全 文 ：葛根素腹腔注射在兔视网膜组织中的药动学研究
邓新国1, 胡世兴1, 23 , 张清炯1, 杨锦南1, 林少春1, 陈　慷1Ξ
(11 中山大学 中山眼科中心, 广东 广州　510060; 21 中国中医研究院眼科医院, 北京　100040)
摘　要: 目的　测定 ip 葛根素后不同时间新西兰白兔视网膜组织中葛根素含量, 计算其药动学参数, 研究药动学
特点。方法　44 只家兔随机分为 11 组, 各组每只家兔 ip 葛根素 80 m gökg 加等量 5% 葡萄糖液, 在用药前 (0 h)
和用药后 015、1、2、3、4、6、8、12、16、24 h 取视网膜组织, 采用反相高效液相色谱法 (R P2H PL C) 进行测定, 3P87 软
件拟合药动学参数。结果　ip 葛根素后在兔视网膜组织中药动学符合开放式二房室模型, 药动学参数理论值为:
Cm ax= 1108 Λgöm g, tm ax= 1152 h, t1ö2 Α= 1102 h, t1ö2 Β= 7137 h, CL = 2167 göh,A U C = 6189 Λgö(h·m g)。实测值为:
30 m in 时视网膜中葛根素的量为 (0106±0102) Λgöm g, 在 2 h 达到高峰 Cm ax为 (0121±0105) Λgöm g, 随后逐渐下
降, 8 h 降至较低为 (0102±0100) Λgöm g。结论　本方法特异、准确、灵敏, 可用于视网膜组织中葛根素含量测定,
葛根素通过 ip 给药能透过血2视网膜屏障, 进入视网膜组织。
关键词: 葛根素; 药动学; 视网膜
中图分类号: R 285161　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 12 1382 03
Pharmacok inetic study of puerar in in retina l t issue of rabb its by in traper itonea l in jection
D EN G X in2guo 1, HU Sh i2x ing1, 2, ZHAN G Q ing2jiong1, YAN G J in2nan1, L IN Shao2chun1, CH EN Kang1
(11Zhongshan Oph thalm ic Center, Sun Yat2sen U niversity, Guangzhou 510060, Ch ina; 2. Eye Ho sp ita l of
Ch ina A cadem y of T radit ional Ch inese M edicine, Beijing 100040, Ch ina)
Abstract: Object　To determ ine the concen tra t ion and pharm acok inet ic changes of puerarin in ret ina l
t issue of rabb its by ip adm in ist ra t ion. M ethods　Fo rty2fou r rabb its w ere random ly divided in to 11 group s.
Puerarin (80 m gökg) in addit ion of 5% gluco se so lu t ion w as given by ip adm in ist ra t ion to each rabb it in
every group s. A fter adm in ist ra t ion, the ret ina l t issue w as co llected at d ifferen t t im e po in ts such as 0 h p re2
adm in ist ra t ion and 0. 5, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, and 24 h po st2adm in ist ra t ion and the concen tra t ion of
puerarin w as detected by R P2H PL C. T he pharm acok inet ic param eter w as fit ted by 3P87 softw are. Results
　T he pharm acok inet ics of puerarin in the ret ina l t issue w as sub jected to the tw o2compartm en t open mod2
el. T he pharm acok inet ic param eters w ere separa tely as fo llow ing: Cm ax= 1108 Λgöm g, tm ax= 1152 h, t1ö2 Α=
1102 h, t1ö2 Β= 7137 h, CL = 2167 göh, A U C = 6189 Λgö(h·m g). T he p ract ica l data of the concen tra t ion of
puerarin in ret ina l t issue w as (0. 06±0. 02) Λgöm g at 30 m in and m ax im um concen tra t ion w as (0. 21±0.
05) Λgöm g at 2 h, respect ively. T hen the concen tra t ion of puerarin in ret ina l t issue w as gradually de2
creased to the low er level (0. 02±0. 00 Λgöm g) at 8 h. Conclusion　T he m ethod of R P2H PL C is part icu2
la r, accu ra te, and sen sit ive. T he puerarin by ip adm in ist ra t ion can penetra te the b lood2ret ina barriers and
en ter the ret ina l t issue.
