全 文 ：·442· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
定的成分中，除一般挥发油所含有的共同成分外，含
有两类具有较强的生理活性的物质，它们是这类植
物挥发油的特征成分。一类是苯酞类衍生物，如3一
丁基苯酞等，具有较强的抗惊厥作用[3]和平喘作
用[4]。另一类是烯丙基苯的衍生物，如肉豆蔻醚、榄
香素等，具有麻醉镇痛作用。藁本挥发油中上述两类
成分的量高低直接决定了藁本药材的品质。《中国药
典》规定的正品藁本药材为伞形科植物藁本
Ligusticumsinense0liv．或辽藁本L．jeholense
NakaietKitag．的干燥根茎及根，上述两正品藁本
药材都有较高量的苯酞类和烯丙基苯的衍生物，而
其他地方习用藁本药材中苯酞类衍生物量很低。从
实验数据可以看出遂川产西芎藁本中苯酞类和烯丙
基苯的衍生物的量较高，符合正品藁本的要求，实验
结果遂川藁本有18个共有峰。
3．2通过比较全国各产区的西芎藁本挥发油和不
同习用藁本药材挥发油的气相指纹图谱，发现不同
产区和不同品种藁本药材挥发油在化学组成和各成
分量上差异较大，故药效上差别相应也比较大。因
此，为了保证中药制剂的质量稳定，一定要固定药材
的产地和种类，在建立藁本药材挥发油气相指纹图
谱时，应针对不同产地、不同品种的藁本药材分别建
立其指纹图谱。 ’
3．3本实验气相指纹图谱在比较藁本药材正常根
茎和空心根茎的实验表明，两者挥发油在整体化学
组成上几乎无差异，而化学组成是决定药材药理作
用的基础，故认为两者挥发油的药理功能是等效的，
这与传统的评价方式是不同的。
3．4在藁本药材的规范化种植实验中，发现大多数
规范化种植的藁本药材挥发油的气相色谱峰面积都
远大于本地农家传统种植的藁本药材，这说明藁本
药材的规范化种植是非常有意义的，选择理想的种
植方式，规范化种植模式将会大大提高并控制藁本
药材的品质。
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三七剪口指纹图谱研究及应用
张 敏1，胡 坪¨，罗国安2∥，王义明3
(1．华东理工大学化学与分子工程学院，上海200237；2．华东理工大学药学院中药现代化工程中心，上海200237；
3．清华大学生命科学与医学研究院，北京100084)
摘要：目的建立三七剪口的HPLC指纹图谱，同时用于不同产地药材的皂苷成分定量。方法采用梯度洗脱
法，对三七剪口水提物进行HPLC测定，流动相为水一乙腈，检测波长203nnl；记录时间65min。结果运用梯度洗
脱的方法能分离三七剪口的各类组分，并可对其中三七皂苷R。、人参皂苷Rg。、Re、Rb。和Rd进行定量。结论本
实验建立的HPLC指纹图谱和测定方法可作为三七剪口有效组分的控制手段。
关键词：三七剪口，高效液相色谱}指纹图谱
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)01—0442—04
ApplicationofHPLCfingerprinttoanalysisofrhizomefPanaxnotoginseng
ZHANGMinl，HUPin91，LU0Guo—an2”，WANGYi—min93
(1．SchoolofChemistryandMolecularEngineering，EastChinUniversityofScienceandTechnology，Shanghai200237。
China}2．ModernEngineeringCenterofTraditionalChineseMedicine，SchoolofP armacy，EastChinaUniversityofSci—
enceandTechnology，Shanghai200237，China；3．InstituteofBiomedicine，TsinghuaUniversity，Beijing100084，China)
Abstract：ObjectiveTos ablishtheHPLCfingerprintmethodoftherhizomefPanaxnotoginseng
收稿日期：2006—05—20
基金项目：国家高技术研究发展计划(863计划)(2003AA222021)
作者简介：张 敏(1980一)，男，博士研究生，专业为制药工程与技术。Tel：(010)62794103
*通讯作者罗国安Tel；(010)62781688E—mail=luoga@mail．tsinghua．edu．cn
胡坪Tel：(021)64252844E—mail：huping@ecust．edu．cn
