全 文 ：· · 中草药 肠 群 第 卷第 期 年 月
中 , 当生根培养基中 为 一 时 ,
最有利于生根和成苗的 为 。
表 与 配比对姜试管苗生根及成苗的影晌 ’
外植体 分化成苗数” 平均根数 根发育
哩 · 一 ‘ 八吨 · 一 , 数个 个 · 外值体一 ‘ 八条 · 株一 ’ 情况
士 士 正常
士 士 常
士 土 正常
士 士 正常
士 士 轻度愈伤
, 士 士 正常
士 士 正常
士 士 正常
士 士 严重愈伤化
士 士 轻度愈伤
士 土 正常
士 士 正常
, 转接后 调查 , 生根率均为 “ 指高于 的
芽苗的数量
番 ,
“ 。
讨论
一般认为 , 在试管苗生长与分化过程中 , 细胞分
裂素 比率高时利于诱导芽 , 但在实际应用 中不仅要
考虑芽的增殖数量 , 更要注意分化芽苗的质量 , 只有
具有一定高度和粗度的芽苗才是有效芽苗 。 本试验
结果表明 , 细胞分裂素是姜芽分化增殖必不可少的 ,
但过高的细胞分裂素会影响芽苗的生长 。 而适量添
加生长素不仅可促进芽的分化增殖 , 更有利于芽苗
的生长 表 。 不过 , 质量浓度较高
时 , 姜芽苗生长表 现出细弱徒长趋势 ,
不利于移栽成活及移栽后的生长 , 这一点与曾令波
等在半夏组培中的结果相似圈 。
在不定根诱导形成中 , 生长素促进生根 , 而细胞
分裂素一般对不定根分化有抑制作用 , ’〕, 多数组培
苗生根单用生长素 , 也有在不含激素的培养基中诱
导生根的 。 张秀清等 在莱芜片姜组培时将幼芽转
到不含激素的空 白培养基中诱导生根 徐燕等川的
试验结果是在培养基中添加 , 生姜
的生根效果较好 。 但本试验发现 , 单用生长素 , 根易
愈伤化 , 形成不正常根 , 而适量附加 , 不仅可消
除愈伤化 、促进生根 , 而且可明显增加成苗数 , 当然 ,
较高的 则会对根的分化产生不利影响 。 本试验
中 , 最适 于姜 不 定 根 分化 和 成苗的激素配 比为
! ∀ # ∃ % 和 B A 0. 15 m g /L 。
R e f e r e n c e s
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u p p l )
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1 0 4
.
Z 又大 品种菊花中不同成分的含量比较
贾凌云’ , 孙启 时‘ , 黄顺 旺 ,
(l
. 沈阳药科大学中药学院 , 辽宁 沈 阳 1100 16 ; 2. 安徽省医药科技实业有限公司 , 安徽 合肥 230001)
摘 要 :目的 研究八大品种菊花中不同成分的含量 。 方法 以绿原酸 、木犀草素一 7 一O 一各D 一葡萄糖昔及芹菜素一 7 -
O
一各D 一葡萄糖昔为指标 , 采用高效液相色谱法对不同品种的菊花进行了含量测定 。 结果 绿原酸含量 以济菊和祁
菊最高 , 川 菊最低 ;木犀草素 一 7 一O 一月一D 一葡萄糖昔含量以济菊最高 , 而毫菊最低 ;芹菜素一 7 一0 一卜D 一葡萄搪昔含量以济
菊最高 , 而最低为贡菊 、 毫菊和怀菊 。 结论 绿原酸和黄酮类成分均高者才是优良品种 。
收稿日期 :2004一0 1 一 1 5
作者简介 :孙启时 (1945一) ,男 , 吉林松源人 , 教授 , 博士生导师 , 主要从事中药资源开发 和利用的研究 。
T e l
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( 0 2 4 ) 2 3 8 4 3 7 1 1
一3 6 9 o E
一
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中草药 C hinese T raditional and H erbal D rugs 第 35 卷第 10 期 2004 年 一O 月 . 1 18 1 -
关键词 :菊花 ;绿原酸 ;木犀草素一 7 一O 一卜D 一葡萄糖昔 ;芹菜素 一 7 一O 一卜D 一葡萄糖昔 ;R P 一H P L C
中圈分类号 :R 282.6 文献标识码 :A 文章编号:02 53 一 2 6 7 0 ( 2 0 0 4 ) 1 0 一 1 1 8 0 一 0 4