Key words: puerarin; pharm acok inet ics; ret ina
　　葛根素 (puerarin) 主要由豆科植物野葛或甘
葛藤干燥根中所提取, 化学名为 82Β2D 2吡喃葡萄糖2
4′, 7′2二羟基异黄酮苷, 属于异黄酮类。葛根素临床
应用广泛, 主要用于心、脑血管疾病的治疗[1 ]。近年
来关于葛根素在眼科的应用和研究的报道日趋增
多, 其主要用于降低眼内压和眼底疾病的治疗[2, 3 ]。
但就葛根素全身用药后在视网膜组织中的药动学研
究, 至今未检索到文献报道。本实验给家兔 ip 葛根
素后, 测定葛根素在兔眼视网膜中的药动学变化, 以
期为其临床应用提供理论依据。
1　材料
　　W aters 液相色谱仪, 510 型高压泵, 486 紫外检
测器, 上海三锐色谱工作站, 高速台式离心机
(T GL 216, 上海) ,M ET TL ER A E260 分析天平。葛
·2831· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004203206
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (30300467) ; 广东省自然科学基金资助项目 (010765)
作者简介: 邓新国 (1961—) , 男, 河南郑州市人, 中山大学中山眼科中心临床眼科药理实验室副主任, 讲师, 眼科学博士, 主要从事眼科药
物对眼科疾病治疗的实验和药理作用研究, 在国内核心期刊上发表论著 30 余篇。T el: (020) 873302893 通讯作者　E2m ail: M arkhu@ 263. net
根素对照品由中国药品生物制品检定所提供 (批号
7522200108) , 葛根素药物来自浙江康恩贝制药有限
公司 (批号 020319, 100 m gö2 mL )。实验用试剂均
为色谱纯, 溶剂及流动相用水为重蒸水。
2　方法
211　分组及给药: 44 只健康新西兰白兔 (中山大
学实验动物中心提供) , 眼底检查无异常, 体重
210～ 215 kg, 随机分为 11 组, 各组兔 ip 葛根素 80
m gökg 加等量 5% 葡萄糖液, 分别于用药前 (0 h)
和用药后 015、1、2、3、4、6、8、12、16、24 h 处死家兔,
取视网膜置 - 20 ℃ 冰箱备用。
212　对照品溶液的配制: 精确称取葛根素对照品
214 m g, 加 1 mL 甲醇, 即得 214 m gömL 的对照品
储备液A。取储备液A 50 ΛL 移入 10 mL 量瓶中,
用甲醇稀释至刻度, 配成 12 m göL 的储备液 B , 以
储备液 B 为母液用甲醇配制为 12、115、01375、
01037 5 ΛgömL 的对照品工作液, 置 - 20 ℃ 冰箱
备用。
213　色谱条件: 色谱柱为 D iamon sil C 18不锈钢柱
(250 mm ×4. 6 mm , 5 Λm , 迪马公司) , 流动相为甲
醇2水2冰醋酸 (35∶65∶012) , 体积流量: 019 mL ö
m in, 紫外检测波长为 250 nm。
214　样品处理: 精确称取不同时间组视网膜组织约
200 m g, 放入 5 mL 玻璃研磨器中, 加入等体积 015
mo löL 高氯酸后研磨 5 m in, 将视网膜匀浆液移入
115 mL 离心管中, 12 000 röm in 离心 5 m in, 取上
清液 40 ΛL 进样测定。
215　标准曲线制备: 精确称取正常兔视网膜组织约
200 m g, 放入 5 mL 玻璃研磨器中, 加入等体积的
015 mo löL 高氯酸溶液, 并用不同质量浓度的葛根
素工作液配制成不同终质量浓度的视网膜加标准液
(01005、01012 5、01037 5、01075、0115、013、016 Λgö
mL ) , 研磨 5 m in, 按 214 项方法对视网膜组织进行
处理, 并按上述色谱条件进行测定。以峰面积 (Y )
和质量浓度 (X ) 进行线性回归, 回归方程为 Y =
324 824. 9 X + 8217 ( r = 0. 999 7 ) , 线 性 范 围
01005～ 016 ΛgömL , 按信噪比为 3 计算最低检测质
量浓度, 葛根素在视网膜组织中的最低检测质量浓
度为 2 ngömL。
216　回收率和精确度试验: 分别配制 01012 5、
01075、013 ΛgömL 3 种质量浓度的葛根素标准视网
膜液, 按 214 项下操作并进行分析, 求得葛根素在视
网膜组织中的回收率。在同 1 天和 5 d 间 (每天 1
批) 对以上 3 种质量浓度的葛根素标准视网膜液分
别处理 5 批后进样分析, 分析日内和日间 R SD。结
果见表 1。葛根素在视网膜中的回收率较高, 日内和
日间变异较小, 表明该方法较为稳定。
表 1　葛根素在视网膜组织中的回收率和
精确度试验结果 (n= 5)
Table 1　Recovery and accuracy of puerar in
in retina l tissue (n= 5)
质量浓度ö(Λg·mL - 1) 回收率ö% 日内 RSD ö% 日间 RSD ö%
01012 5 96118±0104 4175 4147
01075 95184±0103 2156 3143
013 95124±0102 3102 2105
217　药动学参数计算: 数据经 3P87 软件进行房室
