全 文 ：中革焉cKn幅eTraditJoua|andHerb lDrugs第38卷第9期2007年9月
HPLC法测定银杏叶粉针中总黄酮醇苷和萜类内酯
陈香爱，袁志芳，张兰桐
(河北医科大学药学院药物分析教研室，河北石家庄050017)
摘要：目的采用高效液相色谱法测定镶杏叶将针中总黄酮醇苷和总萜类内醇．方法黄酮醇苷水解后．采用
HPLC—uV法测定；萜类内酯用醋酸乙酯萃取后采用HPLC—ELSDj击测定。结果槲皮素、山崇素、异鼠李素分别
在5．104～51．04、5．00050． 、1．38～13．8gg／mL呈良好线性关系，平均回收宰分别为99．34％、99．25％、
101．2％(n一5)f银杏内酯A、B、C及白果内酯分别在0，415～2．075、0．402～2．010、0．426～2．130、0．803～4．015
mg／mL呈良好线性关系，平均回收率分别为99．28％、100．1％、101．0％、99．31％“=5)。绪论本实验采用的方
法简便快速，结果准确．重现性好，可用于银杳叶粉针中黄酮和内酯类成分的质量控制。
关键词：银杏叶粉针，黄酮醇苷{银杳蕲内酵A，B、C{白果内酯
中圈分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号t0253一z670(2007)09—1333—03
HPLCDeterminationofflavoneglycosidesandterpenlactonesinGi kgobiloba
LeavesPowderyInjection
CHENXiang—ai，YUANZhi-iang，ZHANGLan-tong
(DepartmentofPharmaceuticaiAnalysis，SchooIofP armacy．HebeiMedicalUniversity，Shi妇zhuang050017，China)
KeywordslGinkgobilobaLeavesPowderyInjection；flavoneglyc sides}ginkgolideA，B，andC}
bilobalide
银杏叶性甘，昧苦、涩、平，归心、肺经，有敛肺、
平喘、活血化瘀、止痛之功，用于治疗肺虚咳嗽、冠心
病、心绞痛、高脂血症等[i]。银杏叶所含黄酮类成分
和萜类内酯为其重要有效成分，对这些有效成分的
控制可直接反映银杏叶制剂的质量。为了更好地控
制自行研发的新药银杏叶粉针的质量，本实验采用
HPLC—UV法测定了黄酮醇苷成分，并采用HPLC—
ELSD法测定了萜类内酯，取得了满意的结果。
1仪器与试药
Waters1525液相色谱仪，Waters2487紫外检
测器，Waters2420蒸发散射光检测器，Empower
Project色谱工作站，sZ一93自动双重纯水蒸馏器
(上海亚荣生化仪器厂)。
槲皮素，山奈素，异鼠李素，白果内酯，银杏内酯
A、B、c对照品(批号分别为100081—200406、
110851—200405、110860—200406、110865—200404、
110862—200305、110863—200507、110864—200304，定
量测定用)均购自中国药品生物制品检定所l银杏叶
粉针剂为本院研制，每支平均装量为0．2126g}甲
醇、乙腈为色谱纯，水为二次蒸馏水，其他试剂均为
分析纯。
2总黄酮醇苷的测定
2．1色谱条件#色谱柱为DiamonsilClB色谱柱(250
mm×4．6mm，5pm)I流动相为甲醇一0．4％磷酸
(50I 50)}体积流量为1．0mL／rain；检测波长：360
rim!灵敏度：0．5AUFS。理论板数按槲皮素计算不
低于2500，山奈素峰与异鼠李素峰的分离度大
于1．5。
2．2对照品溶液的制备：取槲皮素、山柰素、异鼠李
素对照品适量，精密称定，加甲醇制成分别含
0．0316、0．0315、0．0077mg／mL的混合溶液，即得。
2．3供试品溶液的制备t取内容物约0．42g，精密
称定，加甲醇一25％盐酸(4，1)溶液26mL，置水浴
中加热回流30rain，迅速冷却至室温，转移至50mL
量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，
取续滤液，即得。
2．4空白干扰试验；取制备银杏叶粉针的辅料，按
成药生产工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对
照溶液。分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液和阴
性对照溶液各20pL，进样测定。结果表明，样品中
槲皮素、山奈紊、异鼠李紊与其他相邻峰分离良好，
且阴性对照在相应的位置无干扰，见图1。
器蒌品霁：篆誓；；篙。一)，女．河北河间人，河北医科大学药学院2004级孽士研究生．主要从事中药质量标准及指纹图谱研兜．
-通讯作者张兰桐Tel=(0311)86266419Fax：(031 )86052053E—matt：zhanglantongC园263．net
万方数据
中草青ChineseTraditionalandHerbalDrugs第弼卷第9期200／年9月
．h且