C o m P a r i s o n o f v a r i o u s e o n s t i t u e n t s i n e i g h t k i n d s o f e h r y s a n t h e m u m
J I A L i n g
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y u n ‘ , S U N Q i
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, ,
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卿sa nth em um m orifo liu水 R a m a t· ; e h l o r o g e n i e a e i d ; l u t e o l i n 一 7 一 O 一卜D 一g l u e o s i d e ; a p i -
g e n i n
一
7
一
O
一件D 一 g l u e o s i d e ; R P 一 H P L C
菊花作为一种传统中药 , 具有疏风 、清热 、 明目 、
解毒功效[l] 。 现代药理表明 , 菊花总黄酮具有降低血
压 , 扩 张冠状动脉 , 防止冠状动脉粥样硬化阁等作
用 , 临床上用于治疗高血压和冠心病阁 。 但其品种较
多 , 《中华人 民共和 国药典 》20 0。年版一部 载有滁
菊 、 毫菊 、贡菊和杭菊 , 而全国各地著名 的菊花共有
8 个品种 。 《中华人民共和国药典 》以绿原酸为指标
进行含量测定 , 而其治疗心血管疾病 的有效成分为
黄酮类化合物 , 其中木犀草素一 7 一 O 一件D 一葡萄糖昔及
芹菜素一 7 一 O 一 p 一 D 一葡萄糖昔是其有效成分之一阮 5〕,
本实验在对其化学成分和提取工艺进行研究的基础
上比 , 〕, 为了控制菊花的质量 , 利用高效液相色谱法 ,
对中国八大主流菊花的主要成分进行 了比较研究 。
1 材料
1. 1 样品来源 :滁菊 (安徽滁州 ) 、贡菊 (安徽款县 ) 、
毫菊 (安徽毫州 ) 、杭 白菊 、 祁菊 、 川菊 、 济菊 、 怀菊(河
南武陵 )分别购于当地 的药材公司 , 经沈阳药科大学
药用植物教研室孙启 时教授鉴定 为菊花 Ch ry sa n-
them um m ori fo lium R am a t. 。
1
.
2 仪器与试剂 :高效液相色谱仪 , 日本岛津公司 ,
型号 LC 一 1 0 A T ; 色谱柱 , K r o m a s i l C I , ( 2 0 0 m m x
4
.
6 m m
,
5 “m ) , 大连依利特有 限公司 ;甲醇 (色谱
纯 ) , 山东禹王实业有限公 司禹成化工厂 ;水 (娃哈哈
纯净水 , 杭州娃哈哈集团);其他为分析纯 。 绿原酸 ,
中国药 品生物制品检验所 , 批 号 753 一 9 4 06 ; 木犀草
素 一 7 一 O 一件D 一葡萄糖昔及芹菜素一 7 一 O 一 p 一 D 一葡 萄糖昔
对照品 , 自制 , 纯度 98 .5% 以上 。
2 方法与结果
2. 1 绿原酸含量测定
2.1.1 色谱条件及系统适用性试验:色谱柱为十八
烷基键合硅胶填充剂 ;0.1 m ol /L 磷酸二氢钠缓冲
液 一甲醇 (70 : 30) 为流动相 ;检测波长 :328 nm 。 理
论塔板数按绿原酸峰计算不低于 5 000 。
2
.
1
.
2 对照品溶液的制备 :精密称取绿原酸对照品
适量 , 置棕色量瓶 中 , 加水制成 0.1 m g/m L 溶 液 ,
即得 (zo oC 以下保存) 。
2
.
1
.
3 供试品溶液的制备[lj :称取菊花粉末 (过一
号筛)约 1 9 , 精密称定 , 置锥形瓶 中 , 精密加人 甲醇
50 m L , 称定质量 , 加热回流 Z h , 冷却 , 再称定质量 ,
用甲醇补足减失的质量 , 摇匀 , 滤过 , 精密量取续滤
液 10 m L , 蒸干 , 残渣加氯仿 5 m L , 浸渍 3 m in , 弃
去氯仿液 , 残渣挥去氯仿 , 加水适量溶解 , 转移至 5
m L 量瓶 中 , 加 水 至刻 度 , 摇 匀 , 微 孔 滤膜 (0 .45
拜m ) 滤过 , 即得 (应于当日测定) 。
2
.