拟合, 并计算药动学参数。
3　结果
311　色谱行为: 葛根素的保留时间为 1019 m in, 无
其他峰干扰, 方法的准确度和精确度符合生物样品
的测定要求。色谱图见图 1。3 2葛根素　A 2视网膜组织空白
B2视网膜组织+ 葛根素标准液　C2视网膜组织样本3 2puerarin　A 2retinal t issue b lank
B2retinal t issue+ puerarin　C2retinal t issue samp le
图 1　HPLC 色谱图
F ig. 1　HPLC chromatogram s
312　视网膜组织中葛根素含量: 葛根素经 ip 给药,
不同时间兔视网膜中葛根素含量的测定结果见图
2。可见 ip 2 h 后葛根素在视网膜中的量达高峰为
(0121±0105) Λgöm g, 3 h 开始下降, 16 h 几乎测不
到, 仅为 0101 Λgöm g。
313　葛根素在视网膜组织中的药动学模型拟合及
相关参数: ip 葛根素后, 其在正常新西兰白兔视网
膜组织中药动学模型呈开放式二房室模型, 药动学
参数如下: V öF = 72163 Λgöm g、 t1ö2 Α= 1102 h、
t1ö2 Β= 7137 h、A U C = 6189 Λgö(h·m g)、CL = 2167
göh、tm ax= 1152 h 和 Cm ax= 1108 Λgöm g。
4　讨论
　　H PL C 法是测定血样和药物中葛根素含量的常
用方法之一[4, 5 ]。吴正红等[6 ]应用 H PL C 技术测定
·3831·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
图 2　兔 ip 葛根素后视网膜组织的药物浓度-时间曲线
F ig. 2　Concen tration - time curve of puerar in in retina l
tissue of rabbits af ter ip adm in istration
了眼局部应用葛根素滴眼液房水中葛根素的药动
学, 笔者也曾通过 ip 葛根素, 应用 H PL C 技术测定
了兔眼房水中葛根素的药动学变化[7 ]。本研究通过
ip 葛根素, 应用 H PL C 技术对视网膜组织中葛根素
的药动学进行研究, 葛根素在视网膜组织中的药动
学变化符合开放式二房室模型, 2 h 达高峰, 以后逐
渐下降, 但葛根素进入视网膜组织中的量较低, 8 h
就降至 0102 Λgöm g, 16 h 几乎测不到, 消除较快。
本实验采用高氯酸和高速离心技术沉淀视网膜
中的蛋白质, 以甲醇2水2冰醋酸 (35∶65∶012) 为
流动相 , 色谱柱为D iamon silC 18不锈钢柱 , 在波长
为 250 nm 紫外光下对兔视网膜中的葛根素含量进
行了测定。结果表明, 本方法具有特异、灵敏、快速等
优点, 适用于对视网膜中葛根素含量的测定。本实验
结果表明葛根素通过 ip 能透过血2视网膜屏障, 进
入视网膜组织, 此结果为葛根素全身用药治疗眼底
疾病提供了实验依据。
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21 (3) : 25822601
大蒜素对二甲基亚硝胺诱发的肝纤维化大鼠的保护作用
朱兰香1, 陈卫昌1, 许春芳1, 刘世增2, 顾振纶2, 王响英3Ξ
(11 苏州大学附属第一医院 消化科, 江苏 苏州　215006; 21 苏州大学医学院 药学系药理教研室,
江苏 苏州　215007; 31 苏州大学 电镜室, 江苏 苏州　215007)
摘　要: 目的　研究大蒜素对实验性肝纤维化大鼠的保护作用。方法　SD 大鼠随机分为 5 组: 正常对照组、模型组
(给等量蒸馏水)、大蒜素 (11、22 m gökg) 组、秋水仙碱 (0115 gökg) 组。二甲基亚硝胺 (DM N ) 诱发大鼠肝纤维化
模型, 各组在造模开始时 ig 给药, 实验共进行 42 d。腹主动脉取血, 制备血清, 进行肝功能、血脂、肝细胞病理学检
查。结果　大蒜素各组均能明显降低实验性肝纤维化大鼠血清丙氨酸转氨酶 (AL T )、谷草转氨酶 (A ST ) (P <
0105、0101) 水平, 以大蒜素 22 m gökg 组作用明显, 而秋水仙碱对肝功能没有明显的改善作用 (P > 0105)。大蒜素
均能明显降低血清甘油三酯 (T G)、胆固醇 (TC) 水平, 提高血清白蛋白 (ALB ) 含量。病理学检查结果, 大蒜素组
肝细胞的坏死、空泡变性、出血及脂肪沉积较模型组和秋水仙碱组明显减轻, 炎症细胞明显减少。电镜检查结果显
示, 大蒜素 11 m gökg 组肝细胞坏死、自溶较模型组明显减轻, 大蒜素 22 m gökg 组肝细胞接近正常。结论　大蒜素
对DM N 所致肝损伤具有保护作用。
关键词: 大蒜素; 二甲基亚硝胺; 肝纤维化
中图分类号: R 28615　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 12 1384 04
·4831· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004203222
作者简介: 朱兰香 (1963—) , 女, 江苏人, 硕士学位, 副主任医师, 研究方向为肝纤维化的防治。
T el: (0512) 62002430　E2m ail: zhu lanx iang@m edm ail. com. cn