全 文 ：中草药 。 第 卷第 期 年 月 一
红车轴草中总异黄酮提取精制工艺研究
李崇明 , 向 阳 , 翟 莉 , 曾庆恢
湖北省暨武汉市中药现代化工程技术研究中心 , 湖北 武汉
红车轴草 八了 仇 ‘ 为豆科车轴草
属多年生草本植物 , 又名红三叶 、 红花首猎 , 三叶草 。
全国大部分地区均产 。 有抗肿瘤 胃癌 、乳腺癌 和治
疗骨质疏松 、更年期综合症等作用川 , 红车轴草 中异
黄酮具有双向调节作用川 。 因此开发红车轴草中异
黄酮作为临床用药具有广阔的市场前景 。 为了找到
红车轴草 的最佳提取工艺 , 本实验采用 法 、
正 交 试验 及 大 孔 树脂精 制 制 备 红 车 轴 草 中总 异
黄酮 。
仪器与试药
一 自动 进 样 器 、 检 测
器 。 染料木素 、 大豆素 、鹰嘴豆芽素 和 对照品购
自美国 公司 , 纯度均为 。
方法与结果
色 谱 条 件 色 谱 柱 一 。
·
, 拼 进样量 拼 体积流量 柱
温 室温 流动相 乙睛 一水 检测波长 。
。 采用外标法计算染料木素 、 大豆素 、鹰嘴豆芽素
、 的含量 , 并将其结果相加 , 得总异黄酮 。
对照品溶液 的制备 精密称取染料木素 、 大豆
素 、鹰嘴豆芽素 、 对照品适量 , 加甲醇制成
的混合对照品溶液 。
供试品溶液的制备 取提取物 固体物 ,
精密称定 , 置 量瓶中 , 加 甲醇 , 超声处
理 , 放冷 , 加 甲醇至刻度 , 摇匀 , 用 拼
微孔滤膜滤过 , 即得 。
提取溶剂 的选择 红车轴草中异黄酮类物质易
溶于甲醇 、 乙醇 、 醋酸乙醋和稀碱溶液 , 不溶于水 。取
红车轴草粗粉 , 用规定量 的甲醇 、 乙醇 、 醋酸 乙
醋 、 稀 溶液提取规定 的次数和时间 , 浓缩提
取液 , 得 固形物 , 测定 , 结果总异黄酮的质量分数分
别为 、 、 、 。 可见 , 甲醇 、 乙醇
和醋酸乙醋提取效果优于碱水提取 , 可能碱水提取
过程 中有效成分被分解 , 但 甲醇毒性大 、 醋酸乙醋因
腐蚀及使用没有乙醇方便 、安全 , 因此选用乙醇作为
提取溶媒 。
、
因素水平的考察 提取过程中 , 乙醇体积分数
、 乙 醇用量 、 提取时间 、 提取温度 是
影响提取效果的主要 因素 , 对上述因素各取 个水
平 , 因素水平安排见表 。
表 因紊水平表
因 素
水平
—
倍 ℃
提取条件的考察 称取相 同粉碎度的红车轴草
药材 份 , 每份 , 按 。 正交试验安排 , 乙 醇
提取 次后 收集提取液 。 精密量取试验提取液各
, 置于 已干燥至恒重 的蒸发皿 中 , 水浴蒸 干
后 , 置于 ℃烘箱中干燥 , 称重 , 计算固形物得
率 , 并测定总异黄酮含量 , 结果见表 , 方差分析见
表 。
表 , ’ 正 交试验设计与结果
,
序号 收率 总异黄酮
。
。
。
。
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‘
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表 方差分析表
方差来源
误差
离差平方和 自由度 方差 值 显著性
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收稿 日期 一 一
一 中草药 第 卷第 期 年 月
以总异黄酮质量分数为评价指标 , 由直观分析
可知 , 影响红车轴草 中总异黄酮提取效果 的因素为
, 误差最小 , 故 以 为误差方差 , 经