1
.
4 线性关系的考察 :精密称取绿原酸对照品约
16 m g , 置 25 m L 棕色量瓶 , 加水溶解并稀释至刻
度 , 摇匀 , 再精确吸取 z· 0 、 1 · 5 、 3 · 0 、 4 · 5 、 6 · o m L , 置
10 m L 量瓶 中 , 加水稀释至刻度 , 摇匀 , 分别精确吸
取 10 拌L 进样 , 按色谱 条件测定峰面积 , 以质量浓
度 (C ) 为横坐标 , 峰面积值 (A ) 为纵坐标绘制标准
曲线 , 计算得回归方程 A 一 76 3 607 C 十37 3. 02 , r -
0
.
9 9 9 8
。 结果表明绿原酸在 0.064一0. 384 m g /m L
与峰面积线性关系 良好 。
2
.
1
.
5 精密度 试验 :取供 试 品溶液 , 重 复进样 5
次 , 记录绿原酸的峰面积 , R S D 一 0. 14 % 。
2
.
1
.
6 稳定性试验 :取供试品溶液 , 分别在 O 、 2 、 4 、
6
、
s h 测定 , 记录绿原酸的峰面积 , R S D 一 0. 1 2 % ,
结果样品在 s h 内稳定 。
2
.
1
.
7 重 现性试验 :精 密称 取 供 试 品 5 份 , 按
2.1.3 项下方法分别制成供试品溶液 , 进样分析 , 测
定绿原酸 的峰面积 , 结果 R S D 为 3.0 % , 表明方法
的重现性较好 。
2
.
1
.
8 回收率试验 :精密称取供试品 0.5 9 , 3 份 ,
按高 、 中 、 低分别加人绿原酸 , 按 2.1.3项下方法制
备 、测定 , 测得其 中绿原酸的平均回收率为 98 .。% ,
R S D 为 2. 1% 。
2
.
1
.
9 样品的测定 :分别精密称取样品 3 批各 1 9 ,
按 2.1.3项下制备方法 , 制成供试品溶液 , 进行测定 ,
记录绿原酸的峰面积 , 计算含量 , 结果见图 1 , 表 1 。
2
.
2 木犀草素一 7 一O 一 p 一 D 一萄糖昔 (L G )及芹菜素一 7 -
·
1 1 8 2
- 中草药 C hinese T raditionaland H erbalD rugs 第 35卷第 10期 2004 年 10 月
一~目~ . , ~ 曰‘~ . ~ . . ‘0 5 1 0时间 r/m in
2 . 2 . 5 精密度试验 :取供试 品溶 液 , 重复 进样 5
次 , 记 录木 犀草素一 7 一 O 一日一 D 一葡萄糖昔和芹菜素一 7 -
O
一件D 一葡 萄糖 昔 的峰 面积 , R S D 分别 为 。. 67 % 、
0
.
8 1 %
。
2
.
2
.
6 稳定性试验 :取供试品溶液 , 分别在 O 、 2 . 5 、
5
.
0
、
7
.
5
、
1 0
.
o h 测定 , 记录木犀草素一 7 一O 一卜D 一葡萄
糖昔 和芹菜 素一 7 一O 一件D 一葡 萄糖昔 的峰面 积 , R S D
分别为 0.46 % 、 0 . 85 % , 结果样品在 10 h 内稳定 。
2
.
2
.
7 重现 性 试 验 :精 密 称 取 供 试 品 5 份 , 按
2.2 .3 项下方法分别提取制成供试 品溶液 , 进样分
析 , 测定木犀 草素一 7 一O 一 p 一 D 一葡萄糖昔和芹菜素 一 7 -
O
一各D 一葡 萄糖 昔 的峰 面积 , R S D 分 别 为 0.82 % 、
1
.
6 %
。
2
.
2
.
