全 文 ：RP-HPLC 法制备银杏酸的研究
张　鉴1, 王　兰2, 袁成凌1, 王相勤1, 余增亮1Ξ
(11 中国科学院离子束生物工程学重点实验室, 安徽 合肥　230031; 21 安徽中医学院, 安徽 合肥　230022)
摘　要: 目的　研究 5 种银杏酸单体的 R P2H PL C 制备分离条件。方法　将银杏外种皮的环己烷提取物经过预处
理, 采用H PL C2M S 鉴定, R P2H PL C 分离、制备银杏酸单体。结果　该制备方法所得的 5 种银杏酸单体纯度超过
98%。结论　通过H PL C2M S 检测确定银杏总酚酸不同物质的出峰位置, 在制备柱上可以获得多种银杏酸单体, 分
离产物达到该类产品检测用对照物质的质量要求。
关键词: 银杏; 银杏酸; 制备高效液相色谱; 质谱
中图分类号: R 28412; R 286102　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 11 1238 02
Prepara tion of g inkgol ic ac ids by RP-HPLC
ZHAN G J ian1, W AN G L an2, YUAN Cheng2ling1, W AN G X iang2qin1, YU Zeng2liang1
(11 Key L abo rato ry of Ion Beam B ioengineering, Ch inese A cadem y of Sciences, H efei 230031, Ch ina;
21 A nhui Co llege of T radit ional Ch inese M edicine, H efei 230022, Ch ina)
Key words: G inkg o biloba L 1; g inkgo lic acids; p repared2H PL C; M S
　　银杏类制剂是近年治疗心脑血管类疾病的主要
药物, 在欧美销量排于植物药首位, 其质量指标中致
敏物质银杏酚酸类成分的检测, 由于长期缺少该类
物质对照品, 无法有效地展开相关质量指标检测工
作[1 ]。银杏酚酸类成分属于漆树酸类物质, 在 6 位取
代有饱和或不饱和长链烷基的水杨酸, 结构见图
1[2 ]。由于它们结构相似, 性质相近, 采用常规硅胶柱
色谱分离需要通过多步纯化才可得到纯度较高的标
准物质[3 ]。本研究中将银杏外种皮的环己烷提取物
经预处理, 得到具有较高含量的银杏总酚酸后, 采用
H PL C2M S 联用, 判断色谱峰对应的结构, 再根据判
断结果, 使用制备型R P2H PL C 分离, 收集相应色谱
峰, 制备多种银杏酸单体。
1　仪器与试药
F inn igan A dvan tage L C2M S, Su rveyo r L C
System (PDA , A u to samp le, Pump ) , Xcalibu r 色
谱工作站,M ass F ron t ier 质谱分析工作站。W aters
P rep—L C4000 制备泵,M illenn ium 32 工作站,W a2
ters 486 检测器。甲醇、环己烷、石油醚为分析纯, 流
动相用甲醇为色谱纯。硅胶为柱色谱用, 100～ 200
目。银杏白果外种皮购自江苏省邳州, 经安徽省药品
检验所刘信顺鉴定为银杏G inkg o biloba L 1 干燥成
熟果实的外种皮。
(CH 2) 12CH 3　　　　　　　　C13∶0　GA 1
(CH 2) 7CH = CH (CH 2) 5CH 3 C15∶1 GA 2
C17H 31 C17∶2 GA 3
(CH 2) 14CH 3 C15∶0 GA 4
(CH 2) 11CH = CH (CH 2) 3CH 3 C17∶1 GA 5
图 1　银杏酸结构式
F ig1 1　Structures of g inkgol ic ac ids
2　方法与结果
211　色谱条件
21111　分析条件: 色谱柱: W aters D elta Pak (150
mm ×319 mm , 5 Λm ) ; 柱温: 35 ℃; PAD 检测波长:
310 nm ; 流动相: 1% HA c 水2甲醇 (7∶93) ; 体积流
量: 018 mL öm in; 进样量: 1 ΛL。质谱条件: 分流比
5∶1; 毛细管温度: 300 ℃; 喷雾电压: 5 kV ; 鞘气 (氮
