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救心胶囊对低密度脂蛋白损伤内皮细胞黏附因子表达的影响



全 文 :中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·1045·
均呈现一定的a一葡萄糖苷酶抑制剂的作用,在实验
所设定的高、中、低3个浓度下,A组对a一葡萄糖苷
酶的抑制率都是最高的。随着药物浓度的增加,实验
药物A、B、C组及阳性药物组对a一葡萄糖苷酶的抑
制率都有一定程度的增加。统计学结果表明,A、B、
C3种实验药物均有a一葡萄糖苷酶抑制剂的功能,
且对a一葡萄糖苷酶的抑制效果呈现较显著的量效
关系。 ·
4讨论
本研究结合植物化学与药理学研究手段,观察
牛蒡子各提取物的降血糖作用,通过四氧嘧啶诱导
的糖尿病模型小鼠降血糖实验表明:牛蒡子提取物
对糖尿病模型小鼠具有降血糖作用,且与水提物相
比,牛蒡子乙醇提取物总体上效果更好,因此推断具
有降血糖作用的活性成分主要存在于乙醇提取物
中,为脂溶性成分。
d一葡萄糖苷酶可使复合碳水化合物分解成为可
被人体吸收的单糖,而旺~葡萄糖苷酶抑制剂正可以
通过抑制该酶活性延迟或减少餐后血糖升高。目前,
从中草药中筛选a一葡萄糖苷酶抑制剂的研究已取
得了一些进展[5’6]。牛蒡子提取物的a一葡萄糖苷酶
抑制率实验表明其降血糖作用可能与其抑制a一葡
萄糖苷酶活性有关。今后将对其降血糖的物质基础
和作用机制做进一步地追踪,为牛蒡子的进一步开
发利用提供理论指导。
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救心胶囊对低密度脂蛋白损伤内皮细胞黏附因子表达的影响
刘俊荣1,姜希娟2,朱丽光3,范英昌2
(1.天津中医学院传统体育教研室,天津300193;2.天津中医学院病理教研室,天津300193;
3.天津市南开区中医医院,天津300191)
近年来心绞痛的发病率处于较高水平,严重影
响人们的生活质量。救心胶囊由细辛、荜茇、良姜等
中药组成,是在传统中医理论指导下,结合多年临床
实践,总结出的治疗心绞痛的有效方剂,其运用温通
化瘀、止痛强心之法。在前期临床疗效肯定的基础
上,将临床实验研究与体外实验相结合,以内皮细胞
为研究对象,从对细胞间黏附分子一1(ICAM一1)及
血管细胞间黏附分子一1(VCAM一1)表达的影响人
手,探讨救心胶囊治疗心绞痛的作用机制。
1材料
救心胶囊,天津中医研究院制剂,批号:津药制字
(2001)ZD0429;救心胶囊原方,购于天津中医学院
中医研究所;低密度脂蛋白(LDL),购自中国医学科
收稿日期;2004—10—27
基金项目:天津市科委资助课题(023611611)
作者简介:刘俊荣,女,副教授,主要从事中医养生研究。
学院基础研究所。D—MEM/F。。培养基、胎牛血清
(FBS),Hyclone公司产品;兔抗人、小鼠、大鼠细胞
间黏附分子(ICAM一1),兔抗人、兔、小鼠、大鼠血管
内皮细胞黏附分子(VCAM一1),SABC试剂盒,DAB
显色试剂盒,均购自武汉博士德生物工程有限公司;
第Ⅷ因子相关抗原抗体及免疫组化SABC染色试剂
盒,北京中山生物技术有限公司;噻唑蓝(MTT)、二
甲基亚砜(DMSO),均为Sigma公司产品。日本大耳
白家兔,天津中医学院实验动物中心提供。
2方法
2.1 内皮细胞及其鉴定:人脐静脉内皮细胞系
(ECV一304,NationalDefenseMedicalCo lege.