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
andsetupamethodf rcontentde erminationofthemainginsenosidesinthrhizomefP．notoginseng
fromvarioushabitats．MethodsHPLCAnalysiswacarriedonC18columnwithflowphasewater—
acetonitrile．Thedetectionwavelengthwasat203nm，recordtimewas65min．ResultsThecomponents
canbeseparatedwellandtheginsenosidesR91，Re，Rbl，andRd notoginsenosideRlcanbe
determinatedusingthismethod．ConclusionTheHPLCfingerprintoftherhizomefP．notoginsengand
thedeterminationme hodwhichdevelopedinthispaperaresuitableforthequalitycontroloftherhizome
ofP．notoginseng．
Keywords：therhizomefPanaxnotoginseng(Burk．)F．H．Chen；HPLC；fingerprint
中药的质量控制是中药现代化的重要组成部
分，中药指纹图谱作为中药质量稳定性的有效检定
方法，在中药材的质量评价和中药生产的质量控制
中有着广泛的应用[1]。三七为五加科人参属植物三
七Panaxnotoginseng(Burk．)F．H．Chen的根，具
有滋补强壮、止血、活血化瘀和消肿止痛的功效，一
般认为皂苷类成分是三七的主要成分，其中三七皂
苷R。、人参皂苷Rg。、Re、Rb，、Rd为主要皂苷，但经
研究表明，三七中除含有皂苷外，还含有氨基酸、多
糖、黄酮、挥发油、油脂和微量元素等多类成分口]。三
七剪口也称芦头，约占三七药用部位产量的24％～
28％[3]，传统上仅作为三七的副产品使用。但三七剪
口中皂苷不仅成分相似，而且量比块茎中高[4]，故常
作为工业提取三七总皂苷的主要原料。为了合理利
用三七药材，提高其利用率，本实验以梯度洗脱法建
立HPLC指纹图谱，重现性较好，不仅适用于对三
七剪口的鉴定及质量评价，而且可以对其皂苷类成
分进行定量分析。
1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，DAD检测器，
Agilent1100色谱工作站；北京医疗器械二厂CX一
300型超声清洗机。乙腈(色谱纯，美国Mallinckrodt
Baker公司出品)；密里博超纯水(MILLIPORE公
司)。《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(国家药
典委员会，2004A)。
三七剪口药材共16批，均产于云南省文山地
区，产地信息如表1所示。三七皂苷R。(批号
110745--200313，质量分数99％)、人参皂苷Rg。(批
号11703--200332，质量分数99％)、Re(批号
110754--200320，质量分数99％)、Rb，(批号
11704--200318，质量分数99％)对照品购自中国药
品生物制品检定所，人参皂苷Rd对照品(批号
ASB—oo007205一010，质量分数99％)购自美国
ChromaDex公司。
2方法与结果
2．1 色谱条件：采用资生堂MGC。。柱(150mm×
4．6mm，5um)；流动相：水(A)一腈(B)梯度洗脱，
o～2min(100％A)，2～14min(100％～86％A，
O～14％B)，14～15min(86％～80％A，14％～
20％B)，15～35min(80％～77％A，20％～23％B)，
35～50min(77％～55％A，23％～45％B)，50～60
min(55％～20％A，45％～80％B)；体积流量
0．7mL／min；柱温25℃；检测波长203nm。
表1药材样品信息表
Table1 Informationofd fferentsamples
编号 产地’ 编号 产地
1 文山平坝镇 9 文山乐诗冲地区
2．文山平坝镇 10 文山乐诗冲地区
3 文山平坝镇 11 文山苗乡(马鞍山)
4 文山平坝镇 12 文山苗乡(马鞍山)
5 文山平坝小街地区 13 砚山县水泥厂旁
6 文山平坝小街地区 14 砚山县水泥厂旁
7 文山城边地区 15 邱北县腻脚地区
8 文山城边地区 16 邱北县腻脚地区
2．2对照品溶液制备：精密称取三七皂苷R。、人参
