全 文 ：·372· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
表3荆芥炭炮制正交试验设计结果
Table3 ResultsoforthogonaltestonHSCprocessesing
方差来源离差平方和自由度 方差 F值 显著性
Fo05(2，4)一6．94Fo．01(2，4)=18．00
是外观描述等指标。故导致目前炮制工艺各地各法
及质量标准差异较大的现状。因此急需通过实验，逐
步统一规范。本实验通过药理筛选及含量测定相结
合的方法提出了荆芥炭炮制的最佳工艺，所提供的
实验方法可靠，测定结果能反映客观实际，是对实现
荆芥炭炮制条件统一和规范的可贵探索，也为荆芥
炭饮片的质量控制做了初步探索。
3．2荆芥炭中总黄酮的提取方式有：冷浸、超声提
取、索氏提取等，通过实验比较索氏提取法提取最
完全。
3．3重复最佳工艺，得到样品中总黄酮平均质量分
数为20．20mg／g(，z一3)，可知最佳工艺选择合理。
References：
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高效液相色谱法一蒸发光散射检测器和二级管阵列检测器测定
红车轴草提取物中鹰嘴豆芽素A和芒柄花素的含量
马 强1，周玉新2，雷海民3，王长海1
(1．大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系，辽宁大连116024；2．北京美德森医药技术开发有限公司，
北京100029；3．北京中医药大学中药学院，北京100102)
摘 要：目的建立以蒸发光散射检测器(ELSD)和二极管阵列检测器(DAD)测定红车轴草提取物中鹰嘴豆芽素
A和芒柄花素的高效液相色谱分析方法。方法色谱柱：KromasilC。s柱(250mm×4．6mm，5“m)；流动相：乙腈一
水梯度洗脱；检测波长：254nm；柱温：25℃；体积流量：1．0mL／min；检测器：Agilent1100二极管阵列检测器，
SEDEX55型蒸发光散射检测器。结果鹰嘴豆芽素A和芒柄花素分别在1．275～3．315肛g和0．965～2．509btg
与峰面积线性关系良好。鹰嘴豆芽素A和芒柄花素在以ELSD检测时的加样回收率分别为99．54％、100．84％，
RSD分别为2．03％、2．15％，在以DAD检测时的加样回收率分别为101．26％、101．59％，RSD分别为1．84％、
1．91％。结论本方法准确、快速、重现性好
关键词：红车轴草；鹰嘴豆芽素A；芒柄花素；高效液相色谱；蒸发光散射检测器；二极管阵列检测器
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)03—0372—04
DeterminationofbiochaninAandformononetini Trifoliumpratenseextract
byHPLC—ELSDandDAD
MAQian91，ZHOUYu—xin2，LEIHai—min3，WANGChang—hail
(1．DepartmentofBioscienceandBioengineering，SchoolofEnvir nmentalandBiologicalS ienceandTechnology，
DalianUniversityofTechnology，Dalian116024，China；2．BeijingMedSuPharmaceuticalTechnologyDevelopment
Co．，Ltd．，Beijing100029，China；3．CollegeofChineseMat riaMedica，BeijingUniversity
ofTraditionalChineseMedicine，Beijing100102，China)
收稿日期：2004—07—21
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·373·
Keywords：TrifoliumpratenseL．；biochaninA；formononetin；HPLC；ELSD；DAD
红车轴革TrifoliumpratenseL．系豆科车轴草
属多年生草本植物，又名红三叶、红菽草、红荷兰翘
摇、红花苜蓿、金雀菜、三叶草，原产亚洲西部，现广
泛分布于世界各地，我国各地均有栽培或野生。红车
轴草中主要含有鹰嘴豆芽素A、芒柄花素等异黄酮
类成分，具有抗肿瘤，治疗胃癌、肠癌、乳腺癌等功
效，此外还有治疗骨质疏松、改善妇女更年期症状等
