全 文 ：磷脂双分子层缓慢释放, 发挥了药物贮库作用, 有利
于提高肺部给药药物的生物利用度。
致谢: 陈道峰教授提供三七总皂苷原料药。许清
芳博士提供有关 PN S 前期研究的宝贵资料。
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葛根芩连汤的 HPCE 指纹图谱研究
戴开金1, 罗奇志2, 罗佳波3, 马安德2, 谭晓梅3, 吴昭晖3Ξ
(11 第一军医大学 化学教研室, 广东 广州　510515; 21 第一军医大学 中心实验室, 广东 广州　510515;
31 第一军医大学 中药制剂重点实验室, 广东 广州　510515)
摘　要: 目的　采用高效毛细管电泳法 (H PCE) 建立葛根芩连汤的指纹图谱。方法　电解质溶液由 30 mmo löL 磷
酸盐和 40 mmo löL 硼酸盐组成, 未涂层融硅毛细管 (65 cm ×50 Λm , 有效长度 43 cm ) , 分离电压 22 kV , 进样 1 s, 检
测波长 254 nm , 温度 30 ℃。结果　上述条件下, 葛根芩连汤中 27 个成分得到了较好的分离, 方法学考察结果符合
定量测定和定性研究的要求。结论　该方法具有较好的分离效果和良好的精密度, 可考虑作为葛根芩连制剂的质
量控制方法。
关键词: 葛根芩连汤; 高效毛细管电泳; 指纹图谱
中图分类号: R 28312; R 286102　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 07 0749 03
HPCE f ingerpr in ting of Gegen Qin l ian D ecoction
DA I Kai2jin1, LUO Q i2zh i2, LUO J ia2bo 3, M A A n2de2, TAN X iao2m ei3, W U Zhao2hu i3,
(1. Chem istry D epartm ent; 2. Cen ter L abo rato ry; 3. Pharm aceu tical L abo rato ry of T radit ional Ch inese M edicine,
the F irst M ilitary M edical U niversity, Guangzhou 510515, Ch ina)
Abstract: Object　To study the H PCE fingerp rin t ing of Gegen Q in lian D ecoct ion (GQD ). M ethods　
A buffer w as compo sed of 30 mmo löL sodium pho sphate and 40 mmo löL bo rate so lu t ion. Cap illary elec2
t ropho resis w as perfo rm ed u sing a 65 cm (43 cm to detecto r) ×50 Λm fu sed2silica cap illa ry tube. Separa2
t ion vo ltage w as 22 kV , samp ling t im e w as 1 s, detected w avelength w as 254 nm , and the temperatu re w as
m ain ta ined at 30 ℃. Results　T he 27 componen ts in GQD w ere successfu lly separa ted. T he ob servat ion of
m ethodo logy w as in keep ing w ith quan t ita t ine determ inat ion and qualita t ive study. Conclusion 　T h is
m ethod can be u sed fo r the quality con tro l of the p repara t ion of GQD w ith good p recision.
