全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月 ·687·
不同工艺大黄提取物在大鼠体内的药动学研究
桂蜀华，祝晨藤，梁远园，林吉，叶其馨
(广州中医药大学新药开发研究中心，广东广州 510405)
摘要：目的 以大黄酸为指标，进行大黄不同提取物的药动学研究，对大黄工艺优化提供科学依据。方法 于大
鼠ig大黄不同提取物后不同时间点取血浆，采用LC—MS法建立大黄酸血药浓度的测定方法，经3P87软件计算得
药动学参数。结果 大鼠血浆中大黄酸在2．o～30pg／mL线性关系良好，ig大黄酸体内药时过程可用二室开放模
型描述。结论 以AUC为指标，SFE—cO。萃取+树脂精制产物工艺组最佳，SFE—C0z萃取组次之。
关键词：大黄；大黄酸；提取工艺；药动学
中图分类号：R285．6；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)05—0687—03
PharmacokineticstudyofRheumpalmatuminvivoinrats
GUIShu—hua，ZHUChen—chen，LIANGYuan—yuan，LINJi，YEQi—xin
(NewDrugDevelopmentCenter，GuangzhouU iversityofTraditionalChineseMedicine，Guangzhou510405，China)
Abstract：ObjectiveTopro idepharmacokineticevidencesforoptimizationofRheumpalmatum
extractionechnology，throughs udyingpharmacokineticsofex ractbydifferentt chnologiesfromR．
palmutumwithrheinasindex．MethodsBl odsamplesw recollecteda varioustime—pointsaf erig
givendifferentextracttorats．AnLC—MSmethodwasestablishedford terminationofrheinratplasma
andpharmacokineticparameterswerecalculatedbyprograme3P87．ResultsAgoodlinearrelationshipof
rheinexistedintherangeof2．0———30ug／mLinratplasma．Thebloodconcentration—timec urseofrh in
afterigadministrationcanbedescribedasatwo--compartmentopenmodel．ConclusionConsideringthe
AUCasindex，SFE—C02andresidueresinpurificationis hebesttechnologyandSFE—C02isthesecond．
Keywords：RheumpalmatumL．；rhein；extractionte hn logy；pharmacokinetics
大黄是常用的泻下中药，具有泻热通便、凉血解
毒、活血化瘀的功效，临床常用于实热积滞、便秘腹
痛等里实证。大黄产生致泻活性的其中一个途径是
部分蒽苷自小肠吸收后，经肝脏转化为苷元，再刺激
盆神经丛，增加肠蠕动致泻。大黄酸是大黄致泻的重
要成分之一[1]。本实验以大黄酸为指标成分，建立大
黄酸血浆样品的测定方法，研究大黄各工艺产物的
药动学。
1仪器与试药
SORVALL高速冷冻离心机；Satorius电子分
析天平(SatoriusCo．Ltd．德国)；美国Waters
platformZMD400液质联用仪，配置2690泵，996二
极管阵列，DAD紫外检测器，自动进样器，
Mieromass四极杆质谱仪，Masslynx3．1平台，
Millipore纯净水发生器(MilliporeCo．Ltd．，美
国)。
大黄药材取自陕西省宝鸡市大黄药材栽培基
地，为掌叶大黄RheumpalmatumL．的根及根茎，
经赖小平教授鉴定，自然干燥。大黄酸对照品购自中
国药品生物制品检定所；内标物为联苯(化学纯)，色
谱纯乙腈、甲醇均为Merk公司产品；纯净水为自
制，其余试剂均为国产分析纯。
Wistar大鼠，雄性，体重(2．5±0．2)kg，由香港
中文大学医学院提供。
2方法与结果
2．1血药浓度的测定
2．1．1 色谱条件：AllitimaC，8色谱柱(250mm×
4．6mm，5um)；柱温：25℃；流动相：水一乙腈(60：
40)；体积流量：0．8mL／min；检测波长：254nm。
2．1．2质谱条件：离子源温度120℃，脱溶剂温度
250℃，毛细管电压3700V，锥孔电压30V，数据采
集与分析软件为Masslynx．datasystem(verson
3．1)。
2．1．3大黄酸对照品溶液的制备：精密称取大黄酸