用途，因而备受关注[1]。二极管阵列检测器(DAD)
是测定异黄酮类成分含量的常用检测器[2]，而蒸发
光散射检测器(ELSD)作为一种新型的通用型质量
检测器，已经被广泛应用于医药、化工、食品等众多
领域[3~5]。本实验建立了以ELSD和DAD同时检测
红车轴草提取物中鹰嘴豆芽素A和芒柄花素含量
的高效液相色谱法。
1仪器与试剂
Agilent1100高效液相色谱仪(在线脱气机、四
元泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器)；
AgilentChemStation色谱数据工作站；法国
SEDEX55型蒸发光散射检测器(ELSD)；
Millipore—Q超纯水制备仪。
鹰嘴豆芽素A对照品购自Sigma公司，纯度为
98％，芒柄花素对照品购自Acros公司，纯度为
99％；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。红车轴
草提取物由武汉联谊科技发展有限公司提供。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：KromasilC18柱(250mm×
4．6mm，5um)；流动相：乙腈一水梯度洗脱，25min
内乙腈由20％增加到80％；检测波长：254nm；体积
流量：1．0mL／min；柱温：25cC；进样量：10肚L；
ELSD漂移管温度：40℃；载气压力：0．20MPa。
2．2对照品溶液的制备：分别精密称取鹰嘴豆芽素
A和芒柄花素对照品适量，加甲醇制成0．255mg／
mL的鹰嘴豆芽素A对照品溶液和0．193mg／mL
的芒柄花素对照品溶液。
2．3供试品溶液的制备：精密称取红车轴草提取物
9．65mg，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，超声振
荡20rain，0．45ttm滤膜滤过，取续滤液，即得。
2．4标准曲线的绘制
2．4．1DAD检测时标准曲线的绘制：精密吸取鹰
嘴豆芽素A对照品溶液3．0、5．0、7．0、9．0、11．0
ttL，注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标(y)，进样
量为横坐标(X)，绘制标准曲线，结果鹰嘴豆芽素A
在1．275～3．315pg与峰面积的线性关系良好。所
得标准曲线方程为Y一7．715×103X+306，r一
0．999。精密吸取芒柄花素对照品溶液3．0、5．0、
7．0、9．0、11．0肚L，注入液相色谱仪。以峰面积为纵
坐标(y)，进样量为横坐标(x)，绘制标准曲线，结果
芒柄花素在0．965～2．509弘g与峰面积对数的线性
关系良好。所得标准曲线方程为y一6．506×103X+
90．948，r一0．9999。
2．4．2ELSD检测时标准曲线的绘制：精密吸取鹰
嘴豆芽素A对照品溶液3．0、5．0、7．0、9．0、11．0
弘L，注入液相色谱仪。以峰面积的对数为纵坐标
(y)，进样量的对数为横坐标(x)，绘制标准曲线，结
果鹰嘴豆芽素A在1．275～3．315btg与峰面积对数
的线性关系良好。所得标准曲线方程为Y一1．648
x+2．156，r一0．9974。精密吸取芒柄花素对照品
溶液3．0、5．0、7．0、9．0、11．0pL，注入液相色谱仪。
以峰面积的对数为纵坐标(y)，进样量的对数为横
坐标(x)，绘制标准曲线，结果芒柄花素在0．965
2．509P-g与峰面积对数的线性关系良好。所得标准
曲线方程为y一1．595X+2．152，r一0．9998。
2．5 精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10
pL，连续进样6次，测定峰面积，结果ELSD检测鹰
嘴豆芽素A和芒柄花素峰面积的RSD分别为
1．17％和1．22％；DAD检测鹰嘴豆芽素A和芒柄
花素峰面积的RSD分别为0．84％和0．96％。
2．6重现性试验：精密称取同批样品6份，按供试
品溶液制备项下方法平行制备，按上述色谱条件测
定，结果ELSD检测鹰嘴豆芽素A和芒柄花素质量
分数的RSD分别为1．34％和1．42％；DAD检测鹰
嘴豆芽素A和芒柄花素质量分数的RSD分别为
1．13％和1．07％。
2．7稳定性试验：取供试品溶液分别放置0、1、2、
4、6、8h，各精密进样10肛L，测定峰面积。结果
ELSD检测鹰嘴豆芽素A和芒柄花素峰面积的
RSD分别为1．47％和1．62％；DAD检测鹰嘴豆芽
素A和芒柄花素峰面积的RSD分别为1．26％和