Key words: Gegen Q in lian D ecoct ion (GQD ) ; h igh2perfo rm ance cap illa ry electropho resis (H PCE ) ;
·947·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
Ξ 收稿日期: 2003210221
基金项目: 国家自然科学基金重点资助项目 (39970886) ; 广东省自然科学基金资助项目 (001070)
作者简介: 戴开金 (1973—) , 男, 湖南武冈人, 助教, 中药学硕士, 主要从事中草药的提取分离研究。
f ingerp rin t ing
　　葛根芩连汤由葛根、黄连、黄芩、甘草 4 味药组
成, 出自《伤寒论·太阳篇》, 有解表清里、升清止利
之功。文献报道该方在配伍合煎的过程中产生了沉
淀, 并有可能导致有效成分发生质和量的变化[1～ 3 ]。
本实验试图通过制定该方的指纹图谱, 为较深入和
准确的研究该方有效成分的变化提供分析手段, 同
时为制定该方的中成药质量标准提供可行的方法。
1　仪器与试药
270A —H T 型高效毛细管电泳仪 (A pp lied
B io system s 公司) , 未涂层融硅毛细管 (河北永年锐
沣色谱器件有限公司) , HW —2000 色谱工作站数据
处理系统 (南京千谱软件有限公司) ,M illipo re2Q 纯
水器。
甲醇为色谱纯, 其他试剂为国产分析纯; 盐酸小
檗碱、葛根素、黄芩苷对照品均购于中国药品生物制
品检定所 (含量测定用, 批号分别为 071329906, 7532
200007, 7152200010) ; 葛根、黄芩、黄连、甘草药材由
广东省药材公司提供, 经本校中药鉴定教研室刘传
明讲师鉴定, 分别为豆科植物野葛 P uera ria loba ta
O hw i, 唇形科植物黄芩S cu tella ria ba ica lensis Geo r2
gi 干燥根茎, 毛茛科植物黄连 Cop tis ch inensis
F ranch 干燥根茎, 豆科植物甘草 G ly cy rrh iz a u2
ra lensis F isch. 干燥根茎 (经蜜制)。
2　方法和结果
211　供试品溶液的制备: 按处方配比 (葛根 15 g、黄
芩 9 g、黄连 9 g、甘草 6 g) 取葛根芩连汤各味药饮
片, 加水 400 mL 浸泡 15 m in, 先煎葛根 20 m in, 余
药共煎 30 m in, 煎两次, 合并滤液, 定容至 1 000
mL , 取 4 mL , 定量加甲醇 6 mL , 超声 10 m in, 离心,
定容至 10 mL , 作为供试品溶液。黄连、葛根、黄芩、
苷草药材及缺黄连、葛根、黄芩、甘草阴性溶液同法
制备。
212　电泳条件: 电解质溶液由 30 mmo löL 磷酸盐
和 40 mmo löL 硼酸盐组成, 未涂层融硅毛细管 (65
cm ×5 Λm , 有效长度 43 cm ) , 分离电压 22 kV , 进样
1 s, 检测波长 254 nm , 温度 30 ℃。样品依次进样电
泳。全方H PCE 分离图见图 1。
213　方法学考察
21311　精密度试验: 取全方供试品溶液 1 份, 连续
进样 5 次, 测得主要峰相对迁移时间和单峰面积, 结
果表明黄连 6 个峰 (命名为 11～ 16)、葛根 12 个峰
(命名为 ～ )、黄芩 个峰 (命名为 ～ )、甘
黄连211～ 16　葛根2g1～ g12　黄芩2q1～ q8
R h iz om a Cop tid 1211—16　R ad ix P uerariae2g1—g12
R ad ix S cu tella riae2q1—q8
图 1　葛根芩连汤全方 HPCE 分离图
F ig. 1　HPCE chromatogram of GQD
草 1 个峰迁移时间相对恒定。黄连 5 个峰 (分别为峰
11、12、13、14、15、16)、葛根 6 个峰 (分别为峰 q2、
q3、q4、q5、q8)、黄芩 5 个峰 (分别为 g4、g6、g8、g9、
g10、g12)峰面积相对恒定, R SD < 5%。
21312　稳定性试验: 取全方供试品溶液 1 份, 分别
在 0、4、8、12、24 h 进样, 测得主要共有峰迁移时间
和峰面积, 表明黄连 6 个峰、葛根 12 个峰、黄芩 8 个
峰、甘草 1 个峰迁移时间相对恒定, 并且R SD < 5%。
黄连 5 个峰、葛根 6 个峰、黄芩 5 个峰峰面积相对恒
定, R SD < 5%。
21313　重现性试验: 按处方配比取全方药材饮片 5