Tokorozawa,saitama,日本)。形态结构观察:在显
万方数据
·1046· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
微镜下观察细胞形态,呈鹅卵石样,符合典型的内皮
细胞形态。Ⅷ因子鉴定:培养细胞呈明显的Ⅷ因子阳
性表达,细胞胞浆可见大量棕色物质,可判定培养细
胞为内皮细胞。
2.2含药血清的制备:选用日本大耳白家兔4只,
雌雄各半,体重2~2.5kg,按体表面积等效量10
倍(26.8g/kg)ig给予救心胶囊,每日1次,连续1
周。第7天ig2h后,于无菌条件下,心脏取血,每只
约取60mL。静置数小时后,4000r/min离心15
rain,取上清液,分装,4℃保存备用。
2.3 中药提取液的制备:按救心胶囊原始方剂购进
中药(130g)。将含挥发油成分较多的中药混合后
用水浸泡过夜,提取挥发油,待用。将药渣与方中其
他药物混合水煎30min,滤过;药渣加少量水再煎
20min,滤过,合并滤液。冷却至室温,加无水乙醇至
其终体积分数为60%,稍静置。用双层滤纸滤过,蒸
发掉乙醇及多余水分。取出药液与挥发油混合加水
补足至130mL,制成中药药液(1g/mL)。滤过除
菌,4℃保存备用。中药复方的成分经天津中医学
院中医药研究中心鉴定(含中药细辛的有效成分
1一细辛细素1.23g/130g)。
2.4 中药提取液给药剂量的确定:MTT法测定细
胞活力。取生长良好的细胞(接种于96孔板),无血
清培养24h后,加入中药提取液,使其终质量浓度
分别为0、100、500、1000、1500、2000弘g/mL,共6
组。培养48h后进行细胞活力测定。选择570nm
波长,在酶标仪上测定各孔吸光度(A)值。结果显
示500弘g/mL以上质量浓度中药提取液造成细胞
活力明显下降,因此,选定给药剂量为500弘g/mL。
2.5 LDL损伤模型的建立、分组及给药方法:按
0、50、75、i00mg/L配制LDL培养液。取生长良好
的细胞(接种于96孑L板),分别加入上述培养液进
行分组培养,48h后MTT法进行细胞活力测定。
MTT结果显示LDL在50mg/L以上质量浓度细
胞活力明显降低,因此选用最低质量浓度50mg/L
的LDL培养液进行模型制备。实验分4组,正常组:
把原有培养液中20%FBS换成20%正常兔血清继
续培养。LDL组:加入50mg/LDL培养液进行培
养。LDL+中药组:在LDL培养液中,加入500弘g/
mL中药提取液进行培养。LDL+含药血清组:把
LDL培养液中20%正常兔血清换成10%正常兔血
清加10%含药血清进行培养。分组培养48h后,分
别取各组培养上清液及贴壁细胞进行指标测定。
2.6检测方法:按照免疫细胞化学试剂盒说明书进
行。VCAM一1、ICAM一1均在细胞浆表达,阳性细胞
可见胞浆出现棕黄色颗粒。10×20倍镜下以目镜测
微网的一个大网格为单位面积,计数细胞阳性率,每
张玻片计数10个视野,取均值。
2.7统计方法:采用SPSSl0.0软件系统进行方差
分析,组间比较采用q检验。
3结果
结果表明LDL损伤后,VCAM一1及ICAM一1
表达显著升高,与正常对照组相比差异非常显著
(尸著降低,与LDL损伤组相比差异显著(P此外,与LDL+含药血清组相比,LDL+中药组的
VCAM一1表达降低更为明显(P表1救心胶囊对LDL损伤内皮细胞VCAM一1
和ICAM一1表达的影响(;土s,辟一10)
Table1 EffectofJiuxinCapsuleonexpression
ofVCAM一1andICAM.1ofendothelial
cellsdamagedbyLDL(;士s,辟一10)
与正常对照组比较:一P<0.01;与LDL损伤组比较:
44P。’P△△P4讨论
心绞痛属于中医“胸痹”、“真心痛”的范畴。其常
见证型为阳虚血瘀、阴寒凝滞,故治以温通化瘀,止
痛强心之法。救心胶囊针对病机特点,并结合现代医
学理论组方,在临床应用多年,疗效显著。心绞痛属
于冠心病的一种类型,而冠心病最主要的病因即为
血脂升高,其中LDL的作用尤为突出,因此,本实
验将临床研究与体外实验相结合,以内皮细胞为研
究对象,以LDL复制细胞损伤模型,对心绞痛发病
机制及救心胶囊的作用机制进行深入探讨。
救心胶囊方中重用细辛、荜茇、良姜、白芷、桂枝
以温经行气,推动血行,同为君药;并用丹参、赤芍、
乳香、没药、水蛭等以活血化瘀,辅助君药以行气止
痛,共为臣药;同时取辛凉开窍之冰片,其性走窜,消
肿止痛迅速,并可引诸药入经,用作使药。方中有补
有散,攻补兼施,共凑温经活血、止痛强心之效。
本实验主要从通过减少炎症反应及血小板聚集
维持斑块的稳定性,减少斑块破裂及继发血栓形成
