全 文 ：2. 1. 2　 BA浓度对不定芽的影响: 在 2, 5, 6号培养
基中 KT、 NAA浓度相同 , BA浓度不同。培养结果
显示: BA为 1. 0 mg /L时分化率和平均出芽数都是
最高的 , BA浓度高于或低于 1. 0 mg /L都会抑制不
定芽的产生和生长。
综合 BA和 NAA对不定芽诱导和生长的影
响 , 3号培养基是最适宜的培养基。不仅不定芽诱导
率高 ,而且平均出芽数最多、生长也最好。
2. 2　继代培养: 培养 2周后 ,芽苗基部膨大并长出
许多绿色小芽 , 30 d后 ,芽丛增殖 4～ 6倍。增殖的芽
丛可切成小簇继续增殖培养 ;也可将芽苗的较大叶
片切下培养 ,再次诱导其产生不定芽 ,从而达到扩大
增殖倍率的目的。
2. 3　芽的伸长和生根培养:经增殖培养后的丛生芽
高生长缓慢 ,几乎没有茎段 ,需进行芽的伸长培养。
在 MS+ BA 0. 5 mg /L+ N AA 0. 1 mg /L的培养基
上培养 1周后 ,丛生芽快速伸长 , 20 d后可达 8 cm
左右。将伸长后的芽苗接种生根培养基上 ,可诱导出
根 ,形成完整植株。从表 2可看出 ,不同培养基上的
生根时间、生根率、平均生根数有差异。其中不加激
素的 1 /2M S培养基上第 7天即开始长根 , 20 d后的
生根率达 100% ,平均生根数为 5. 3,是最佳生根培
养基 ;添加 0. 2 mg /L N A A的 1 /2M S培养基上的
芽苗第 10天开始长根 , 20 d后的生根率为 75% ,平
均生根数为 3. 3。添加 0. 5% IBA的 1 /2M S培养基
上的芽苗始终没有长根。
2. 4　炼苗移栽:据初步统计 ,乌头移栽后的成活率
可达 80%。 乌头试管苗的叶片很薄 ,极易失火而死
亡 ,因此在练苗移栽过程中保持较高的空气湿度和
适宜的温度是提高成活率的关键所在。
3　讨论
胡延玉等在乌头的组织培养中采用的培养基 ,
需加入维生素 B1、维生素 B6、烟酸、肌醇、生物素、腺
嘌呤泛酸钙、胱氨酸、酪蛋白水解物等多种有机物 ,
成本较高。而采用 MS培养基作为基本培养 ,并配以
适当的激素进行乌头的组织培养 ,也可使植株再生 ,
从而降低了成本。
林静等用带叶腋的茎段作为外植体进行培养 ,增
殖率仅为 1,繁殖系数低 ,不能满足快速繁殖的需要;
并且所用乌头的叶片作为外植体进行培养 ,诱导出了
愈伤组织 ,但没有分化出芽。而本次实验以无菌叶片
为外植体 ,配以适当的激素配比 ,直接诱导不定芽的
产生并得到生根植株。这种方法不仅外植体来源丰
富 ,且增殖倍率高 ,有利于乌头的工厂化育苗 ;同时也
为乌头的多倍体育种、基因工程研究提供了依据。
References:
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黄连的毛细管电泳特征指纹图谱研究
魏英勤 ,袁久荣 ,闫　滨
(山东中医药大学中药学院 ,山东 济南　 250014)
摘　要: 目的　建立黄连的高效毛细管电泳指纹图谱。 方法　采用毛细管电泳考察了不同批药材季铵碱的保留时
间和峰面积的相关性 ,并以小檗碱作为参照物计算了各色谱峰的相对保留时间和峰面积比值。 结果　不同批号的
黄连样品色谱组分的保留时间和峰面积的相关系数均大于 0. 999 0。 结论　建立的黄连高效毛细管电泳指纹图谱
稳定、可靠 ,可作为黄连的特征指纹图谱。
关键词: 黄连 ;毛细管电泳 ;指纹图谱
中图分类号: R282. 710. 3　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 06 0563 03
Study on fingerprint spectrum of Coptis chinensis by HPCE
WEI Ying-qin, YU AN Jiu-rong , YAN Bin
·563·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
收稿日期: 2002-09-06作者简介:魏英勤 ( 1971- ) ,男 ,山东郯城人 ,山东中医药大学 2000级博士 ,研究方向为中药及复方活性成分与质量控制。
Tel: ( 0531) 2612433, 2612425　 E-mai l: w yqsdu@ sina. com
( Co lleg e o f Chinese Materia Medica, Shandong Univ er sity o f TCM , Jinan 250014, China )
Abstract: Object　 To establish the fing erprint spect rum of Coptis chinensis Franch. by HPCE. Meth-
ods　 The correlation relativi ty of retention time and peak a rea of each ch romatog raphic peak in dif ferent
batches of medicinal materials w ere explo red respectiv ely, and beberine w as chosen as the reference to ca l-
cula te the relativ e retention time and the ra tio of peak a rea fo r each chromato graphic peak. Results　 The
cor relation coefficients o f relativ e retention time and the ratio o f each chromato graphic peak were all higher
than 0. 999 0 in dif ferent batches of medicinal materials. Conclusion　 The established fingerprint spect rum
is stable and credible, and could be used as cha racteristic fing erprint spect rum fo r C. chinensis.
