全 文 ：备”方法制备并检测。结果 5份样品各色谱峰相对保
留时间 RSD < 0. 3% ,峰面积比值RSD < 0. 5% 。
2. 2. 4　样品制备方法的影响: 取经粉碎过 20目的
同一批次的黄连 2份各 0. 1 g ,分别按“样品制备”方
法和沸水浴盐酸 -甲醇 ( 1∶ 99)回流 0. 5 h,均定容至
100 mL。两种样品提取方法获得的检测结果经相关
分析 ,各色谱峰相对保留时间相关系数 r= 0. 999 5,
各色谱峰峰面积比值 r= 0. 999 1。说明两种样品提
取方法结果基本一致。
2. 2. 5　药材粒度的影响:分别取粉碎过 20, 60, 100
目的同一批次的黄连粉末 ,按“样品制备”方法操作
并检测。结果表明不同药材粒度的黄连数据化指纹
图谱各色谱峰相对保留时间 RSD < 0. 5% ,各色谱
峰峰面积比值 RSD < 4. 8%。
3　讨论
以上研究表明 ,本实验建立的黄连的数据化
HPCE指纹图谱稳定、可靠。 3批黄连药材数据化指
纹图谱组分保留时间和组分峰面积比值经相关分
析 ,相关系数均> 0. 999 0,预示不同批次的黄连所
含化学成分不仅在组成上基本相同 ,而且所含化学
成分量的比例也基本相同。当然不同的产地、不同的
生长条件可能会对某些组份的含量比例产生影响 ,
但是否均在某一范围内波动 ,有待继续探讨。不同批
次的黄连 HPCE数据化图谱基本相同的实验结果 ,
也表明 HPCE数据化图谱在中药黄连品种鉴定以
及质量控制方面有着广阔的应用前景。
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RP-HPLC法测定槐米中槲皮素的含量
徐雄良 1 ,张志荣 1 ,柯尊洪 2 ,田　锋 2
( 1. 四川大学华西药学院 ,四川 成都　 610041;　 2. 成都康弘科技实业 (集团 )有限公司 ,四川 成都　 610041)
摘　要 :目的　建立 RP-HPLC法测定槐米中槲皮素的含量。 方法　使用 Shim-pack CLC-ODS柱 ( 6. 0 mm× 150
mm, 5μm) ,以甲醇 -0. 4%磷酸溶液 ( 7∶ 3)为流动相 , 375 nm波长 ,测定槐米水解液中槲皮素的含量。结果　该方
法的线性为 10. 03～ 100. 3 ng ,r= 0. 999 7;平均回收率为 99. 06% , RSD= 2. 07% (n= 9)。结论　该方法测定样品
分离效果佳 ,灵敏度高 ,重现性好 ,结果准确可靠。
关键词: 槐米 ;槲皮素 ;反相高效液相色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 06 0565 03
Quantitative analysis of quercetin in bud of Sophora japonica by RP-HPLC
XU Xiong-liang
1 , ZHANG Zhi-rong
1 , KE Zun-hong
2 , T IAN Feng
2
( 1. West China Schoo l o f Pharmacy, Sichuan Univ er sity , Chengdu 610041, China; 2. Chengdu Kanghong
Science& Tech no lo gy Industr y ( Group) Co. , Ltd. , Chengdu 610041, China)
Key words: bud of Sophora japonica L. ; quercetin; RP-HPLC
　　槐米为豆科植物槐 Sophora japonica L. 的干
燥花蕾 ,具有凉血止血、清肝泻火之功效 ,用于多种
血热出血症、肝火上亢之头痛、目赤等症。 槐米主要
含芦丁 ( rutin) 10%～ 28% 、桦皮醇 ( betulin)、槐二
醇 ( sophoradio l)以及槐花米甲、乙、丙素 ( sopho rin
A, B, C) ,还含有槲皮素 ( quercetin) ,槐花皂苷Ⅰ ,
Ⅱ ,Ⅲ ( kaikasaponinⅠ ,Ⅱ ,Ⅲ )等 [1 ]。芦丁在酶或酸
的作用下水解成槲皮素。现代药理研究认为 ,槲皮素
具有较好的祛痰、止咳作用 ,并具有一定的平喘作
用 ,此外还具有降低血压、增强毛细血管抵抗力、调
·565·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
收稿日期: 2002-10-20基金项目:四川省重点科技项目:中药制剂现代化研究 (批准号: 01SG008-01)作者简介:徐雄良 ( 1969- ) ,男 ,湖北鄂州人 ,现为四川大学华西药学院 2000级硕士生 ,研究方向为药物新制剂和新剂型、中药质量的标准化。 Tel: ( 028) 85503798　 Fax: ( 028) 85456898　 E-mai l: xlx 999@ hotmail. com