气)体积流量: 20 L öm in; 毛细管电压: 38 V。
21112　制备条件:W aters D elta Pak 柱 (300 mm ×
19 mm , 15 Λm ) ; 流动相: 1% HA c 水2甲醇 (10∶
90) ; 体积流量: 12 mL öm in; 进样量: 500 ΛL ;W aters
486 检测器检测波长: 310 nm。
212　供试品溶液制备: 取干燥的外种皮 3 kg 粉碎,
·8321· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 11 期 2004 年 11 月
Ξ 收稿日期: 2004201213
基金项目: 安徽省“十五”中药产业化专项 (01803027)
作者简介: 张　鉴 (1971—) , 男, 陕西西安人, 博士, 研究方向为天然产物和发酵产物活性成分的研究及基因工程产品的分离纯化。
T el: (0551) 5593096　E2m ail: shangx ia@m ail1hf1ah1cn
用 20 L 环己烷水浴回流提取 3 次, 滤过, 减压回收,
得棕黑色油状浸膏 150 g。将浸膏用甲醇2水 (30∶
70) 5 L 超声溶解, 离心, 用氯仿 5 L 分 3 次萃取, 经
超速离心机离心 (10 000 röm in) 后, 合并氯仿层, 弃
去甲醇水溶液, 浓缩氯仿萃取液得棕黄色浓缩液
200 mL。将所得浓缩液拌以硅胶, 放入 40 ℃烘箱
中, 抽真空挥去氯仿后, 上硅胶柱 (50 mm ×250
mm ) 用石油醚洗脱, 得到淡黄色洗脱液。回收石油
醚后得到富集的银杏总酚酸浓缩液 50 mL。用甲醇
超声溶解银杏总酚酸, 微孔滤膜滤过后得到银杏总
酚酸甲醇溶液, 作为制备色谱供试品溶液, 其中银杏
总酚酸质量分数约为 80%。该溶液色谱分析谱图见
图 2。银杏酸质谱数据见表 1, 与文献对照确定相应
物质[3 ]。
12GA 1　22GA 2　32GA 3　42GA 4　52GA 5
图 2　银杏总酚酸的 HPLC 图
F ig1 2　HPLC chromatogram of tota l g inkgol ic ac ids
表 1　银杏酚酸 HPLC-M S 检测结果
Table 1　D eterm ination of g inkgol ic ac ids by HPLC-M S
成　分 保留时间öm in 〔M 2H〕
GA 1 4107 31912
GA 2 4121 34513
GA 3 4158 37313
GA 4 5140 34712
GA 5 5171 37312
213　制备色谱分离: 将所得银杏总酚酸甲醇溶液每
次进样 500 ΛL , 分离时间为 60 m in, 制备谱图见图
3。阴影为馏份收集器收集的部分, 收集液浓缩后在
相同的制备条件下重复进样以增加产物的纯度。经
检验所得 5 种银杏酚纯度均超过 98%。
12GA 1　22GA 2　32GA 3　42GA 4　52GA 5
图 3　制备高效液相色谱分离银杏酚酸色谱图
F ig1 3　Chromatogram of g inkgol ic ac ids
by prepared HPLC
3　讨论
　　实验中对白果外种皮采用环己烷直接粗提, 减
少了黄酮和多糖等水溶性和醇溶性杂质在粗提物中
的含量。采用硅胶柱吸附, 石油醚洗脱进一步减少其
他成分的含量, 在流出液中富集银杏酚酸类物质。
　　由于植物药成分复杂, 在难以获得对照品的情
况下, 较难判断液相色谱峰对应的成分, 所以在研究
中使用分析柱初步分析, 通过质谱检测, 得到峰位的
一些基本的结构信息, 判断未知峰的结构情况, 确定
分离目标峰位, 再通过使用同类型制备色谱柱放大,
可以准确地分出目标成分, 并且一次可以获得多个
目标成分, 相对增加了一个分离单元的对照品制备
量, 减少了制备成本。
　　制备色谱分离时要综合考虑分离度和载样量,
由于制备色谱进样量较大, 一般分离度不如分析色
谱, 在实验中采用峰位切割的收集方法, 得到不同时
间段的流出液, 浓缩后再循环进样, 得到高纯度的单
体物质。
References:
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A , 2001, 930: 10921171
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