8 回收率试验 :精密称取已测知含量的供试品
。. 5 9 , 3 份 , 按高 、 中 、 低分别加人木犀草素 一 7 一 O 一件
D 一葡萄糖昔 1 m g 和芹菜素一 7 一 o 一卜D 一葡萄糖昔 0. 3
m g , 按 2.2.3 项 下制备 、 测定 , 测得 其 中的木犀草
素一 7 一O 一日一 D 一葡萄糖昔和芹菜素一 7 一 O 一件D 一葡萄糖昔
回 收 率 分 别 为 98.4% 、 98 . 3 % , R S D 分 别 为
1.34 % 、 1 . 2 6 % 。
2
.
2
.
9 样 品的测定 :分别 精密称取 3 批样品各 1
g , 按 2 , 2 . 3 项下制备方法 , 制成供试品溶液 , 进行测
定 , 记录木犀草 素一 7 一O 一各D 一葡 萄糖昔和芹菜素一 7 -
O
一各D 一葡萄糖昔的峰面积 , 计算出含量 , 结果见表
1 , 图 2 。
表 1 八大 品种菊花不 同成分测定结果 (n ~ 3) %
T able 1 D eterm ination of various eonstituents in
eightkinds of ehrysanthem um (n = 3 ) %
样品 绿原酸 木犀草素一7 一O 一卜D 一葡萄搪昔 芹菜素一 7 一住件D 一葡萄糖昔
0.030 3
0.048 5
0.009 3
0, 0 4 0
7
0
.
0 4 0 9
0
.
0
4
6 9
0
.
0
1 3 5
0
.
0
1
9 1
0
.
0
2
7 3
0
.
0 1
8
7
0
.
0 1 8 3
0
.
0 5
8
8
0
.
0
2
7 6
0
.
0 1
8 5
0
.
1 0 0 0
0
.
0
3 8 6
,生11n7曰nCJnOQ白,l,Q‘9夕门j‘.1飞月, 1
.…母“八nufl0uCCU菊菌滁汞毫祈杭怀济川
图 l 绿原酸对照品(A )与样品 〔B )的 H PL C 图
Flg , 1 H P L
C
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(
A
)
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p l
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(
B
)
O
一件D 一葡萄糖昔 (A G ) 的含量测定
2.2. 1 色谱条件及系统适用性试验 :色谱柱为十八
烷基键合硅胶填充剂 ;乙睛 一甲醇一水 (10 , 20 , 6 0)
为流动相 ;柱温 :室温 ;检测波长 :3 2 nm ;理论塔板
数按木犀草素一 7 一 O 一日一 D 一葡萄糖昔峰计算应不低于
5 0 。 , 按芹菜素 一 7 一 O 一件D 一葡萄糖昔峰计算应不低
于 7 000 。
2
.
2
,
2 对照品溶液的制备 :精密称取木犀草素一 7 -
O
一件D 一葡萄糖昔及芹菜素 一 7 一O 一日一 D 一葡萄糖昔对照
品约 10 、 2 0 m g , 分别置 50 m L 量瓶中 , 加 甲醇溶解
并稀释至刻度 , 摇匀 。 精确吸取 7.0 、 1 . 0 m L 置 10
m L 量瓶 , 加甲醇稀释至刻度摇匀 , 即得 。
2
.
2
,
3 供试 品溶液的制备 :精密称取菊花 1 9 , 置
索氏提取器 中 , 加 甲醇 10 0 m L , 回流提取 4 h , 回收
甲醇 , 残渣用适量甲醇溶解 , 滤过于 25 m L 量瓶中 ,
并用甲醇洗涤残渣 , 洗液一并滤入量瓶 , 加 甲醇稀释
至刻度 , 摇匀 , 作为供试品溶液 。
2
.
2
.
4 线性关系的考察 :精密称取木犀草素一 7 一 O -
件D 一葡萄糖昔对照 品约 10 m g , 置 50 m L 量瓶 , 加
甲醇溶解并 稀释 至刻度 , 摇匀 , 再精 确吸 取 0.5 、
1
.
5
、
3
.
5
、
5
.
0
、
7
.
0
、
9
.