方差分析 , 提取溶媒浓度和提取温度对提取效果 的
影响具有显著性 , 因此最佳工艺条件为 。
大孔吸附树脂法精制 采用最佳工艺条件 , 小
试 批红车轴草 , 结果固形物收率约为 , 总异黄
酮质量分数约为 , 得红车轴草粗提物 。 由
于其质量分数达不到新药开发的要求 , 仍需进一步
精制 。 实验对溶剂精制法和大孔吸附树脂分离方法
进行了对 比试验 , 虽然溶剂精制 以后总异黄酮质量
分数能达到 以上 , 但其母液里仍有大量的有效
成分 , 并且残渣提取不完全 。 因此 , 选用大孔吸附树
脂法精制
。
预处理 取市售大孔吸附树脂 , 用 乙 醇浸泡
, 并用 乙 醇洗两次 , 以 乙 醇湿法装柱 , 用 乙醇洗
至与纯水混合不呈 白色混浊为止 , 再用纯水洗至无
醇味 。 经酸碱处理后洗至中性 , 备用 。
精制 取 已处理 的提取物 , 于热水 中调
值 一 , 使其充分溶解 , 放冷至室温 , 离心 。 取上清
液上 已处理好 的大孔树脂 干粉与树脂 比例为
, 控制体积流量 · , 并用检
测试剂检测其是否吸附饱和 , 吸附完后 , 用 倍
量纯水交 换 至水 清后 , 用 乙 醇梯 度洗
脱 , 收集 写乙醇部分 , 浓缩至无醇味后充分冷却 ,
静置 , 取沉淀部分干燥 , 得黄白色提取物 。 以鹰嘴豆
芽素 、 及染料木素 、 大豆素计的总异黄酮质量分
数在 以上 , 收率为 , 色谱图见图 。
匕
呼,
一大豆素 一染料木素 一鹰嘴豆芽素 一鹰嘴豆芽素
一 一 一 一
图 混合对照品 和红车轴草
提取物 的 圈谱
· 作
讨论
选择溶媒时 , 高体积分数的乙醇提取的成分较
高 , 但其中大量的叶绿素及油脂被提取出来 , 不便于
分离 , 须充分脱除油脂 , 才能干燥 。
使用溶剂精制的时候 , 虽然含量能达到 , 但其
须有配套设施 , 其最大的缺点就是残渣及母液不便
于处理 , 降低成品收率且含量低 , 使用大孔树脂富集
总异黄酮效果较理想 , 含量高 , 干燥较好 。
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山东药圣生物科技 平 邑 有限公司荣誉推出“ 药圣 ⑧天然澄清剂 ”
“ 药圣 十 ②天 然澄清剂 ”主要用 于 传统 中药“ 水提醇沉 ”工 艺 中乙 醉的替代 传统 中药提取物 如
银杏叶干浸 膏 、 山检叶黄酮 、 叶绿素等 工 艺 中有机溶媒的 水溶媒替代 中药水针
、
粉针 、 冻干粉针 的澄清
处理 无菌 、 无热 原的 中医 药原料 、 生化原料澄清处理 中草药
、 生化药品 、保健食品 、 口 服液 、 果汁 、 茶饮
料 、 啤酒等产品 的澄清处理 氨基酸类 、 维生 素类
、
有机酸类 、 杭生素类发酵液的澄清处理 对重金属 污
染的 工 业废液 水 及其他 工 业废水的澄清处理 对 出 口 食品 、 药品 、 药材 、 保健品 重金属农药残 留超标的
有效处理 。
收得率分别提 高 一 倍 含量提高 一 工厂 成本下 降 还生产硫酸软骨素 、 黄
连素系列 、 注射用 黄岑等 , 双花连翘普 , 银杏叶干浸 膏 、 丹参素 、 丹参川 茸浸膏等 , 以及 口 服级 中药提取
物 , 可根据客户要求生产 , 亦可进行相应 品种的技术转让
。
地 址 山 东平 邑县浚河路 号
江西公司地址 江 西 苍源 药业四楼
四川公司地址 推安鸿龙 大厦三楼
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