全 文 ：HPLC法测定通脉颗粒中阿魏酸的含量
闫雪梅 ,赵慧萍 ,严　红
(天津中医学院第一附属医院 制剂室 ,天津　 300193)
　　通脉颗粒为我院自制制剂 ,由当归、姜黄等多味
药材加工制成 ,具有活血化瘀 ,养血通脉的作用。主
治小儿病毒性心肌炎 ,心肌供血不足 ,心前区疼痛等
症。为了更好地控制该制剂的质量 ,我们采用 HPLC
法对其君药当归中阿魏酸进行含量测定。 本法操作
简单 ,结果准确 ,重现性好 ,可作为本制剂的定量方
法 ,控制药品质量。
1　仪器与试药
美国 Waters高效液相色谱仪 ( 510输液泵 , 441
紫外检测器 ) , C1型 -6通 HPLC进样阀 , Ana star色
谱工作站。
通脉颗粒 (天津中医学院第一附院制剂室提
供 ) ,阿魏酸对照品 (中国药品生物制品检定所提供 ,
批号 0773-9910,供含量测定用 ) ,所用其他试剂均
为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　 色 谱 条 件: 色 谱 柱: Ir regulai-H C18柱
( 250 mm× 4. 6 mm , 10μm, 天津三维公司 ) ;流动
相: 甲醇 -0. 8%冰乙酸溶液 ( 30∶ 70) ;流速: 1. 0
m L /min;柱温: 室温 ;检测波长: 313 nm;灵敏度:
0. 05 AUFS;进样量: 20μL。色谱图见图 1。
* -阿魏酸
* -ferulic acid
图 1　阿魏酸对照品 (A)、通脉颗粒 (B)和阴性对照 (C)的
HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of ferulic acid ( A) , Tong-
mai Granula (B) and negative control ( C)
2. 2　对照品溶液的制备: 精密称取阿魏酸对照品
10 mg ,置 100 mL棕色量瓶中 ,加流动相稀释至刻
度 ,摇匀 ,取 1 mL置 50 mL棕色量瓶中 ,加流动相
稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 (每毫升含阿魏酸 2μg )。
2. 3　供试品溶液的制备:取本品内容物 ,混匀 ,取约
4 g ,精密称定 ,置磨口锥形瓶中 ,精密加入甲醇 -冰
乙酸 ( 19∶ 1) 50 m L,密塞 ,称定质量 ,超声处理 30
min,放冷 ,密塞 ,称定质量 ,用甲醇补足减失的质
量 ,摇匀 ,离心 10 min ( 1 000 r /min) ,精密取上清液
5 mL,置 10 mL量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀 ,用
0. 45μm滤膜滤过 ,弃去初滤液 ,收集续滤液作为供
试品溶液。
2. 4　线性关系考察: 精密量取贮备液 ( 0. 108 mg /
mL) 0. 5, 1. 0, 1. 5, 2. 0, 3. 0 mL,分别置 50 mL棕
色量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,用 0. 45μm
滤膜过滤 ,弃去初滤液 ,收集续滤液。分别精密吸取
20μL,注入液相色谱仪 ,测定。以峰面积为纵坐标 ,
阿魏酸对照品的含量为横坐标 ,绘制标准曲线。计算
得回归方程为: Y = - 6 949. 97+ 7. 95× 107X ,
r= 0. 999 9。结果表明阿魏酸在 0. 021 6～ 0. 129 6
μg与峰面积线性关系良好。
2. 5　精密度试验:取同一份对照品溶液 ( 0. 004 32
mg /mL)连续进样 5次 ,测定峰面积 ,结果 RSD=
0. 43% (n= 5)
2. 6　重现性试验: 对同一批号 (批号 20001211)样
品 5份 ,按上述方法制成供试品溶液 ,分别进样测定
峰面积 ,结果 RSD= 2. 77% 。
2. 7　稳定性试验: 取样品 (批号 20001211)依上法
制成供试品溶液 ,放置 0, 1, 2, 3, 4 h后测定其峰面
积 ,结果其 RSD= 2. 58% (n= 5)。
2. 8　回收率试验: 取同批样品 (批号 20001211) 5
份 ,精密加入阿魏酸对照品溶液 ( 0. 113 mg /mL)
1. 0 mL,制备供试品溶液 ,分别进样测定 ,计算回收
率。结果表明 5次试验平均回收率为 99. 46% ,RSD
为 2. 50%。
2. 9　样品测定:取 3个批号的样品依 2. 3项下方法
制成供试品溶液 ,精密吸取供试品溶液和对照品溶
液各 20μL注入液相色谱仪 ,测定峰面积 ,按外标法