皂苷R91、Re、Rb，和Rd各10mg置10mL量瓶
中，加水溶解并定容至刻度，制得混合对照品溶液。
2．3供试品溶液制备：精密称取不同产地三七药材
粉末(40目)4．0g，置于具塞锥形瓶中，精确加入40
mL水，浸泡1h后超声15min。提取液离心分离，
’
上清液用0．45pm滤膜滤过，取续滤液即得。
2．4标准曲线的制备：分别精密吸取混合对照品溶
液1、3、7、15、30、45、60弘L进样分析。按2．1项操
作，记录峰面积积分值，以峰面积(y)为纵坐标，进
样量(X)为横坐标作图，得三七皂苷R，的回归方程
为y一1．726×104X+2．212×104，r=0．9997；人
参皂苷RgI的回归方程为Y一2．012×10‘X+
1．366X103，，．一0．9993；人参皂苷Re的回归方程
为Y=1．495X104X+1．540x104，r一0．9977；人
参皂苷Rb，的回归方程为Y=1．549×10‘X+
961．0，，．一0．9993；人参皂苷Rd的回归方程为y一
1．751×104X+6．462×103，r=0．9991。以上各皂
万方数据
·444· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
苷在1,--,60／zg范围内均呈现良好的线性关系。
2．5指纹图谱方法学考察
2．5．1精密度考察：按2．3项下制备供试品溶液，
连续进样5次，计算峰面积的精密度。以人参皂苷
Rb。为对照峰，主要色谱峰的相对峰面积RSD均小
于1．3％(咒一5)，相对保留时间RSD均小于0．9oA
(，l一5)。表明仪器精密度良好。 、
2．5．2重现性考察：取同一产地药材5份，按2．3
项制备供试品溶液，进样并记录色谱图。以人参皂苷
Rb，为对照峰，主要色谱峰的相对峰面积RSD均小
于3．5％(咒=5)，相对保留时间RSD均小于2．1％
(n一5)。表明方法重现性好。
2．5．3稳定性考察：按2．3项下制备供试品溶液，
分别放置0、2、4、8、16、24h，同时取样分析并记录
色谱图。以人参皂苷Rb，为对照峰，主要色谱峰的
相对峰面积RSD均小于3．8％(，l=5)，相对保留时
间RSD均小于2．3％(咒一5)。表明试验方法稳定。
2．6加样回收率试验：以产地为邱北县腻脚地区的
15号样品为研究对象，精密称定已测定的样品5份，
每份400mg，分别加入三七皂苷R。、人参皂苷Rg。、
Re、Rb，和Rd对照品适量，按2．3项方法制备，取续
滤液20pL测定，计算各自的量，得出三七皂苷R-、
人参皂苷Rg。、Re、Rb，和Rd的平均回收率分别为
97．1％、99．3％、93．7％、102．6％、104．3％，RSD分
别为1．8％、2．1％、2．8％、2．9％、2．5％(以一5)。
2．7定量结果：本实验采用同一HPLC方法不仅
对三七剪口药材的指纹图谱进行表达，同时对三七
皂苷R。、人参皂苷Rg。、Re、Rb。和Rd这5种皂苷
进行测定，不同产地三七剪口中5种主要皂苷的测
定结果见表26
表2表明在三七剪口中三七皂苷R。、人参皂苷
Rg。和Rb，的量较高，人参皂苷Re和Rd的量较
低。其中人参皂苷Rg。的量约为三七皂苷R。和人参
皂苷Rb。的1～2倍，而三七皂苷R。与人参皂苷
Rb。的量大致相当。在各产地中文山平坝镇的样品
中皂苷量较高，而文山乐诗冲地区的量较低。但同一
个产地的各样品中皂苷量差异较大，如文山平坝镇
和邱北县腻脚地区，这可能与药材的生长情况
有关。
2．8对16批药材的指纹图谱相似度分析：用已建
立的指纹图谱方法，对收集的16批三七剪口药材进
行检测，各图谱见图1，用《中药色谱指纹图谱相似
度评价系统》计算相似度，以系统生成的对照图谱R
为参照谱，结果见表3。
表2样品定■结果
Table2 Determinationofsamples
R
；16
；15
；14
；13
；12
；ll
；10
；9
0 10 20 30 40 50 60 70
t，rain
图1 16批三七剪口指纹图谱
Fig·1Fingerprintsof16batchesofrhizome
ofP·notoginseng
表3 16批三七剪口指纹图谱相似度
Table3 Similarityof16batchesofrhizome
OfP．notoginseng
编号 相似度 编号 相似度
1 0．968 9 0．975
2 0．964 10 0．971
3 0．965 11 0．929
4 0．968 12 0．931
5 0．938 13 0．981
6 0．930 14 0．980
7 0．973 15 0．983
8 0．976 16 0．981
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月·445·