0 2。40 20 40
t／ndn
C
O 20 40
1‘并皮霉2一山荼鬟3一异鼠李紊
1-quercetin2-kaempherol3-1soxahmnetin
里1对照品(A)、样品(B)、空白样品(c)色谴朋
Fig·1Chromatogrmnaefre[ereflcesubstance(A)‘
sample(B)，andblanksample(C)
2．5标准曲线的制备：取槲皮素、山袭素和异鼠李衷
对照品适量，精密称定t加甲醇制成分别含0．2552、
0·250o、0．0692mg／mL的混合溶液。分别精密吸
取0．5、1·0、2．0、3．0、4．0、5．0m1．置25mL量瓶
中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别取20止，，注入液
相色谱仅，测定峰面积，以质量浓度为横坐标。峰面
积为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，槲皮素、山奈
素和异鼠李素线性范围分别为5．104～51．04、
5．000～50．00、1．38～13．8pg／mL，回归方程分别
为y=90499X一18271(r=0．9993)，y一81433
X一7202．5(r=0．9998)、Y一105249X一4654．2
(r=0．9993)。
2．6精密度试验：取同一供试品溶液重复进样6
次，记录峰面积。结果槲皮紊、山奈素和异鼠李素峰
面积的RSD分别为0．69％、0．96％、1．45％。
2．7 稳定性试验：取屁一供试品溶液于0⋯24 6、
8、24h进样，记录其峰面积。结果供试品溶液在24
h内稳定性良好，槲皮素，山柰素和异鼠李素峰面积
的RSD分别为2．79％、1．66％、2。91％。
2．8重复性试验：取批号051101样品，按供试品溶
液的制备方法平行制备6份，进样测定，计算得3种
黄酮苷元的质量分数分别为4．162、4．175、1．013
mg／g，RSD分别为0．45％、0．56％、2．04％。
2．9加样回收率试验：取批号051101样品约0．21
g，精密称定。精密加入槲皮索，山柰索和异鼠李素质
量浓度分别为0．322、0．321，0．074mg／mL的混合
对照品溶液2．5mL，制备供试品溶液，进样测定。结
果槲皮素、山奈素和异鼠李素的平均阐收率分别为
99．34％、99．25“、i01．2％，RSD分别为1．23％、
0．98％、1．02％白=5)。
2．10样品测定：取3批样品，每批平行做3份，制
备供试品溶液。进样测定，采用外标一点法计算，并
采用总黄酮酵苷的质量分数=(槲皮素质量分数+
山奈素质量分数+异鼠李素质量分数)×2．51计
算，结果见表1。
衷1 3批样品中总黄酮群苷的膏定结果
Table1 DetermjnallollotNavoneglycosldes
Inthreeb tchesofgllplH
3萜类内醋的测定
3．1色谱条件：色谱柱为DiamonsilC，。色谱柱(250
mm×4．6mm，5pm)；甲醇一水为流动相梯度洗脱，
O～20min{甲醇31％～45％，20～25minl甲醇
45％～31％}体积流量：1．0mL／min；ELSD检测
器，漂移管温度为60℃，氮气流量为25psi，喷口温
度35℃，进样量20“L。
3．2对照品溶液的制备：分别精密称取银杏内酯
A、B、C和白果内酯对照品适量，加甲醇制成各含
1．03、1．16、0．85、2．36mg／mL的混合溶液，即得。
3．3供试品溶液的制备：取内容物约1．2g，精密称
定，加永10mL，振摇使溶解，用2％盐酸溶液调节
至pH2，用醋酸乙酯振摇提取4次(15、10、10，10
mL)，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20mL洗涤，
分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯10mL洗涤，合并醋
酸乙酯提取液和洗液，用水洗涤2次，每次20mL，
分出水洗液，用醋酸乙酯10mL洗涤，合并醋酸乙
酯液，回收醋酸乙酯至于，残渣用丙酮溶解并转移至
5mL量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，即得。
3．4空白干扰试验：取制备银杏叶粉针的辅料，按
成药的生产工艺和供试品溶渡的制备方法制备阴性
对照溶液。分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液和
阴性对照溶液各20pL，进样测定。结果表明，样品
中银杏内酯A、B、c，白果内酯与其他组分分离较
好，且阴性对照在相应的位置无干扰，见图2。
3．5标准曲线的制备：分别精密称取银杏内酯A、
B、C和白果内酯对照品适量，加甲醇制成各含
2·075、2．010、2·130、4．015mg／mL的混合溶液。
分别进样4、8、10、16、20止．，测定峰面积。以质量浓
度的对数值为横坐标，峰面积的对数值为纵坐标，绘
制标准曲线。结果表明，银杏内酯A、B、c和白果内
酯线性范围分别为0．803～4．015、0．415～2．075、