1．0mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并至刻度，备
用。进样前通过0．2ttm滤膜滤过。
收稿日期：2004—09—29
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39800196)
作者简介：桂蜀华(1972一)，女，四川西昌人，助理研究员，中药学硕士，从事中药新药开发。
Tel：(020)36585362E—mail：gjl615@sohu．corn
万方数据
·688· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
2．1．4内标溶液的制备：精密称取联苯10mg，置
25mI。量瓶中，用甲醇配制成400／-g／mL贮备液，
该贮备液用甲醇稀释成0．2t生g／mL内标液备用。
2．1．5 血浆样品预处理：精密吸取血浆样品200
pL，置5mL具塞离心试管中，加入氯仿200肛L，涡
旋液体混合器上振荡5min，离心，分离有机相，37℃
水浴上N。吹干，由于给不同药后大鼠血浆药物浓度
差异较大，对培给予大黄不同工艺产物后的血浆按
上述方法处理后的残渣加入甲醇50pL溶解，再加入
0．2／19／mL内标液150／*L，混匀后进样20弘L[2]。
2．2分析方法的考察
2．2．1方法专属性考察：在选定的条件下，大黄酸
和内标物的保留时间分别在2．35、15．42min，大鼠
空白血浆、空白血浆加大黄酸(100tzg／mL)及内标
(o．2t-g／mL)、给药后大鼠血浆样品的色谱图见图1
和2，表明血浆中血源性物质不干扰测定。
l
l‘
0 5 10 15
2
1 B—．。．。k————
0 5 10 I，
，／min
A一空白血浆+大黄酸+内标B一大黄酸+内标
C给药大鼠血浆样品 1一大黄酸2一内标
A—plasma+rhein+innerstandardB-rhein+innerstandard
C—plasmaample1-rhein2-innerstandard
图1 大黄酸血浆样品的总离子流图
Fig．1Totalionflowofrheinsampleinratplasma
0 5 10 15o 5 10 150 5 lo 15
A大黄酸+内标B一空白血浆+大黄酸+内标
c一给药大鼠血浆样品 1一大黄酸2一内标
Arhein+innerstandardB—plasma+rhein+innerstandard
C—plasmaample1-rhein2-innerstandard
图2大黄酸血浆样品的HPLC图谱
Fig．2HPLCcbromatogramsfrheinsample
2．2．2标准曲线的制备：准确吸取大黄酸对照品溶
液(100／lg／mL)2、8、10、15、20、30弘L置5mI。具塞
离心试管中，加入大鼠空白血浆至200,uL，混匀，余
同“血浆样品预处理”项下操作。以大黄酸的血药浓
度为横坐标，大黄酸与内标物的峰面积比为纵坐标，
用最小二乘法进行线性回归，每个浓度平行进行3
个样本的分析，结果表明，大黄酸在2．0～30gg／mL
线性关系良好，回归方程为Y一0．2117+0．1469
X，，．一0．9991，最低检测限为1．0t-g／mL。
2．2．3精密度试验：分别取大黄酸对照品溶液8、
15、30肛L，加入大鼠空白血浆至200弘L，混匀，制成
低、中、高3个浓度的血浆样品，余同“血浆样品预处
理”项下操作，分别于1d连续测定6次及连续6d，
每天测定1次，记录其色谱峰面积，计算日内和日间
精密度，结果见表1。
表1血浆中大黄酸的精密度测定
TableProeisionofrheindeterminationinratplasma
大黄酸加入量／ RSD／％
(ug·mL1) 日内(n=3) 日间(月一6)
2．3回收率试验
2．3．1分析方法的回收率：分别取大黄酸对照品溶
液8、15、30pL，加入大鼠空白血浆至200弘L，混匀，
制成低、中、高3个浓度的血浆样品，余同“血浆样品
预处理”项下操作，每个浓度平行3个样本的分析，
依回归方程计算测定，按测得量与加入量之比，计算
分析方法的回收率，结果分别为95．0％、92．4％、
92．0％(孢一9)。
2．3．2提取方法的回收率：分别取大黄酸对照品溶
液8、15、30肛L，加入大鼠空白血浆至200,uL，混匀，
制成低、中、高3个浓度的血浆样品，余同“血浆样品
预处理”项下操作，计算待测物与内标物的峰面积比
(A)；另取大黄酸对照品溶液8、15、30p．L，加人甲醇
至50luL，再加入内标150pL后进样，计算待测物
与内标物的峰面积比(B)，以A／B×100％计算得该
浓度下药物的提取方法回收率，每个浓度平行3个
样本的分析，结果分别为89．9％、91．8％、93．3％。
2．4药动学试验
2．4．1大黄大同提取工艺产物的制备：取大黄药材
以5倍量50％甲醇回流提取，总蒽醌得率为
89．41％，番泻苷A(sennosideA)转移率为
13．22％；超临界二氧化碳萃取法，总蒽醌得率为