Key words: Copt is chinensis Franch. ; HPCE; fingerprint
　　 黄连为毛莨科植物黄连 Copt is chinensis
Franch.、三角叶黄连 C . deltoidea C. Y. Cheng et
Hsiao或云连 C . teeta Wall. 的干燥根茎 ,系名贵中
药材 ,其中黄连习称味连。 指纹图谱技术是近年来发
展起来的采用色谱或光谱方法对中药材或中成药中
共有的、具有特征性的某类或某几类成分进行标示的
图谱 ,目前主要应用于中药的鉴定及质量控制 [1 ]。高
效毛细管电泳 ( HPCE)较高效液相色谱分离效率高 ,
对于成分复杂的中药体系分离效果更加理想 ,更适于
中药指纹图谱的检测。 本实验利用 HPCE检测了中
药黄连的指纹图谱 ,为黄连中药材的鉴定及其质量控
制提供了新的手段 ,并且采用的直观量化的数据化图
谱 ,为黄连色谱指纹图谱的制作提供了新的思路。
1　实验部分
1. 1　仪器与试剂: P /ACE System 5500 Beckman
毛细管电泳仪 (附紫外检测器 ) ,弹性石英毛细管 ( 50
μm× 50 cm ) (河北省永年光 纤厂 ) , Beckman
P /ACE Station, PHS-3B型酸度计 (上海精密仪器
有限公司 ) ;黄连 (味连 )C . chiensis Franch购自山
东建联中药店 (经建联中药店姚庭芝主任药师鉴
定 ) ,盐酸小檗碱对照品 ( berberine hydro chlo ride)
购自中国药品生物制品检定所 ,其他试剂均为分析
纯 ,所用水为亚沸蒸馏水。
1. 2　 HPCE测定条件 [2 ]: 采用经 CH3 COOH pH=
7. 0的 0. 05 mo l /L Na2B4O7-CH3OH( 85∶ 15)溶液
作为缓冲溶液 ,电压 14 kV,压力进样 5 s,紫外 254
nm检测 , Beckman P /ACE Station记录检测结果。
1. 3　样品制备 [3 ]: 称取经粉碎过 20目筛的黄连粉
末约 0. 1 g,置 100 mL容量瓶中 ,加入盐酸 -甲醇
( 1∶ 99)约 95 mL于 60℃水浴加热 15 min,取出 ,
超声 30 min,室温放置过夜 ,甲醇定容至 100 mL,取
续滤液作为供试液。
2　结果与讨论
* -小檗碱
* -beberine
图 1 黄连的 HPCE图谱
Fig. 1　 HPCE f inger-
print spectrum
of C. chinensis
2. 1　参照物的选择:采用添加
法对样品中小檗碱进行定性 ,
图谱中小檗碱峰强度大且稳
定 ,故选用小檗碱作为参照物
对图谱中其他色谱进行了相对
保留值和峰面积比的计算。黄
连的 HPCE图谱见图 1。
2. 2　数据化图谱的建立:取 3
批黄连 ,每批 3份 ,按“样品制
备”方法制备供试液并在上述
条件下实验 ,找出其共有峰 ,并
以小檗碱作为参照物对图谱中
其他峰进行相对保留值和峰面
积比的计算 ,建立了黄连的数
据化指纹图谱。 结果见表 1。
表 1　黄连的 HPCE数据化指纹图谱
Table 1　 Digital f ingerprint of C. chinensis
峰序号 相对保留时间 /min
相对保留时
间 RSD /%
峰面积
比值
峰面积比值
RSD /%
1 0. 968 0 0. 105 0. 275 7 　　　 8. 10
2 1. 000 0 1. 000 0
3 1. 026 0 0. 119 0. 135 7 7. 66
4 1. 051 0 0. 190 0. 219 3 1. 04
5 1. 145 0 0. 250 0. 075 6 8. 16
6 1. 318 8 0. 580 0. 034 9 17. 20
7 1. 339 7 0. 625 0. 085 8 3. 48
2. 2. 1　精密度试验: 取供试品溶液一份 ,连续进样
5次。 结果表明各色谱峰相对保留时间和峰面积基
本一致 (相对保留时间 RSD < 0. 2% ,峰面积比值
RSD < 0. 3% )。
2. 2. 2　稳定性试验: 取供试品溶液一份 ,分别于 0,
2, 4, 8, 10 h检测。结果表明 ,各色谱峰相对保留时
间 RSD < 0. 3% ,峰面积比值 RSD < 0. 7%。
2. 2. 3　重现性试验:称取同批样品 5份 ,按“样品制
·564· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
备”方法制备并检测。结果 5份样品各色谱峰相对保
留时间 RSD < 0. 3% ,峰面积比值RSD < 0. 5% 。
2. 2. 4　样品制备方法的影响: 取经粉碎过 20目的
同一批次的黄连 2份各 0. 1 g ,分别按“样品制备”方
