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6
X - 2 618. 384 (r= 0. 999 9)。以上结果表明:原
阿片碱在 0. 015～ 0. 48 mg /mL呈良好线性关系 ,延
胡索乙素在 0. 02～ 0. 64 mg /mL呈良好线性关系。
2. 6　精密度试验:将原阿片碱 ( 0. 12 mg /mL)和延
胡索乙素 ( 0. 16 mg /mL)对照品溶液连续进样 5次 ,
其峰面积 RSD分别为 1. 66%和 2. 28% 。
2. 7　重现性试验: 配制同一批号供试品溶液 5份 ,
各吸取 5μL进样分析 ,求得含量 ,原阿片碱和延胡
索乙素含量的 RSD分别为 0. 65%和 1. 03% 。
2. 8　稳定性试验: 取供试品溶液分别于配制后 0,
1, 3, 5, 21, 23, 25 h依法测定 ,原阿片碱和延胡索乙
素的峰面积 RSD分别为 0. 66%和 0. 98%。
2. 9　回收率测定:采用加样回收法。 精密称取已知
含量苦地丁提取物 2. 9 mg ,分别精密加入原阿片碱
对照品溶液 ( 0. 532 mg /mL) 3. 2 mL和延胡索乙素
对照品溶液 ( 0. 425 mg /mL) 2. 0 mL,用 2. 0%醋酸
加至 25 mL,按以上色谱条件测定 ,计算回收率。结
果原阿片碱平均回收率为 99. 2% , RSD= 1. 65%
(n= 5) ;延胡索乙素平均回收率为 100. 1% , RSD=
2. 34% (n= 5)。
2. 10　样品分析: 取苦地丁提取物约 12. 5 mg ,精密
称定 ,置 25 mL量瓶中 ,加 2%醋酸使溶解 ,并稀释
至刻度 ,摇匀 ,按以上色谱条件测定 ,结果见表 1及
图 1。
3　讨论
　　经不同品牌的 C18色谱柱测试 ,本法的重现性较
好。本法曾用于不同产地苦地丁提取物的含量测定 ,
色谱分离度及峰形均较好。
表 1　苦地丁提取物中原阿片碱和
延胡索乙素含量测定结果 ( n= 3)
Table 1　 Determination of protopine and tetrahydro-
palmatineinC. bungeana extracts (n= 3)
批　号 原阿片碱含量 / ( mg· g- 1) 延胡索乙素含量 / ( mg· g- 1 )
010825 363. 1 82. 6
010910 359. 2 90. 2
010924 354. 3 95. 8
1-原阿片碱　 2-延胡索乙素
1-protopine　 2-tet rah ydropalmatin e
图 1　混合对照品 ( A)和苦地丁提取物 (B)
的 HPLC色谱图
Fig. 1　 HPLC chromatograms of mixed reference sub-
stances (A) andC . bungeana extract ( B)
References:
[1 ]　 Zhou J M , Yu C J, Cao Y, et al . Study on ef fective con-
s ti tuents in Corydal is sheareri S. Moo re [ J ]. Chin Tradi t
Herb Drugs (中草药 ) , 1981, 12( 3): 3-4.
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bungeana Turcz. [ J] . Acta Pharm Sin (药学学报 ) , 1985, 20
( 5): 377.