0·402～2·010、0·426～2．130mg／mL，回归方程分
别为lnY=1．338lnx+5．3853(r=0．9988)、
lny一1．5153lnX+5．1981(r=0．9973)、InY一
1．4182InX+4．7738(r=0．9959)、Iny=1．241
lnX+5．5517(r=0．9946)。
万方数据
中草番Chin∽TraditionaludⅡerb蚰Drugs第弼毫第9期2007年9月·1335·
C
r—r—孑1r1隅r—r—面—百—可—珂，]—1rlrl册
t／rmn
1一白果内瞎2一韫杏内醇C3-银杏内醇A4一壤杳内醣B
1-bilobalide2-ginkgolideC3-ginkgolideA4-ginkgolideB
圈2对照品(A)．样量(B)和空白样品(c)的HPLC色谱圈
Fig．2HPLCChromatogramsfreferenoeubstance(A)，s哪pie(B)，andblanksample(C)
3．6精密度试验：取同一供试品溶液重复进样6 寰z 3批样品中内醋的测定培粟
次，记录峰面积稿i果表明，银杏内酯A、B、C和白果Table2 DeterminationoflaetonesInthree
内酯峰面积的RSD分别为1．59％，1．36％、
2．14％、1．48％。
3．7稳定性试验：取同一供试品溶液于0、2、4、6、
8、24h进样测定，记录其峰面积。结果供试品溶液
24h内稳定性良好，银杏内酯A、B、C和白果内酯
峰面积的RSD分别为2．36％、1．98％、2．56“、
2．37％。
3．8重复性试验；取批号051101样品，按供试品溶
液的制备方法平行制备6份，进样测定，计算，得4
种内酯的质量分数分别为3．795、1．605、2．165、
1．514mg／g，RSD分别为2．12％、1．90％、0．80oA、
1．76％。
3．9加样回收率试验：取批号051101样品约0．6g，
精密称定，精密加人质量浓度分别为2．630、0．301、
1．196、0．803mg／mL内酯混合对照品溶液1mL，
依法操作，测定。结果银杏内酯A、B、c和白果内酯
的平均回收率分另9为99．28％、100．1％，101．ooA、
99．31％，RSD分别为1．69％、2．11％、2．51oA、
1．38％“=5)。
3．10样品测定：取3批样品，每批平行3份，制备
供试品溶液，进样测定峰面积值，采用外标法两点法
计算银杏叶粉针中银杏内酯A、B、c和白果内酯的
质量分数，结果见表2。 。
4讨论
采用HPLC法测定银杏萜类内酯所用流动相
有甲醇一水啪、四氢呋喃一异丙醇一水嘲系统，经比较发
现甲醇一水系统已可满足定量要求，但等梯度洗脱分
离度不满意，采用二元梯度洗脱的方法，银杏内酯A、
B、c和白果内酯4种内酯的分离可满足定量要求。此
外，还将量较低而且生理活性不明显的银杏内酯J与
相邻的银杏内醇c达到基线分离，色谱图显示基线
batchesofslimples
。 。银杳内酯A／银杏内酯B／银杏内醇C／白果内醵／ 盛量／
一。(rag·g-1)(mg·g-D(mg·g-1)(mg·8-1)(mg·g-1)
0511013．798 1．601 2．171 1．516 9．086
0511023．698 1．612 2．147 1．522 8．979
051103．581 1．623 2．089 1．504 8．897
平稳，杂质峰很少，效果满意。同一样品采用四氮呋
哺一异丙醇一水系统为流动相时的响应值远远小于以
甲醇一水系统为流动相时的响应值，灵敏度较低，且由
于四氢呋喃容易被氧化，该系统稳定性较差。
不同的流动相系统对4种内酯出峰顺序有很大
影响，甲醇一水系统中各成分的出峰顺序为白果内
酯、银杏内酯c、银杏内酯A和银杏内酯B}四氢呋
喃一异丙醇一水系统中各成分的出峰顺序为银杏内醋
C、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B}在甲醇一水系
统中加入四氢呋喃时，四氢呋哺一甲醇比例的改变，
可导致4种成分出峰顺序的改变。这可能与流动相
的极性、4种成分的分子结构以及与有机相的亲和
力有关。
ELSD检测的漂移管温度和载气流量是影响试
验的两个关键性参数。在ELSD的气化室中，载气
流量对信号影响很大，太低或太高均导致信号不够
准确。而漂移管温度降低时，溶剂挥发不够完全}温
度高时则样品颗粒挥发导致检测仪响应下降。本实
验采用的检测条件可行性较好，是通过反复试验、综
合评价得出的。
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万方数据
HPLC法测定银杏叶粉针中总黄酮醇苷和萜类内酯
作者： 陈香爱， 袁志芳， 张兰桐， CHEN Xiang-ai， YUAN Zhi-fang， ZHANG Lan-tong
作者单位： 河北医科大学药学院,药物分析教研室,河北,石家庄,050017
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(9)
被引用次数： 4次
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