LC—lOATvp高效液
相色谱仪，SPD--lOAvp检测器，Class—VP工作站；
色谱柱VP—ODS(150mm×4．6miTl)；流动相为甲
醇一水一冰醋酸<45t 551 0．05)；体积流量0．9mL／
min；室温；检测波长248rim。蜕皮甾酮对照品购于
中国药品生物制品检定所，批号：111638—2000402。
1．3标准曲线的绘制：精密称取蜕皮甾酮对照品适
量，加甲醇溶解配制成Img／mL的对照品溶液。精
密吸取对照品溶液10、30、50、70、120pL，加甲醇定
容至lmL，分别进样20pL，重复3次，以峰面积的
^
，． 八
平均值为纵坐标，质量为横坐标，得蜕皮甾酮回归方
程为：y=549767X一49028，r一0．996，线性范围：
0-2～2-4pg。
1．4样品溶液的制备和测定：分别称取供试样品
0．5g(每个样品3份)，加甲醇10mL，超声提取40
rain，滤去残渣，并用甲醇洗涤容器和残渣数次，减
压浓缩至干，加甲醇定窖至3mL，摇匀，微孔滤膜
(0．22pm)滤过，吸取20止进样测定，所得结果代
人回归方程计算即得蜕皮甾酮的量。
1．5精密度试验：对同一蜕皮甾酮对照品溶液连续
进样5次，每次20pL，计算得峰面积的RSD为
1。391％。
1．6重现性试验：精密称取5份同一样品粉末，制
备供试品溶液进行测定，蜕皮甾酮质量分数RSD为
2．40％。
1．7稳定性试验：取供试品溶液在室温下保存，分
别在0、2、4、6、8h测定蜕皮甾酮峰面积，得RSD为
2．40％。
1．8加样回收率试验：精密称取样品5份，分别加
入蜕皮甾酮对照品适量，制备供试品溶液，进行测
定，计算平均回收率为98．z2％。
2结果
2．1蜕皮甾酮高效液相色谱图：从图1中可以看
到，牛膝的根、茎、叶中均舍有蜕皮甾酮。
2。2不同发育时期牛膝营养器官中蜕皮甾酮的积
o 2 4 6 8 IOo 2 4 6 8 10o 2 4 6 8 IOo 2 4 6 8 IO
t／rain
A一对照品B-根C茎n叶
A—xeferencesubstanceB-root8C—stems口[eaves
围1蜕皮甾酮对照品和牛膝样品的HPLC色谱圈
Fig．1HPLCChromatogramofecdysteronereferencesubstancedifferentorganssamplesofA．bidentata
累动态：采用高效液相色谱法，分别测定了不同发育 裹1不同发育时期牛膝各器官中蜕皮甾酮的■
时期牛膝根、茎、叶中蜕皮甾酮的积累动态，其测定
结果见表1和图2。可以看出，不同发育时期牛膝的
各组织器官中蜕皮甾酮的量随植株生长期的变化而
有较大波动。
在整个生长过程中，牛膝根中蜕皮甾酮的量呈
“高一低一高”的变化趋势：8月初，牛膝处于营养生长
期，地上部分生长旺盛，其蜕皮甾酮的量较高(O．222
mg／g)}8)116～20日牛膝进人生殖生长期，开始
Table1 Ecdysteroneindifferentv getativeorgans
ofA·bidentataatvariousgrowthperiods
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第30卷第10期2007年10月
。∞
●
E
暖
沼
制
墨
t／月
圈2不同发育时期牛膝营养器官中蜕皮甾酮的
积累动态
Fig．2Accumulationtrendsofecdysterone
indieferentorgaasofA．bidentata
atvariousgrowthperiods
抽穗、开花，蜕皮甾酮的量逐渐下降，至10月初达全