92．46％，sennosideA为9．57％；SFE—C02+F20型
大孔树脂工艺法以大极性成分sennosideA为指标
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·689·
成分，其得率为77．0％(另文报道)。
2．4．2大鼠ig大黄不同提取工艺产物：大鼠10只
禁食12h(自由饮水)，取0．25mL空白血后，以大
黄酸500mg／kg剂量ig给予大黄不同提取工艺产
物，于给药后0．25、0．5、1、2、3、4、5、6、8、10h由颈
静脉各取血0．25mL，离心后取血浆0．1mL，依法
测定大黄酸。
2．4．3大鼠ig大黄不同提取工艺产物后药动学参
数：大鼠ig大黄不同提取工艺产物后，血浆中大黄
酸质量浓度变化见表2。每种工艺产物的血药浓度
观测值均用3P87药动学程序进行拟合，其一、二、
三室模型差异均无显著性。而本研究室前期对大黄
培给药药动学研究结果显示，大黄酸iv后其药动学
符合二室模型，因此均选用二室模型。同时，为减少
实测值与理论值的差异，权重均选用1／C。其主要药
动学参数见表3。
表2大鼠ig大黄不同提取工艺产物后血浆
中大黄酸的变化(万一9)
Table2 Rheinalterationinratplasmaafterigratswith
differentR．palmatumextracts(席一9)
3讨论
本实验采用LC—MS建立大黄酸的测定方法，
以结构与大黄酸相近的联苯作为内标，通过比较空
白血浆、空白血浆加大黄酸及内标、含药血浆的血浆
图谱，表明血浆中内源性物质对样品测定无干扰，同
时进行了方法学考察，表明本法灵敏度较高，重现性
良好。
表3大鼠ig大黄不同提取工艺产物的主要药动学参数
Table3 Pharmacokineticparametersofrheinafterig
ratswithdifferentR．palmatumextracts
大鼠培大黄不同提取工艺产物的血药浓度值
经3P87软件拟合，一、二、三室模型差异均无显著
性，因大黄酸iv后其药动学符合二室模型，因此选
用二室模型来描述。从大黄不同提取工艺产物的药
动学参数来看，3种工艺产物在体内均能迅速吸收，
tl／zK分别为0．13861、0．35672、0．52755h。以大黄
酸吸收入血的相对数量和速度来评价提取工艺的指
标，吸收相对数量以AUC估算，树脂工艺组吸收程
度最高，AUC值为480．50528(pg·h)／mL，溶剂
组吸收程度最小，为184．1640(pg·h)／mL，吸收
速度以C。。。和tm．x来估算，SFE—CO：萃取加树脂精
制产物工艺组的吸收速度介于溶剂组和SFE—C0：
萃取产物组之间，虽然吸收不及溶剂组快，但吸收程
度最好，综合上述因素，SFE—CO。萃取加树脂精制
产物工艺组为最佳。
References：
EliJiuDH，DuSJ．StudyofRadixetRhizomaRhei(大黄研
究)[M]．Shanghai：ShanghaiScientificandTechnical
Publishers，2000．
[2]ZhuCC，ZhenzH，ChenZL．eta1．Determinationofrhe n
concentrationinratsplasmabyHPLC—MSEJ3．JChinMed
Mater(中药材)，2002，25(9)：646．
苔啦器搴零零零鹞祭祭零零祭零零零牙啦$苗譬雾塌嗡鹕祭零秘祭之器零祭零搴零零苔啦莽茜氧牙弛莽茜氧牙弛莽茜氧岔酗莽培氧牙毡零苗譬葶氧牙
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万方数据
不同工艺大黄提取物在大鼠体内的药动学研究
作者： 桂蜀华， 祝晨蔯， 梁远园， 林吉， 叶其馨， GUI Shu-hua， ZHU Chen-chen， LIANG
Yuan-yuan， LIN Ji， YE Qi-xin
作者单位： 广州中医药大学,新药开发研究中心,广东,广州,510405
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(5)
被引用次数： 1次
参考文献(2条)
1.Jiu D H;Du S J 大黄研究 2000
2.Zhu C C;Zhen Z H;Chen Z L Determination of rhein concentration in rats plasma by HPLC--MS 2002(09)
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引证文献(2条)
1.张元发.王勇强.董双林.盖春蕾 大黄酸在刺参体内的药代动力学研究[期刊论文]-渔业科学进展 2010(6)
2.张元发.王勇强.董双林.盖春蕾 大黄酸在刺参体内的药代动力学研究[期刊论文]-渔业科学进展 2010(6)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200505021.aspx