RP-HPLC测定蚁肝康颗粒中栀子苷的含量
戴向东
(广西药品检验所 ,广西 南宁　 530021)
　　蚁肝康颗粒由茵陈、黑蚂蚁、栀子等 13味中药
提取精制而成 ,具有清热利湿、疏肝理气、活血止痛
之功能 ,用于保肝护肝并对各种急慢性肝炎所致肝
功能损害有效。 方中臣药栀子具有清热利尿、凉血
解毒作用 ,其主要成分为栀子苷。 《中华人民共和
国药典》2000版一部收载有 HPLC法测定栀子中栀
子苷含量的方法。为有效控制药品质量 ,本实验建立
了 RP-HPLC测定蚁肝康颗粒中栀子苷含量的
方法。
1　仪器与试药
Waters 600型高效液相色谱仪 ,W aters 717型
自动进样器 , W aters 2487型紫外检测器 , Wa ters
·1101·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-05-22作者简介:戴向东 ( 1968— ) ,广西恭城人 ,主管药师 ,从事化学分析及药品质量标准研究。 Tel: ( 0771) 2611940
996型二极管阵列检测器 , Waters Millennium色谱
工作站 , Sartorius BP211D电子天平。
　　乙腈为色谱纯 ,水为超纯水 ,其他试剂均为分析
纯。蚁肝康颗粒由桂林集琦制药集团有限公司提供。
栀子苷对照品由中国药品生物制品检定所提供 ,含
量测定用 ,批号 0749-200007。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Inertsi l ODS-3 ( 4. 6 mm×
250 mm , 5μm);流动相: 乙腈-水 ( 15∶ 85) ;流速:
1. 0 mL /min;检测波长: 238 nm;进样量: 20μL。
2. 2　对照品溶液的制备: 精密称取栀子苷对照品适
量置量瓶中 ,加流动相溶解 ,制成 30μg /mL的溶液。
2. 3　供试品溶液的制备:取供试品约 5 g ,精密称
定 ,置 50 mL具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 50 mL,
密塞 ,称定质量 ,超声处理 30 min,放冷 ,再称定质
量 ,用甲醇补足减失的质量 ,摇匀。滤过 ,弃去初滤
液 ,精密量取续滤液 25 mL,置蒸发皿中 ,蒸干 ,残渣
加水溶解 ,转移至 25 m L量瓶中 ,并加水至刻度 ,摇
匀。滤过 ,弃去初滤液 ,精密量取续滤液 10 mL,通过
D101型大孔吸附树脂柱 (内径 1. 5 cm,长 10 cm ) ,用
水 100 mL洗脱 ,弃去水液 ,再用 50%乙醇 60 mL
洗脱 ,弃去前 10 mL初洗脱液 ,收集续洗脱液 ,蒸
干。残渣用水饱和的正丁醇 30 mL溶解并分次转移
至分液漏斗中 ,用正丁醇饱和的氨试液提取 2次 ,每
次 3 mL,合并水液 ,再用水饱和的正丁醇振摇提取
5次 ,每次 10 mL。合并前后 2次的正丁醇提取液 ,
蒸干。 残渣加流动相转移至 25 mL量瓶中 ,并加流
动相至刻度 ,摇匀。 用微孔滤膜 ( 0. 45μm)滤过 ,取
续滤液 ,作为供试品溶液。
2. 4　阴性对照溶液的制备:取缺栀子的其他各味中
药按处方工艺制成阴性对照 ,按 2. 3项下方法制成
阴性对照溶液。
2. 5　测定方法: 分别精密吸取上述 3种溶液各 20
μL,注入色谱仪 ,在上述色谱条件下测定 ,结果表明
供试品有与栀子苷对照品相同保留时间的色谱峰 ,
与其他组份分离良好 ;栀子苷的保留时间为 9. 42
min,阴性对照溶液在栀子苷出峰的时间没有任何
杂质峰。色谱图见图 1。
2. 6　方法学考察
2. 6. 1　线性关系考察:精密称取栀子苷对照品适量
(约 20 mg ) ,置 100 mL量瓶中 ,加流动相使液解并
稀释至刻度。 精密量取 5, 10, 15, 20, 25 m L,分别置