0 m L
, 置 10 m L 量瓶 中 , 加 甲
醇稀释至刻度 , 摇匀 , 分别精确吸取 10 拜L , 按色谱
条件测定峰面积 , 以质量浓度 (C ) 为横坐标 , 峰面
积值 (A ) 为纵坐标绘制标准曲线 , 经计算得回归方
程 :A ~ 1.36 6 4 X 103C 十 1.91 5 6 X 103 , r 一 0.9 99 9 。
结果 表 明木 犀草 素一 7 一 O 一尽一D 一葡萄糖昔 在 0.01 一
0. 18 m g /m L 与峰面积线性关系良好 。
精密称取芹菜素一 7 一O 一各D 一葡萄糖昔对照品约
20 m g , 置 50 m L 量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 , 作为储备液 。 精确吸取储备液 1.0 、 2 . 5 、 5 . 0
m L
, 置 10 m L 量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 分
别吸取 2.5 和 5.0 m L 置 10 m L 量瓶中 , 加 甲醇稀
释至刻度 , 摇匀 , 分别精确吸取 10 拌L , 按色谱条件测
定峰面积 , 以芹菜素一 7 一 O 一件D 一葡萄糖昔的质量浓度
(C ) 为横坐标 , 峰面积值 (A ) 为纵坐标绘制标准曲
线 , 经计 算 得 回归 方 程 :A 一 2 . 7 0 1 x l少 C +
2 · 1
97
X
10
, , 二 ~ 0. 9 9 9 9
。 结果表明芹菜素一 7 一O 一 p 一 D -
葡萄糖昔在 0.01 一0.2 m g /m L 内 , 线性关系良好 。
3 讨论
木犀草素一 7 一 O 一日一 D 一葡萄糖昔 和芹菜素一 7 一 O 一民
D 一葡萄糖昔对照品的甲醇溶液经紫外分光光度计
扫描 , 得最大吸收波长分别为 34 9 、 3 2 n m , 芹菜素-
7一 O 一件D 一葡萄糖昔在 H PL C 色谱图中峰面积较木
犀草素一 7 一 O 一日一 D 一葡萄糖昔小 , 故选取芹菜素一 7 一 O 一月-
D 一葡萄糖昔吸收波长 332 nm 为检测波长 。
对甲醇 一水 系统和乙腊 一水系统及 乙睛一甲醇 一水
系统分别进行考察 , 乙睛一甲醇一水 (10 , 20 , 6 0) 较
中草药 C hinese T raditional and H erbal Dr ugs 第 35 卷第 10 期 2004 年 10 月 一 1 1 8 3 ·
l
}
时间 r/ m in
1一木犀草家一 7 一O 一各D 一葡萄糖昔 2一芹菜紊一 7 一O 一件D 一葡萄糖昔
l一l u t e o l i n 一 7 一 O 一卜D 一g l u e o s i d e Z 一 a p i g e n i n 一 7 一今卜D 一 g l u e o s i d e
圈 2 木尽革寮 一7 一 O 一件D 一有萄精普及芹莱紊一 7 -
0
一卜D 一有萄精普 (A ) 和样品 (B ) H P L C 圈
Fig . 2 H P L C of lu teolin一 7 一O 一 p 一D 一g l u e o s i d e a n d a p i g e n i n -
7 一O 一卜D 一g l u e o s i d e ( A ) a n d s a m p l e ( B )
好 , 可以作为流动相 。
本实验对不同品种菊花的含量进行 比较 , 结果
表 明 :绿原酸含量以济菊和祁菊最高 , 川菊最低 ;木
犀草素一 7 一O 一各D 一葡萄糖昔含量 以济菊最高 , 其次是
贡菊和怀菊 , 而毫菊最低 ;芹菜素一 7 一 O 一任D 一葡萄糖
昔含量以济菊最高 , 其次是杭菊 , 而最低为贡菊 、 毫
菊和怀菊 。 因此 , 不能以单一成分定其质量的好坏 ,
只有绿原酸和黄酮类成分均高 , 才是质量优者 。
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D o g s ( 中草药) , 1 9 8 7 , 1 8 ( 4 ) : 3 4 一4 2 .
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J C hin 材ed M a ter (中药材) , 2 0 0 1 , 2 4 ( 7 ) : 5 0 5 一5 0 6 .