血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量等作用 [ 2]。
槲皮素的含量测定方法有紫外 -可见分光光度
法 [3 ]、荧光光度法 [4 ]、薄层扫描法 [5 ]以及高效液相色
谱法 [ 6]。文献 [ 7]通过超声法测定了槐米炮制品以及
生品中的槲皮素 ,而利用水解法测定槐米中槲皮素
的含量尚未见报道。 本实验采用 RP-HPLC法测定
了槐米水解液中槲皮素的含量 ,这对于利用槐米中
的槲皮素作为药效成分的中药制剂 ,以及利用槐米
来提取槲皮素具有一定的参考价值。该方法简便 ,灵
敏度高 ,重现性好。
1　仪器与试药
日本岛津 LC-10Avp高效液相色谱仪 ,包括
SPD-10Avp紫外可见光检测器 , CLASS-V P V5. 03
色谱数据处理工作站 ;槲皮素对照品 (供含量测定
用 , 0081- 9904,中国药品生物制品检定所 ) ;槐米药
材购自四川省中药材公司 ,经鉴定为豆科植物槐
Sophora japonica L. 的干燥花蕾。甲醇为色谱纯 ,水
为重蒸水 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件:色谱柱为 Shim-pack CLC-ODS柱
( 6. 0 mm× 150 mm, 5μm) , (日本岛津 ) ;流动相为
甲醇-0. 4%磷酸溶液 ( 7∶ 3) ;流速为 0. 8 mL /min;
检测波长为 375 nm;柱温为 30℃ ;进样量为 5μL;
理论板数按槲皮素峰计算不低于 4 000。
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取在 120℃减压干
燥至恒重的槲皮素对照品适量 ,加甲醇制成 10μg /
m L的溶液 ,即得。
2. 3　供试品溶液的制备:取本品粉末 0. 12 g,精密
称定 ,加甲醇-25%盐酸 ( 4∶ 1)混合溶液 25 mL,水
浴回流 30 min,放冷 ,置 50 mL量瓶中 ,加甲醇稀释
至刻度 ,摇匀 ,精密量取 1 mL,置 25 mL量瓶中 ,加
甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。其色谱图见图 1。
2. 4　标准曲线及线性范围:取槲皮素对照品贮备液
( 1. 003 mg /m L) ,精密量取 1 m L于 10 mL量瓶中 ,
加甲醇稀释至刻度 ,摇匀。 分别准确量取 0. 2, 0. 5,
0. 8, 1. 0, 1. 2, 2. 0 m L于 10 mL量瓶中 ,加甲醇稀
释至刻度 ,摇匀 ,精密吸取上述溶液各 5μL,在上述
色谱条件下测定。以进样量 (μg )为横坐标 , 3次测得
的峰面积均值为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程
为: A= 2 558 200C- 2 899. 8, r= 0. 999 7。结果槲皮
素进样量在 10. 03～ 100. 3 ng线性关系良好。
2. 5　精密度试验: 精密吸取浓度分别为 8. 024,
10. 030, 12. 036μg /mL的槲皮素对照品溶液 ,按上
述的色谱条件测得日内精密度 , RSD 分别为
* -槲皮素
* -quercetin
图 1　槲皮素对照品 (A)和槐米供试品 (B)的 HPLC图谱
　　 Fig. 1　 HPLC chromatograms of quercet in (A)
and bud of S . japonica (B)
1. 99% , 2. 67% , 1. 63% ( n= 6) ,日间精密度 RSD
分别为 1. 71% , 2. 50% , 2. 68% (n= 6)。由此可见 ,
槲皮素在该色谱条件下的日内、日间精密度均较好。
2. 6　稳定性试验: 取样品粉末约 0. 12 g ,精密称定 ,
按上述供试品溶液的制备方法和测定条件 ,每 2 h
测定 1次。结果表明供试品溶液在 10 h内稳定 ,
RSD为 1. 70% 。
2. 7　重现性试验: 取样品粉末约 0. 12 g ,精密称定 ,
按上述供试品溶液的制备方法和测定条件 ,重复测
定 6份 ,RSD为 3. 81%。
2. 8　回收率试验:精密称取已知含量的样品粉末约
0. 12 g ,准确加入定量的槲皮素对照品 ,同法测定槲
皮素的含量 ,计算回收率。 结果平均回收率为
99. 06% , RSD为 2. 07% (n= 9)。
2. 9　样品的测定: 按上述供试品溶液的制备方法和测定
条件 ,测定了 4批样品中槲皮素的含量分别为: 12. 62%
( RSD= 0. 66% ) , 9. 66% ( RSD= 1. 07% ) , 9. 13%