相似度计算结果显示，16批三七剪口药材指纹
图谱相似度均大于0．92。不同产地之间相似度有差
异，如文山平坝镇地区与文山平坝小街地区；而在同
一产地差异较小，如文山平坝镇、文山苗乡(马鞍
山)、砚山县水泥厂旁和邱北县腻脚地区。相似度分
析结果说明本实验建立的指纹图谱方法可以作为三
七剪口的质量评价手段。
3讨论
3．1提取条件的选择：三七药材中的有效成分除了
皂苷类外，还有三七素及黄酮类，在测定其指纹图谱
时，这些成分应在图谱中得到反映。如采用甲醇作为
提取溶剂，得到的三七指纹图谱只能表达皂苷类成
分，无法表达在甲醇中溶解性较差的化学成分[5]，因
此最终选定以水为提取溶剂。
3．2色谱条件的确定：比较了水一甲醇和水一乙腈不
同体系下，色谱峰的分离情况。结果表明选择水一甲
醇体系的基线波动较大，而水一乙腈体系则可以得到
较好的分离结果。分别对水一乙腈体系的不同洗脱梯
度进行了试验，结果以本实验中所列梯度出峰较多
且色谱峰分离度较好。同时对三七药材供试品溶液
进行了120min的HPLC测定，结果65min后无色
谱峰出现，所以选定指纹图谱记录时间为65min。
典型的三七剪口药材指纹图谱见图2一A，指纹图谱
中20min之前的色谱峰紫外吸收最大值为254
nm，为黄酮类成分[6]，35rain后色谱峰的紫外吸收
与对照品的色谱峰(2一B)的紫外吸收对照后，确认为
皂苷类成分。
L一 一，． i．蠢 ii
0．00 10．87 21．74 32．6l 43．48 54．35 65．21
t／min
1一三七皂苷Rl2一人参皂苷R913-人参皂苷Re
4一人参皂苷Rbl5一人参皂苷Rd
1一notoginsenosideRl 2-ginsenosideRgl3-ginsenosideRe
4一ginsenosideRbl5-ginsenosideRd
图2三七剪口(A)和对照品(B)HPLC色谱图
Fig·2HPLCFingerprintof hizomefP·notoginseng
(A)andreferencesubstance(B)
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广西地不容组培快繁研究
黄宁珍，唐凤鸾，付传明，李锋，赵志国
(广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，广西桂林541006)
摘 要：目的 研究广西地不容的组培快繁技术，为大量生产种苗提供方法和技术。方法 以嫩茎节段为外植体，
以MS为基本培养基，通过不同的激素种类和浓度配比，选择出最佳的诱导、继代增殖和生根培养基配方。结果
MS+NAA0．1mg／L+BA1．0mg／L利于诱导出芽，可用于初代培养。继代增殖则以MS+IBA0．4mg／L+NAA
0．2mg／L+GA0．5～1．0mg／L、MS+NAA0．1mg／L+GA1．0mg／L和MS+IBA0．2mg／L+BA0．4～O．8
mg／L+GA0．5～1．0mg／L3种培养基交替培养，繁殖系数6．0倍／50d。1／2MS+IBA0．8mg／L适宜诱导生根获
得再生植株，生根率75％。生根苗春夏之交移栽最好，成活率90％。结论本研究得出的方法可用于工厂化生产广
西地不容种苗。 、
关键词：广西地不容，组培快繁f种苗
中图分类号：R282．13 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)03—0445—05
收稿日期：2006—05—12
基金项目：广西壮族自治区科技攻关项目(桂科攻0322024—3B)
作者简介：黄宁珍(1968一)，女，广西大化县人．副研究员，从事药用植物生物技术研究工作。
E—mail：huangnz@gxib．cnhnzhen68@yahoo．com．cn
万方数据
三七剪口指纹图谱研究及应用
作者： 张敏， 胡坪， 罗国安， 王义明， ZHANG Min， HU Ping， LUO Guo-an， WANG Yi-ming
作者单位： 张敏,胡坪,ZHANG Min,HU Ping(华东理工大学化学与分子工程学院,上海,200237)， 罗国安
,LUO Guo-an(华东理工大学药学院,中药现代化工程中心,上海,200237;清华大学生命科学与
医学研究院,北京,100084)， 王义明,WANG Yi-ming(清华大学生命科学与医学研究院,北京
,100084)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(3)
被引用次数： 4次

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