[ 6 〕 Jia L Y , S u n Y , W a n g C Y , et a z . S t u d i e s o n e x t r a e t i o n p r o -
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J C hin M ed M ater (中药材) , 2 0 0 3 , 2 6 ( 1 ) : 3 5 一 3 7 .
[
7 〕 Jia Y , S u n Q S , H u a n g 5 w . I s o l a t i o n a n d i d e n t i f i e a t i o n o f
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m 以即5口 , t h e m u m m o r tfo l i u m R a m a t [ J 〕. JC hin 拟ed C hem (中国药物化学杂 志) , 2 0 0 3 , 1 3 ( 3 ) : 1 5 9 -
1 6 1
.
五加的秋季扦插研究
王仕玉 ’ , 杨灿光“ , 郭凤根3
(l . 云南农业大学园林园艺学院 , 云南 昆明 650201 ; 2. 云南农业大学动物科学技术学院 , 云南 昆明 650201
3. 云南农业大学农学与生物技术学院 , 云南 昆明 650 20 1 )
五 加 A canth OP a nax g ra cilisty lus W . W .
S m it h 又名刺五加 、 五加皮 、 五叶路刺或 “戈哈 ” ( 哈
尼语) , 五加科落叶灌木川 。 其根 、根皮及茎皮为传统
中药 , 具有祛风湿 、 壮筋骨 、 强腰膝 、 活血化痕等功
效 , 以其为原料研制的维尔泰 口服液等产品畅销国
内外 ;其生长季节萌生的嫩芽和嫩茎叶可作野生蔬
菜食用 , 营养丰富 , 味美可 口 , 在市场上供不应求 。 随
着五加的开发利用 , 野生资源 日趋减少 , 人工繁殖技
术的研究已迫在眉睫 。 为大量繁殖这一珍贵资源以
供应市场 , 同时保护好野生五加资源 , 开展了五加的
扦插繁殖研究 。
1 材料与方法
1. 1 材料处理:2000 年 9 月 15 日在云南农业大学
中药资源 圃内采集五加枝条 , 剪成 15 一 20 cm 的带
1 个芽 的茎段 , 下端剪成斜 口 , 上端剪成距芽 1一2
cm 的平 口 , 将枝条斜面朝下盛放于小水桶 中 , 在水
龙头下用小流水冲洗 12 h 后取出稍晾干备用 。
1
.
2 正交试验设计 :本研究设 3 个因素 , 每因素设
2个水平 (表 1) , 通过正交表 L 4(2 , ) 作正交试验设
计[2j 得 到下列 4 个处理 组合 :¹ A IBI C :为嫩枝 用
N A A 1 0 00 m g /L 速蘸 10 5 后扦插 于河 沙中 ;º
A IB ZC Z为嫩 枝 用 清 水 处 理 后 扦 插 于红 土 中;»
A ZB IC : 为老 枝 用 清 水 处理 后 扦插 于 河 沙 中;¼
A ZBZC , 为老枝用 N A A 1 000 m g /L 速蘸 10 5 后扦
插于红土中 。 每处理 50 枝 , 重复 2 次 。
1
.
3 扦插及插后管理和指标观测 :用于扦插的插床
长宽分别为 2 和 l m , 插前给基质浇透水 , 并在插穗
上端用蜡封 口 。 扦插株行距为 18 一20 。m X 20 一2
cm , 扦插深度 5 cm 左右 , 插后用遮阳网遮阴并视基
质情况浇水 。 插后 10 d 左右观察萌芽情况 , 50 d 左
月仪1目 口 侧日二乙U U 任一 U l 一乙4
基金项 目:云南省教委科研基金资助课题作者简介:王仕玉 (1965一) , 女 , 重庆市合川县人 , 1 9 8 8 年 7 月毕业于西南农业大学 园艺系并获农学硕士学位 , 同年分配到云南农业大学园艺系工作 , 现在云南农业大学园林园艺学院任副教授 , 在职攻读农学博士学位 。 主要从事园艺作物和中草药的研究 , 主持或参与完成 了十多项科研课题的研究工作 , 在各种学术刊物上发表论文 30 多篇 。 T el : 。8 7 1一5 2 2 7 7 2 4