年的最低峰(o．150mg／g)；随着果实逐渐发育成
熟，根中蜕皮甾酮的量又逐渐升高，至11月份时达
全年的最高峰(o．237rag／g)，12月时其量稍有下
降，但幅度不大。
牛膝幼叶中的蜕皮甾酮量最高(0．555rag／g)，
随着叶发育成熟及叶面积的增大其量有所下降，以
后基本处于稳定水平(o．462～0．455mg／g)。而其
茎中蜕皮甾酮的量波动最大，8月初处于叶和根之
间(o．352rag／g)，随后快速上升，至9月初与叶中
蜕皮甾酮的量相当，以后又呈逐渐下降的趋势，至
10月初降至0．145mg／g，与根中的量相当，此后的
变化趋势和根相似。11月采集成熟的果实，测定其
种子中蜕皮甾酮的量为3．914mg／g，远远高于牛膝
营养器官中蜕皮甾酮的量。
3分析与讨论
由表l和图2可以看出，牛膝营养器官中蜕皮
甾酮的量随植株生长期的变化而有较大波动，表明
物候期是影响牛膝营养器官中蜕皮甾酮积累的主要
因素之一。关于蜕皮甾酮在植物体不同器官中的分
布，Savchenko等“”曾发现在短柄野芝麻(Lamium
albumL．)的幼叶、幼茎、侧芽及花和种子中蜕皮甾
酮量最高。对牛膝不发育时期各营养器官中蜕皮甾
酮的HPI。C测定结果表明，8月初牛膝处于营养生
长期，其根、茎、叶中蜕皮甾酮量均较高，它们问的量
差异依次为叶>茎>根。此时地上部分含有较高量
的蜕皮甾酮，可能对抵御昆虫的侵害具有一定的保
护作用。
8月15～20日牛膝由营养生长期转人生殖生
长期，开始抽穗、开花，叶中的蜕皮甾酮不断转运到
茎及花中，因此叶中的量逐渐下降，而茎中则不断升
高。9月初时茎、叶中的量基本达到一致，以后叶中
蜕皮甾酮的量基本趋于稳定水平，而茎中则快速下
降，至10月初时与根中的量相当，以后的变化趋势
和根相似，呈先升高而后下降的趋势。在整个生长过
程中，牛膝根中蜕皮甾酮的量呈“高一低一高”的变化
趋势，10月初其量最低(0．150“g／g)，Ii月初量最
高(o．237rag／g)，12月时其量稍有下降，但幅度不
大。而其成熟种子中蜕皮甾酮的量最高t为3．914
mg／g。这可能是由于9月份为牛膝的盛果期，其生
殖器官的生长发育使营养物质的消耗增加，致使茎
和根中蜕皮甾酮的量不断下降。另外，由于牛膝根和
果实的迅速生长期是相互重叠的，均需消耗大量的
营养物质，从而导致根中蜕皮甾酮的量有所下降。
随着果实逐渐发育成熟，对营养物质的消耗相
对减少，根、茎中蜕皮甾酮的量又逐渐升高，至11月
份时达到高峰。根据笔者的研究．牛膝根的增长、加
粗、三生维管束圈数，主要药用成分三萜皂苷总量及
根的生物产量均在出苗后约120d(1ip11月份)达到
高峰[1“，此时地上部分逐渐进入枯萎期，但其茎、叶
中仍含有相当高的蜕皮甾酮，其蜕皮甾酮量为叶>
根>茎。11月份牛膝植株的地上部分临近枯萎，面
根经过了生长高峰期。其蜕皮甾酮量与生物量均达
到高峰，应为牛膝根的最佳采收期，这一研究结果也
与传统习惯的采收期相吻合。在传统用药时，牛膝仅
以根经不同炮制而入药，地上部分全部舍弃。但此时
地上部分的茎叶中仍含有大量的蜕皮甾酮，这与李
鸿英、张华Cls,le]等的报道是一致的。在资源日益紧
张的今天，对牛膝地上部分的舍弃是一种浪费，建议
对牛膝的茎进行综合开发利用。
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香鳞毛蕨配子体发育及快速繁殖的研究
黄庆阳1，樊锐锋2，袁强1，常缨“”
(1．东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150030}2．黑龙江中医药大学药学院，黑龙江哈尔滨150040