( RSD= 0. 74% ) , 11. 19% ( RSD= 0. 42% ) (n= 3)。
3　讨论
3. 1　检测波长的选择: 取槲皮素对照品适量 ,以甲
醇为溶剂在紫外可见分光光度计 ( Cint ra 10e型 ,澳
大利亚 )上于 200～ 600 nm扫描。 结果表明槲皮素
在 259, 375 nm波长处有最大吸收。在同一条件下
经高效液相色谱仪测定 ,槲皮素在 375 nm处的峰
面积较 259 nm波长处大 ,因此选择 375 nm作为槲
皮素的检测波长。
3. 2　流动相的优化:文献多报道 [8 ]测定槲皮素的流
动相为甲醇 -0. 4%磷酸溶液 ( 5∶ 5) ,流速为 1. 0
mL /min。本实验通过调整甲醇与 0. 4%磷酸溶液的
比例 ,确定二者的比例为 7∶ 3,流速为 0. 8 mL /
·566· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
min,不仅样品的分离效果最好 ,而且灵敏度较高。
3. 3　供试品溶液制备方法的选择:槐米中的槲皮素
常采用酸水解芦丁的方法制得。 本实验选择甲醇 -
25%盐酸溶液为溶剂 [9 ] ,分别采用回流法和超声法
在同一条件下水解、测定。 结果表明 ,回流法测得的
槲皮素 ( 12. 47% )较超声法 ( 0. 78% )大 16倍 ,说明
回流法中的槲皮素主要来自芦丁的水解 ,而超声可
能仅使部分芦丁的苷键断裂 ,因此选择酸回流水解
法。文献 [7 ]以乙醇为溶剂 ,用循环水超声提取槐米中
的槲皮素为 0. 167 5% ,其槲皮素可能为槐米中游离
槲皮素 ,并非为芦丁水解。
3. 4　供试品溶液水解条件的选择:盐酸水解芦丁为
槲皮素 ,而槲皮素几乎不溶于酸性水溶液 ,易溶于甲
醇 ,因此不同比例和体积的甲醇 -25%盐酸混合溶液
将影响芦丁的水解和槲皮素的提取。 本实验对水解
时混合溶液的比例、体积以及水解时间进行了选择 ,
结果以上述供试品溶液制备方法中的水解条件最
佳。取芦丁对照品同法水解 ,经薄层色谱法和高效液
相色谱法测定可知 ,芦丁已完全水解为槲皮素。
3. 5　 4批样品中槲皮素的平均含量为 10. 65% ,若
以本品在 60℃干燥 6 h减失的质量计 ,则为
11. 19% 。由芦丁与槲皮素的相对分子质量比值可
知 , 4批槐米中芦丁的平均含量为 22. 60% ,而《中华
人民共和国药典》 2000年版一部规定用比色法测定
槐米中芦丁的含量不得少于 20. 0%。因此利用本方
法测定槐米中槲皮素的含量简便可行。
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藏药加哇的品种考证
李　涛 ,王天志
(四川大学华西药学院 ,四川 成都　 610041)
摘　要: 目的　通过对藏药加哇的本草学研究 ,考证其基源及藏医药用品种。 方法　查阅有关历代藏医药文献 ,实
地考察和应用现代科学技术对加哇的化学成分、含量测定方法等进行了研究。 结果　表明历代藏医药本草文献中
所记载的功能主治与现代藏医临床应用基本一致。结论　藏医使用加哇的正品药材为伞形科棱子芹属植物西藏棱
子芹 Pleurospermum hookeri va r. thomsonii.
关键词: 藏药 ;加哇 ;品种考证
中图分类号: R281. 6　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 06 0567 04
Textual study of Tibetan medicine Jiawa (Pleurospermum hookeri var. thomsonii)
LI Tao , WANG Tian-zhi
( Depar tment of Pha rmacognosy , West China Schoo l o f Pha rmacy , Sichuan Univ er sity , Ch engdu 610041, China)
Key words: Tibetan medicine; Jiaw a ( Pleurospermum hookeri var. thomsoni i C. B. Clarke) ; tex tual
study
·567·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
收稿日期: 2002-05-17作者简介:李　涛 , ( 1971- ) ,男 ,陕西省西安市人 ,硕士 ,讲师 , 1994年 7月毕业于西安医科大学药学院 ,获理学学士学位 , 1997年 7月毕业于华西医科大学药学院 ,获理学硕士学位 , 1997年 8月至今在四川大学华西药学院生药学教研室参加工作 ,主要从事新型药物、制剂的开发研究和新药申报资料的科研工作。
Tel: ( 028) 85501146　 E-mail: li taoo@ 21cn. com