入手对救心胶囊的作用机制进行阐述。Rossrl]认为
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·1047·
动脉粥样硬化(AS)是动脉壁对各种炎症损伤的炎
症一增殖反应,而其中炎症、内膜巨噬细胞聚集、SMC
的迁移和增殖及细胞外基质的聚集等诸多环节均依
赖于早期黏附分子的作用。在离体内皮细胞上,脂蛋
白和脂类可诱导ICAM一1和VCAM一1的表达[2]。
在人类AS病变部位和内皮细胞上观察到黏附分子
表达增强o]。本研究结果显示LDL损伤后内皮细胞
黏附分子表达上调,说明炎症反应在AS的发生、发
展过程中起到重要作用。救心胶囊可以有效地减
少黏附分子ICAM一1和VCAM一1的表达,对于
ICAM一1的影响以含药血清的效果优于中药组,具
体机制尚待研究。
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虎斑游蛇醇提取物抗炎作用及其机制
赵文静,刚宏林,李树莲
(黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨 150040)
虎斑游蛇Natrixt grinalL teralis(Berthold)
是一种有着重要药用价值的动物类药材,为游蛇属
无毒蛇。传统医学认为虎斑游蛇具有祛风湿、止痹
痛、解毒等功能,因此在民间被广泛应用。本课题组
对虎斑游蛇的抗炎作用已做了系统的实验研究,证
实了其具有良好的抗炎作用n]。为了补充蛇类药材
的严重缺乏和合理开发新型药用蛇种,本实验对其
抗炎作用机制进行了深入探讨。
1实验材料
1.1 药材与制备:虎斑游蛇捕捉于黑龙江省虎林县
境内,活体经黑龙江中医药大学生药教研室鉴定为
游蛇科虎斑游蛇N.tigrinalLateralis(Berthold),
药材经干燥磨成粗粉,由黑龙江中医药大学机能实
验室制备成醇提取液(含生药量1g/mL,其中含谷
氨酸7.177%、甘氨酸4.944%、天门冬氨酸
4.206%,含锌、铁、镁分别为138、332、171 rag/
kg),用生理盐水配制。
1.2试剂:三氯醋酸(天津市科密欧化学试剂开发
中心),硫脲(天津开发区海光化学制药厂),抗坏血
酸(VC,广东汕头市西陇化工厂),2,4一二硝基苯肼
(中国医药集团上海化学试剂公司),放射免疫诊断
皮质醇试剂盒(北京北方生物技术研究所制造)。
1.3动物:Wistar大鼠,由黑龙江中医药大学动物
实验中心提供。
1.4仪器:722型可见分光光度计(上海光谱仪器
有限公司制造,KJ05030807),7一放射免疫计数仪
(西安核仪器厂,型号FJ--2003P3)。
2方法与结果
2.1 对去肾上腺大鼠蛋清性足跖肿胀的影响[2]:取
健康Wistar大鼠40只,雄性,体重150~180g,用
乙醚浅麻醉后,在无菌条件下将大鼠的双侧肾上腺
切除,于术后im青霉素,每天1次,共计3d抗感
染,并喂予葡萄糖氯化钠溶液代替饮水。并在术后5
d按体重随机分成4组,分别为对照组、虎斑游蛇醇
提取物高、低剂量(20、10g/kg)组和0.075%氢化
可的松(15mg/kg)组。各组ig给药,给药1h后,
将10%新鲜鸡蛋清0.1mL注入每只大鼠右足跖
皮下致炎,致炎后用容积法测量注射蛋清致炎后
0.5、1.5、3、4、5、7h的足跖体积,以观察不同时间
的足跖肿胀程度,计算抑制率。结果见表1。虎斑游
蛇醇提取物的高、低剂量组在不同时间对切除肾上
腺大鼠蛋清性足跖肿胀均有显著抑制作用。
肿胀度一(致炎后右后足体积一致炎前右后足体积)/致
炎前右后足体积X100%
肿胀抑制率一(对照组平均肿胀度一给药组平均肿胀
度)/对照组平均肿胀度×100%
收稿日期:2004—12-07
基金项目:黑龙江省自然科学基金资助项目(C0215)
作者简介:赵文静(1960~),女,山东莱阳人,硕士,教授,现任黑龙江中医药大学中药学教研室主任,哈尔滨市政协委员及黑龙江省动物
药及药用动物学会理事,研究方向为动物药及药用动物的研究。E—mail:zhaowenjing@hljucm.net
万方数据
救心胶囊对低密度脂蛋白损伤内皮细胞黏附因子表达的影响
作者: 刘俊荣, 姜希娟, 朱丽光, 范英昌
作者单位: 刘俊荣(天津中医学院,传统体育教研室,天津,300193), 姜希娟,范英昌(天津中医学院,病
理教研室,天津,300193), 朱丽光(天津市南开区中医医院,天津,300191)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(7)

参考文献(3条)
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