法和沸水浴盐酸 -甲醇 ( 1∶ 99)回流 0. 5 h,均定容至
100 mL。两种样品提取方法获得的检测结果经相关
分析 ,各色谱峰相对保留时间相关系数 r= 0. 999 5,
各色谱峰峰面积比值 r= 0. 999 1。说明两种样品提
取方法结果基本一致。
2. 2. 5　药材粒度的影响:分别取粉碎过 20, 60, 100
目的同一批次的黄连粉末 ,按“样品制备”方法操作
并检测。结果表明不同药材粒度的黄连数据化指纹
图谱各色谱峰相对保留时间 RSD < 0. 5% ,各色谱
峰峰面积比值 RSD < 4. 8%。
3　讨论
以上研究表明 ,本实验建立的黄连的数据化
HPCE指纹图谱稳定、可靠。 3批黄连药材数据化指
纹图谱组分保留时间和组分峰面积比值经相关分
析 ,相关系数均> 0. 999 0,预示不同批次的黄连所
含化学成分不仅在组成上基本相同 ,而且所含化学
成分量的比例也基本相同。当然不同的产地、不同的
生长条件可能会对某些组份的含量比例产生影响 ,
但是否均在某一范围内波动 ,有待继续探讨。不同批
次的黄连 HPCE数据化图谱基本相同的实验结果 ,
也表明 HPCE数据化图谱在中药黄连品种鉴定以
及质量控制方面有着广阔的应用前景。
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[3 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. VolⅡ .
RP-HPLC法测定槐米中槲皮素的含量
徐雄良 1 ,张志荣 1 ,柯尊洪 2 ,田　锋 2
( 1. 四川大学华西药学院 ,四川 成都　 610041;　 2. 成都康弘科技实业 (集团 )有限公司 ,四川 成都　 610041)
摘　要 :目的　建立 RP-HPLC法测定槐米中槲皮素的含量。 方法　使用 Shim-pack CLC-ODS柱 ( 6. 0 mm× 150
mm, 5μm) ,以甲醇 -0. 4%磷酸溶液 ( 7∶ 3)为流动相 , 375 nm波长 ,测定槐米水解液中槲皮素的含量。结果　该方
法的线性为 10. 03～ 100. 3 ng ,r= 0. 999 7;平均回收率为 99. 06% , RSD= 2. 07% (n= 9)。结论　该方法测定样品
分离效果佳 ,灵敏度高 ,重现性好 ,结果准确可靠。
关键词: 槐米 ;槲皮素 ;反相高效液相色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 06 0565 03
Quantitative analysis of quercetin in bud of Sophora japonica by RP-HPLC
XU Xiong-liang
1 , ZHANG Zhi-rong
1 , KE Zun-hong
2 , T IAN Feng
2
( 1. West China Schoo l o f Pharmacy, Sichuan Univ er sity , Chengdu 610041, China; 2. Chengdu Kanghong
Science& Tech no lo gy Industr y ( Group) Co. , Ltd. , Chengdu 610041, China)
Key words: bud of Sophora japonica L. ; quercetin; RP-HPLC
　　槐米为豆科植物槐 Sophora japonica L. 的干
燥花蕾 ,具有凉血止血、清肝泻火之功效 ,用于多种
血热出血症、肝火上亢之头痛、目赤等症。 槐米主要
含芦丁 ( rutin) 10%～ 28% 、桦皮醇 ( betulin)、槐二
醇 ( sophoradio l)以及槐花米甲、乙、丙素 ( sopho rin
A, B, C) ,还含有槲皮素 ( quercetin) ,槐花皂苷Ⅰ ,
Ⅱ ,Ⅲ ( kaikasaponinⅠ ,Ⅱ ,Ⅲ )等 [1 ]。芦丁在酶或酸
的作用下水解成槲皮素。现代药理研究认为 ,槲皮素
具有较好的祛痰、止咳作用 ,并具有一定的平喘作
用 ,此外还具有降低血压、增强毛细血管抵抗力、调
·565·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
收稿日期: 2002-10-20基金项目:四川省重点科技项目:中药制剂现代化研究 (批准号: 01SG008-01)作者简介:徐雄良 ( 1969- ) ,男 ,湖北鄂州人 ,现为四川大学华西药学院 2000级硕士生 ,研究方向为药物新制剂和新剂型、中药质量的标准化。 Tel: ( 028) 85503798　 Fax: ( 028) 85456898　 E-mai l: xlx 999@ hotmail. com