1．35％。
2．8 回收率试验：采用加样回收法。精密称取已知
含量的红车轴草提取物(批号1)10．23mg分别精
密加入0．307mg／mL鹰嘴豆芽素A对照品溶液
3．0mL和0．414mg／mL芒柄花素对照品溶液3．0
mL，按供试品溶液制备方法操作，并按上述色谱条
万方数据
·374· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
件测定，结果ELSD检测鹰嘴豆芽素A的平均回收
率为99．54％，RSD为2．03％(咒一6)；芒柄花素的
平均回收率为100．84％，RSD为2．15％(规一6)；
DAD检测鹰嘴豆芽素A的平均回收率为
101．26％，RSD为1．84％(以一6)；芒柄花素的平均
回收率为101．59％，RSD为1．91％(，z一6)。
2．9样品的测定：取不同批号样品，制备供试品溶
液，按上述色谱条件，外标法测定样品，结果见表1，
色谱图见图1。
表1红车轴草提取物中鹰嘴豆芽素A和
芒柄花素的测定结果(一一3)
Table】DeterminationofbiochaninAa dformononetin
inT．pratensextract(肛一3)
ELSD
C2
I
． 1 l
0 5 10 15 20 0 5 10 15 20
时间t／min
1一鹰嘴豆芽素A2一芒柄花素
1-bioehaninA2一formononetin
图1 鹰嘴豆芽素A对照品(A)、芒柄花素对照品(B)
和红车轴草提取物(c、D)的HPLC图谱
Fig．1HPLCchromatogramsfbiochaninAreference
substance(A)。formononetinreferencesubstance
(B)，andT．pratensextracts(CandD)
3讨论
3．1 ELSD和DAD检测的比较：ELSD和DAD作
为不同类型的检测器，其适用范围不尽相同。DAD
是一种常用的紫外检测器，其检测成分应具有紫外
吸收；ELSD作为一种通用型质量检测器，可用于检
测不存在紫外吸收或仅在紫外末端具有吸收的样
品，在某种程度上弥补了传统的紫外检测器在这方
面的不足。此外，ELSD可以很好地支持梯度洗脱，
消除流动相配比变化对基线产生的影响。应用
ELSD和DAD同时检测，不仅能够获取更准确的定
量结果，而且可以获得更广泛的物质信息。
3．2 ELSD不同回归模型的比较：许多实验表明，
ELSD的响应值与被测物质量的关系曲线比较复
杂[6]，本实验分别运用线性模型、对数模型、二次曲
线模型和混合模型对二者的关系进行了研究，结果
见表2，可见混合模型为最优回归模型。
表2 ELSD不同回归模型的比较
Table2 ComparisonofvariousregressionmodelsofELSD
3．3检测波长的选择：经紫外扫描，鹰嘴豆芽素A
和芒柄花素对照品在190～600nm波长内，最大吸
收波长分别为260和248nm。本实验选择254nm
作为检测波长。
3．4流动相的选择：在上述色谱条件下，本实验分
别选择了不同比例的甲醇一水、乙腈一水和多种梯度
条件进行试验。结果证明，流动相选择乙腈一水进行
梯度洗脱，25min内待分析物质成分得到了较好的
分离，且满足定量要求。采用ELSD检测，流动相浓
度的变化不会引起基线的明显漂移，因此适宜以梯
度洗脱加以测定。
3．5换算因子的确定：鹰嘴豆芽素A和芒柄花素
的质量分数与峰面积间存在如下换算关系：CB=
AB／AF×CF×0．8(DAD检测)，lgCB一(19AB)／
(19AF)×lgCF×1．0(ELSD检测)，式中CB为鹰嘴
豆芽素A的质量分数；C，为芒柄花素的质量分数，
A。为鹰嘴豆芽素A的峰面积，Ar为芒柄花素的峰
面积。
References：
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HPLC法测定三九胃泰颗粒中九里香酮的含量
颜杰1，裴建梅2
(1．深圳三九医药股份有限公司，广东深圳518029；2．广东中南药业有限公司，广东深圳518020)
三九胃泰颗粒主要用于上腹隐痛、饱胀、反酸、
恶心、呕吐、纳减、心口嘈杂等胃病。“三九”的名字就
取源于其中的两味主药：三叉苦、九里香。处方中的
九里香具有理气止痛、温中助阳的作用[1]。现代药理
研究证明九里香具有抗菌、消炎、解痉、局麻及增强
免疫等功能[z]。但三九胃泰颗粒标准中没有含量测
定项，亦没有九里香的鉴别，因此有必要建立方法对
其进行控制。本实验以九里香中的九里香酮为指标，
采用HPLC法进行测定，方法准确可靠、简便迅速，