份, 照 211 项下方法, 制成供试品溶液, 依次进样分
析, 测得主要峰相对迁移时间和峰面积。结果表明黄
连 6 个峰、葛根 12 个峰、黄芩 8 个峰、甘草 1 个峰迁
移时间相对恒定, 黄连 5 个峰、葛根 6 个峰、黄芩 5
个峰峰面积相对恒定, R SD < 5%。
214　指纹图谱技术参数[10 ]: 根据 10 批葛根、黄芩、
黄连、甘草药材供试品溶液H PCE 谱给出的相关参
数, 比较供试品谱图, 其中黄连 6 个峰, 黄芩 8 个峰,
葛根 12 个峰, 甘草 1 个峰是各批供试品所共有的,
因此确定这 27 个峰为共有指纹峰, 其中黄连 5 个
峰、葛根 6 个峰、黄芩 5 个峰峰面积相对恒定,
R SD < 5% , 可以定量。其余各共有峰均按其相对迁
移时间定性。
3　结果及讨论
311　供试品溶液制备方法的考察: 取样品离心后的
沉淀物, 用 10 mL 甲醇超声 30 m in, 以甲醇为对照,
在 230～ 800 nm 扫描, 各波长的紫外吸收均小于
0 05 因此认为上述处理方法没有造成成分损失, 方
·057· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
法可行。
312　全方各峰的归属分别经各药材、阴性及对照品
对照确认, 其中 12 为小檗碱, g9 为葛根素, q8 为黄
芩苷, 甘草虽然产生 3 个峰, 但由于在方中甘草的量
较少, 受到的干扰相对较大, 出峰时间的相对稳定性
较差, 只有一个峰的相对迁移时间的R SD < 5% , 但
如果把 R SD 放宽至 10% , 则 3 个峰相对迁移时间
皆可用于定性。
313　方法学考察表明该法可用于葛根芩连方指纹
图谱的建立, 其中黄连、黄芩分别有 5 个峰可以定
量; 葛根有 6 个峰可以定量, 其他 11 个成分可用相
对迁移时间定性。
314　葛根芩连汤中成分复杂, 含有多种生物碱、黄
酮类、皂苷类成分, 采用高效液相色谱法, 即使采用
梯度洗脱也很难在一个色谱柱上使各类成分得到较
好的分离, 高效毛细管电泳的原理是利用成分在电
压的驱动下, 在电解质溶液中淌度的不同而得到分
离, 分离的效率高, 各类物质都可以得到较好的分
离, 分析时间短, 样品的处理比较简单, 体现其在中
药分析特别是中药复方的分析中的优势。
　　本法可为葛根芩连方及其他含葛根、黄芩、黄连
的方剂物质基础及配伍规律研究提供分析方法; 可
为黄连药材、葛根药材、黄芩药材及葛根芩连制剂质
量标准及其他含葛根、黄芩、黄连复方制订指纹图谱
的建立提供参考。
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蚕砂中叶绿素类金属配合物清除活性氧作用研究
冯　清1, 刘　莉1, 罗　丰1, 孙荻娜1, 李早英2Ξ
(11 华中科技大学同济医学院 医学化学系, 湖北 武汉　430030; 21 武汉大学生命科学院, 湖北 武汉　430072)
摘　要: 目的　研究蚕砂中提取、精制叶绿素类金属配合物 [ Fe2+ (É )、Cu2+ (Ê )、M n2+ (Ë )、Co 2+ (Ì ) ]作为抗活
性氧 (O ÷2 、H 2O 2、OH·) 模拟酶。方法　核黄素—蛋氨酸光照测其清除O ÷2 作用, H 2O 2 氧化维生素 C 法测其催化
H 2O 2 的分解, Fen ton2苯甲酸钠荧光法测其对OH·清除作用, 小鼠肝匀浆法测其抗脂质过氧化作用。结果　1×
10- 5～ 1×10- 6 mo löL 具有良好的清除O ÷2 作用, 活性顺序为: Cu2+ > M n2+ > Co 2+ > Fe2+ ; 约 1×10- 7 mo löL 具有
分解 H 2O 2 作用, 活性顺序为: Cu2+ > M n2+ > Fe2+ > Co 2+ ; 约 1×10- 8 mo löL 具有清除OH·的功能, 活性顺序为:
Cu2+ > Co 2+ > Fe2+ > M n2+ ; 约 1×10- 8 mo löL 可使脂质过氧化产物明显减少, 活性顺序为: Cu2+ > Co 2+ > M n2+ >
Fe2+ 。结论　蚕砂中叶绿素类金属配合物可作为抗多种活性氧 (O ÷2 、H 2O 2、OH·)模拟酶。
关键词: 蚕砂; 叶绿素类金属配合物; 抗活性氧; 脂质过氧化
中图分类号: R 286102; R 286107　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 07 0751 04
·157·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
Ξ 收稿日期: 2003210204