100 mL量瓶中 ,加流动相至刻度 ,摇匀。精密吸取上
述溶液各 20μL,分别注入色谱仪 ,测定峰面积值。以
* -栀子苷
* -geniposide
图 1　栀子苷对照品 (A)、蚁肝康颗粒 (B)
和阴性对照 (C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of geniposide　　
reference substance (A) , Yigankang
Granula (B) and blank ( C)
溶液浓度为横坐标 ,以峰面积值为纵坐标进行线性回
归 ,得回归方程: Y = 1. 503 3× 106X - 1. 033 0×
10
4
, r= 0. 999 9。结果表明: 栀子苷在 0. 202 4～
1. 012 0μg时 ,其峰面积与浓度之间线性关系良好。
2. 6. 2　精密度试验:精密吸取上述栀子苷对照品溶
液 ( 30μg /m L) 20μL,分别连续进样 8次 ,测定栀子
苷峰的峰面积 ,其峰面积值 RSD为 0. 4%。
2. 6. 3　重现性试验: 取同批供试品 5份 ,按 2. 3项
下方法制备供试品溶液 ,按上述色谱条件测定 ,栀子
苷平均含量为 23. 325 4 mg /袋 , RSD值为 1. 4% 。
2. 6. 4　稳定性试验:取供试品溶液 ( 000820批号 )及
栀子苷对照品溶液 ,在 0, 2, 4, 6, 12, 24 h测定峰面
积 ,计算得峰面积值的 RSD分别为 0. 5%和 0. 62%
(n= 6)。 结果表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 6. 5　回收率试验: 取已知栀子苷含量的供试品
( 1. 115 8 mg /g ) ,研细 ,精密称取 6份 ,每份约 2 g,
置具塞锥形瓶中 ,其中 3份精密加入上述栀子苷对
照品溶液 25 m L,再精密加入甲醇 25 m L;另外 3份
精密加入上述栀子苷对照品溶液 50 mL。 按 2. 3项
下方法操作 ,分别注入液相色谱仪 ,在上述色谱条件
下测定栀子苷峰面积。结果平均回收率为 95. 6% ,
RSD值为 1. 1% (n= 6)。
2. 7　供试品含量测定:取本品 ,按 2. 3项下方法制
备供试品溶液 ,按上述色谱条件测定 ,结果见表 1。
表 1　蚁肝康颗粒中栀子苷含量测定结果 (n= 3)
Table 1　 Geniposide in Yigankang Granula ( n= 3)
批　号 含量 / ( mg· 袋 - 1) RSD /%
000814 19. 785 2 0. 29
00817 22. 596 4 0. 42
000820 23. 200 5 0. 07
000821 21. 670 9 0. 59
000822 22. 723 1 0. 48
3　讨论
3. 1　栀子苷提取条件的选定:本方中共含 13味药
·1102· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
材 ,成分较为复杂 ,多含有萜类、皂苷、黄酮等成分 ,
且剂型为颗粒剂 ,含有大量的糖 ,对色谱结果的干扰
较大。故采用甲醇为提取溶剂 ,再通过大孔吸附树脂
柱处理 ,用 50%乙醇洗脱 ,既可有效地去除糖的干
扰 ,又可富集制剂中栀子苷成分 ,再经正丁醇提取 ,
氨试液洗涤以除去水溶性黄酮等杂质 ,即可达到纯
化供试品的目的。 所得的供试品溶液使被测成分栀
子苷能得到很好分离 ,保留时间也与对照品一致 ,阴
性对照溶液亦无干扰。
3. 2　检测波长的确定: 采用 Waters 996型二极管
阵列检测器 ,对栀子苷对照品的色谱峰扫描 ,于最大
峰高处 ,提取紫外吸收图谱。 结果最大吸收波长为
238. 4 nm ,故选定 238 nm为检测波长。
3. 3　本实验建立了蚁肝康颗粒中栀子苷含量的
HPLC测定方法 ,实验结果表明 ,本法便捷 ,灵敏、准