效果较好。
1仪器与试药
岛津LC一10A高效液相色谱仪、二极管阵列
检测器；九里香酮对照品(中国药品生物制品检定
所，批号：200101)；三九胃泰颗粒(规格：20g／袋，三
九医药股分有限公司)；甲醇(色谱纯，中国医学科学
院天津协和医学科技公司)；水为重蒸馏水。
2方法与结果
2．1检测波长的选择：三维图谱上查看九里香酮对
照品的紫外吸收，在210、242、266、337nm有最大
吸收。本实验选择受流动相紫外吸收干扰小、吸收峰
不尖锐的337nm作为检测波长。
2．2 色谱条件：色谱柱：ODS柱(150mm×4．6
ITlm，5ttrn)；流动相：甲醇一水(55：45)；体积流量：
1．0mL／min；检测波长：337nm；柱温：30℃；进样
量：20弘L。色谱图见图1。
2．3 对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒
重的九里香酮对照品约10mg，置100mL量瓶中，加
入适量甲醇，振荡溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，备用。
2．4供试品溶液的制备：精密称取三九胃泰颗粒
0 4 8 12 16 2024O 4 8 12 16 2024
时间t／min
*一九里香酮
*一murrayone
图1 三九胃泰颗粒(A)和九里香酮
对照品(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCchromatogramsfSanjiuWeitaiGranule
(A)andmurrayoneref rencesubstance(B)
10g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇100mL，称定质
量，超声处理40min，放冷，加甲醇补足损失质量，
滤过。精取续滤液50mL置蒸发皿中，水浴蒸至近
干，残渣用甲醇溶解，移入10mL量瓶，加甲醇稀释
至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2．5工作曲线的制备：精密量取九里香酮对照品储
备液0．5、1、2、3、5mL分别置于10mL量瓶中，用
甲醇稀释至刻度，摇匀，依前述色谱条件进行测定。
以峰面积(y)对进样量(X)进行线性回归，得回归方
程：y一116624X+95781，r一0．9997。结果表
明九里香酮在0．1～1．0P-g与峰面积线性良好。
2．6精密度试验：取批号为0406112的样品制备供
试品溶液，依前述色谱条件连续进样5次，测定九里
香酮峰面积，计算得其RSD为0．120A。
2．7重现性试验：取批号为0406112的样品，平行
取样5份，分别制备供试品溶液，进样测定，计算得
样品中九里香酮的平均质量分数为0．0483mg／g，
收稿日期：2004～08—13
作者简介：颜杰(1972一)，男，山东曲阜人，工程师，硕士，2000年毕业于沈阳药科大学，主要从事药品质量标准及中药现代化研究。
Tel：(0755)83360999—3135E—mail：jiepei@999．com．cn
万方数据
高效液相色谱法-蒸发光散射检测器和二级管阵列检测器测定
红车轴草提取物中鹰嘴豆芽素A和芒柄花素的含量
作者： 马强， 周玉新， 雷海民， 王长海， MA Qiang， ZHOU Yu-xin， LEI Hai-min， WANG
Chang-hai
作者单位： 马强,王长海,MA Qiang,WANG Chang-hai(大连理工大学环境与生命学院,生物科学与工程系
,辽宁,大连,116024)， 周玉新,ZHOU Yu-xin(北京美德森医药技术开发有限公司,北京
,100029)， 雷海民,LEI Hai-min(北京中医药大学中药学院,北京,100102)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(3)
被引用次数： 2次

参考文献(6条)
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1.马强.张金兰.周玉新.雷海民.王长海 高效液相色谱-电喷雾质谱法测定红车轴草中异黄酮类化合物[期刊论文]-
分析化学 2006(z1)
2.周广为.慕慧.李岳锋.杨芸 测定红车轴草中刺芒柄花素含量的新方法[期刊论文]-中药材 2007(1)


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