3．黑龙江省农业科学院博士后工作站，黑龙江哈尔滨150086)
香鳞毛蕨Dryopterisf agram(L．)Schott是
鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物。香鳞毛蕨对皮肤病的治疗
效果显著，是具有极大的开发潜力和应用前景的纯
天然中药o“]。香鳞毛蕨在中国以黑龙江省为分布
中心，主要生长在高寒地区的滑石坡、火山岩浆缝
中。近年来，香鳞毛蕨的药用价值受到了广泛的关
注，但是人为干扰使其野生资源正遭到严重的破坏，
因此对香鳞毛蕨资源的保护性研究更具有必要性和
紧迫性。应用蕨类植物孢子进行组织培养，是快速繁
育种苗的有效途径[‘]。王全喜o]、Momose01等对鳞
毛蕨科植物的配子体发育进行了大量的研究，但是
关于香鳞毛蕨配子体形态发育的研究尚未见报道。
本实验通过对香鳞毛蕨配子体发育和培养模式的研
究，建立了香鳞毛蕨的快繁体系，为提出香鳞毛蕨引
种栽培策略、实现香鳞毛蕨植物资源的可持续利用
奠定了基础。
1材料和方法
香鳞毛蕨采自黑龙江省五大连池市二池的火山
熔岩的岩缝闻。取成熟的孢子置于l，5mL离心管
内，滴人无菌水，充分振荡使成悬浮液，4000r／min
离心1min，使孢子全部沉淀，弃去上清液。离心管
内再滴人约1．0mL的0．1％HgCl：溶液，灭苗z
min，无菌水冲洗4～5次，用上述离心方法获得无
菌的孢子悬浮液。
采用不同的培养方法，包括固体培养基培养、液
体培葬基培养和土壤培养3种。
固体培养基采用MS、l／2Ms、1／4MS和改良的
Knop7s配方(NaH2PO‘0．2g、KN030．2g、MgSO．
0．2g、Ca(NOs)20．8g、蒸馏水1000mL)，琼脂浓
度为1％。培养基分装三角瓶中，高压灭菌(121℃、
15rain)后备用。待原叶体长出性器官后每3天用无
菌水冲洗，以促进受精。
液体培养基培养是将MS、1／2Ms、1／4MS和改
良Knop‘8液体培养基直接分装在三角瓶中，高压
灭菌(121℃、15rain)后备用。
土壤培养是将过细筛草炭土和细沙以体积为
1，1比例均匀混合后放人底部钻有孔的塑料盘(大
小为25Crfl×20cm×5cm)内，基质厚度约3Cm，将
基质表面整平、压实后，将塑料盘放人装有水的乎盘
中洇水，待基质表面湿润后取出备用。待原叶体长出
收稿日期：2007一01—12 ．
基盒项目：黑龙江省博士后科研启动基金资助项目(LHK一04051)}东北农业大学科学研究启动基金和黑龙江省农业科学院博士后科研
启动摹金资助
作者前卉；黄庆阳(1981一)，童．黑龙江人，硪士研兜生，主要从事资源植物学和植物分子生物学研究工作．
Tell(0451)55190410E侧 ：huangqingyang@163．com
*通讯柞者常缨E—mail：changyin972@163．com
万方数据
牛膝营养器官中蜕皮甾酮的积累动态研究
作者： 李金亭， 滕红梅， 胡正海， LI Jin-ting， TENG Hong-mei， HU Zheng-hai
作者单位： 李金亭,LI Jin-ting(西北大学生命科学学院,陕西,西安,710069;河南师范大学生命科学学
院,河南,新乡,453007)， 滕红梅,胡正海,TENG Hong-mei,HU Zheng-hai(西北大学生命科学
学院,陕西,西安,710069)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(10)
被引用次数： 6次

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