确 ,重现性好 ,可以控制该药品的质量。
HPLC法测定山茱萸胶囊中熊果酸和齐墩果酸的含量
皮文霞 ,蔡宝昌 ,邱建红
(南京中医药大学药学院 ,江苏 南京　 210029)
　　山茱萸胶囊由山茱萸有效部位环烯醚萜总苷及
总三萜酸经特殊制剂工艺制备而成。 对糖尿病微血
管并发症有独特疗效。 熊果酸和齐墩果酸为山茱萸
胶囊的主要有效成分。 由于熊果酸和齐墩果酸结构
极相似 ,所以对两者的分离较困难 [1, 2 ]。 本实验建立
的山茱萸胶囊中熊果酸和齐墩果酸含量的 HPLC
测定方法 ,较《中华人民共和国药典》 2000年版使用
的薄层扫描法操作更简便准确 ,且本法可使熊果酸
和齐墩果酸达到基线分离 ,从而准确定量。
1　仪器与试药
美国 Agilent 1100高效液相色谱仪 , DAD检测
器。甲醇、乙腈为色谱纯 ,其余均为分析纯 ,水为亚沸
蒸馏水。熊果酸和齐墩果酸对照品由中国药品生物
制品检定所提供。 山茱萸胶囊 (自制 ,批号: 020612,
020615, 020618)。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Zi rchrom , romasi l ODS-1
( 250 mm× 4. 6 mm);流动相:乙腈 -甲醇 -水-醋酸铵
( 80∶ 10∶ 10∶ 0. 5) ;柱温: 30℃ ;流速: 1 mL /min;
检测波长: 215 nm。
2. 2　标准曲线的绘制:精密称取熊果酸、齐墩果酸
对照品 ,用甲醇配制成 120. 2(熊果酸 )、 102. 0μg /
m L(齐墩果酸 )的混合对照品溶液。精密吸取混合对
照品溶液 10, 15, 20, 25, 30, 35μL进样 ,齐墩果酸的
出峰时间为 13. 171 min,熊果酸的为 14. 038 min。
以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲
线。回归方程为:熊果酸 Y= 22. 276X+ 32. 671, r=
0. 999 1,线性范围为 0. 60～ 2. 10μg;齐墩果酸 Y=
17. 784X - 15. 067, r= 0. 999 9,线性范围为 0. 51～
1. 79μg。
2. 3　供试品溶液的配制:精密称取山茱萸胶囊内容
物 0. 5 g ,加甲醇 20 mL超声提取 10 min,再以甲醇
定容至 25 mL量瓶中。用 0. 45μm微孔滤膜滤过 ,
备用。
2. 4　精密度试验:以上述混合对照品溶液进样 10
μL,重复进样 5次。 按熊果酸及齐墩果酸的平均峰
面积计算 ,得熊果酸 RSD为 0. 85% ,齐墩果酸 RSD
为 0. 94%。
2. 5　稳定性试验:精密吸取供试品溶液 15μL,分
别间隔 0, 1, 3, 6, 12, 24, 36 h进样 ,按熊果酸、齐墩
果酸峰面积计算 , RSD分别为 1. 3%、 1. 7% 。结果显
示供试品溶液在 36 h内稳定。
2. 6　重现性试验: 精密称取山茱萸胶囊同一批
( 020612)样品 ,按上述供试品溶液制备方法制备 5
份供试品溶液 ,依法测定。结果熊果酸及齐墩果酸含
量的 RSD分别为 1. 2% 、 1. 6%。
2. 7　加样回收率试验: 精密称取熊果酸、齐墩果酸
对照品适量 ,加入 3粒山茱萸胶囊 ,测定 ,结果齐墩
果酸的平均回收率为 100. 91% , RSD= 1. 08% (n=
5) ,熊果酸的平均回收率为 99. 83% , RSD= 1. 22%
(n= 5)。
(下转附 11页 )
·1103·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-04-20作者简介:皮文霞 ( 1968— ) ,女 ,安徽霍邱人 ,博士 ,南京中医药大学药化教研室讲师 ,研究方向为中药新药和指纹图谱。
Tel: ( 025) 6798164 ( O)