·230· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-05-05
计算含量 ,结果见表 1。
表 1　通脉颗粒中阿魏酸含量测定 ( n= 3)
Table 1　 Ferulic acid in Tongmai Granula (n= 3)
批　号 阿魏酸含量 / ( mg· g- 1) RSD /%
20001110 0. 068 1. 04
20001211 0. 072 1. 94
20001213 0. 072 1. 12
3　讨论
3. 1　阿魏酸是当归中有效成分之一 ,具有明显扩张
冠脉血管 ,增加冠脉流量 ,改善心肌缺血作用。 它是
弱有机酸 ,根据文献我们采用流动相溶解 [ 1] ,使阿魏
酸稳定性增加 ,提高了分析结果的准确性。
3. 2　本品在进行波长选择时 ,取阿魏酸对照品适
量 ,用流动相溶解后做紫外扫描 ,测得最大吸收波长
为 313 nm ,与文献报道相同 [2 ] ,所以检测波长定为
313 nm。
3. 3　阿魏酸含量测定所用流动相文献报道主要有
甲醇-水 -磷酸系统和甲醇 -水 -冰乙酸系统 ,经比较以
甲醇 -水 -冰乙酸系统为佳 ,将甲醇与不同浓度冰乙
酸溶液以不同比例混合作为流动相进行洗脱 ,最终
确定为甲醇 -0. 8%冰乙酸溶液 ( 30∶ 70)作为流动
相 ,样品中阿魏酸峰可获得良好的分离效果 ,理论塔
板数以阿魏酸峰计算约为 4 000,在上述条件下 ,阿
魏酸与杂质峰分离度符合要求。
3. 4　分别用甲醇、 50%甲醇、醋酸乙酯 -甲酸、甲醇-
甲酸、甲醇 -冰乙酸等作溶媒对样品进行提取方法的
摸索。经测定 ,以甲醇-冰乙酸 ( 19∶ 1)作为提取溶剂
超声处理样品为佳。 通过对超声时间和提取溶媒量
的考察 ,发现用 50 mL甲醇-冰乙酸 ( 19∶ 1)提取 30
min已将样品中阿魏酸提取完全。
References:
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质研究 ) [M ] . Bei jing: China Medicinal Science and Tech nolo-
gy Publishing House, 1994.
大孔吸附树脂提取纯化银杏酚酸的研究
倪学文 ,吴谋成
(华中农业大学 食品科技系 ,湖北 武汉　 430070)
　　银杏酚酸 ( ginkgo lic acids)存在于银杏外种皮、
果肉和叶中 ,属漆树酸类化合物 ,具有抗肿瘤、抗炎、
抗过敏、抑菌、防治病虫害和日化用品添加剂等功
效 [1, 2 ]。从 20世纪 60年代就已经有银杏酚酸的分离
提取方法的报道。 Gellerman [3 ]利用氯仿和甲醇浸
提 ,用硅胶柱层析分离银杏酚酸 ; Itokaw a[ 4]将银杏
外种皮用甲醇浸提 ,再经硅胶柱和 ODS柱得 3种酸
性成分 ; Irie[5 ]使用正己烷浸提银杏叶 ,然后经硅胶
柱和 Sephades LH-20分离 ,用高效液相制备柱制备
银杏酚酸。这些方法普遍存在所需溶剂、设备昂贵 ,
方法烦琐的缺点 ,且无法对银杏酚酸进行大规模的
分离 ,在实际生产中难以得到应用。
本实验以银杏外种皮为原料 ,比较几种吸附树
脂对银杏酚酸的吸附性能 ,挑选出了适宜的吸附剂 ,
为吸附树脂法分离纯化银杏酚酸奠定一定的基础。
1　材料和仪器
银杏外种皮:采自湖北安陆 ,经清洗去杂和粉碎
干燥 ;大孔吸附树脂: 南开大学化工厂 ;其他试剂均
为分析纯 ,双蒸水。银杏酚酸对照品由本实验室制
备 ,经归一化法测定 ,含量大于 98%。
　　岛津 LC-6A高效液相色谱仪 ,配有 SPD-6AV
紫外可见检测器 , C TO-6A柱温箱 ;电子恒温水浴
锅 ;真空旋转蒸发器 ; Alpha l-5真空冷冻干燥器。
2　实验方法
2. 1　银杏酚酸粗提液的制备:称取银杏外种皮 ,以
80%工业乙醇为浸提溶剂 ,采用 1∶ 7的料液比 ,
60℃下回流提取 3次 ,每次 4 h,经抽滤 ,真空浓缩
后得到银杏酚酸粗提液即吸附原液。
2. 2　银杏酚酸测定方法: 采用高效液相色谱检测。
色谱条件:色谱柱: Supelcosi lTM LC-18 ( 15 cm× 4. 6
mm , 5μm);流动相: 90%甲醇 ,乙酸调 pH值为
3. 15;紫外检测波长: 310 nm;流速: 0. 7 mL /min;灵
·231·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-06-14作者简介:倪学文 ( 1977— ) ,女 ,湖北天门人 ,在读博士研究生 ,研究方向为天然产物化学。
Tel: ( 027) 87283263　 E-mail: nx w-d@ 163. com