全 文 ：·1722· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
3讨论
目前黄芪甲苷的测定主要采用薄层扫描法，如
2000年版《中国药典》收载黄芪药材中黄芪甲苷的
测定方法即为TLCS法，但其操作繁琐，重现性差。
黄芪甲苷最大紫外吸收波长k。一200．8nm，为末
端吸收，不适于应用紫外吸收检测器测定。蒸发光散
射检测器(El，SD)作为HPLC法的一种检测器，对
无紫外吸收的物质较为适用，因此，参照高效液相色
谱法(《中国药典》2000年版一酃附录ⅥD)，经对比
文献报道的黄芪甲苷测定方法，并经过反复优化，建
立了黄芪甲苷的高教液相一蒸发光散射法测定方法。
经过对线性范围、精密度、供试品溶液稳定性、重现
性、回收率等方法学考察，证明本方法操作简便、准
确可行。
Refel旭nces=
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HPLC法测定草木犀中香豆素
张兴福1，薛艳2，张铁军2，袁丹1
(1．沈阳药科太学中药学院，辽宁沈阳110016}2．天津药物研究院，天津300193)
草木犀为赢科(Leguminosae)草木犀属
(MelilotusMill．)一年或两年生草本植物，该属植物
全世界约有zo种，其中黄香革术犀M．officinalls
(L．)Desr．主要分布于温带、亚热带、欧亚大陆及
地中海地区，是家畜重要的优质牧草之一，同时民间
以叶、花制成软膏，用作外伤药；或煎服用于治疗浮
肿、腹痛、疟疾等症o]。具有止咳平喘、清热解毒、解
痉止痛、化湿和中的功效o]。我国《部颁标准》、《藏药
标准》和《上海市药材标准》有所收载。草木犀中主要
有效成分为香豆素(coumarin)，目前该成分的定量
分析方法主要为紫外分光光度法，薄层扫描法和高
效液相色谱法口]。以高效液相色谱法最为简便、快
速、准确。因此，本试验建立了一种快速、简便、准确
的HPLC测定方法，并对不同产地、采收时期及草
木犀不同部位中的香豆素进行了测定，对控制草木
犀的质量、合理的采收期和资源利用具有理论意义
和实用价值。
1材料与仪器
1．1材料：草木犀分别采自江苏(苗期、成熟期)、天
津(军粮城、蓟县、汉沽)、南戴河、内蒙古、青海，经天
津药物研究院张铁军研究员鉴定为黄香草木犀M．
officinalis(L．)Desr．和白花草木犀M．albus
Desr．。香豆素对照品由Sigma公司提供，质景分数
收藕ra期：2005一01—27
为99％。乙腈为色谱纯，购白天津市康科德科技有
限公司，水为去离子水，用时均过微孔滤膜，其他试
剂为分析纯。
1．2仪器：高教液相色谱仪：DIONEX液相系统，
变色龙色谱工作站；分析柱：天河一C，。(250mm×
4．6mm，10pm)。
2方法及测定结果
2．1 色谱条件：色谱柱为天河一C¨(250mm×4．6
mm，10pm)；流动相：乙腈一水一冰醋酸(20I 80：1)；
体积流量为1．0mL／min；检测波长为273nm，柱温
为室温；进样量20pL。按外标法测定。色谱图见图1。
I 8
n ～ JL
0 0 10．0 ：o 0 30．0o彳一’l百r—1i可一。丽0
t／rain
图1香豆索对照品(A)殛样品(B)色谱图
Fig．1Chromatogramsfcou arinreference
substance(A)andsamples(B)
2．2对照品溶液的制备：精密称取香豆素对照品
3．22mg，于100mL量瓶中，加甲醇至刻度．摇匀，
作为储备液，精密吸取2mL，于10mL量瓶中，加
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 723·
甲醇至刻度。摇匀得对照品溶液，备用。
2．3供试品溶液的制备：精密称取生药叶花和茎粉
末(叶花过40目筛，茎过16目筛)各1．0g，加70％
乙醇50mL，水浴加热回流提取lh，放冷，滤过，共
提取2次，合并滤液，滤液减压浓缩，残渣用乙醇溶
解并转移至50mL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。精
密吸取2mL，于10mL量瓶中，加乙醇至刻度。经
0．45pm微孔滤膜滤过，取续滤液即为供试品溶液。
2．4标准曲线绘制：取香豆素储备液，精密吸取
0．1、0．5、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0mL于10mL量瓶
中，加甲醇至刻度。精密吸取上述各溶液20止，按
上述色谱条件进行分析，以样品峰面积值为纵坐标
(y)，进样浓度为横坐标(x)作图，得回归方程Y=
0．7805X+0．0214，r；0．9995，结果表明，香豆
素在0．322～16．1pg／mL呈良好的线性关系。
2．5稳定性试验：分别对同一样品溶液在上述色谱
条件下进行分析，分别在放置0、2、4、8、12h时进样
20pL测定，峰面积几乎无变化，叶花的RSD值为
0．55％白一5)，茎的RSD值为0．97％(月一5)。结果
表明，样品溶液在12h内稳定。
2．6精密度试验；取香豆素对照品溶液，用0．45
pm微孔滤膜滤过，取续滤液连续进样6次，RSD为
1．44％。
2．7重现性试验：取南戴河黄香草木犀叶花、茎各
6份，按2．3项下方法制备供试液，按上述色谱条件
进行分析，结果表明重现性良好，叶花中香豆素平均
质量分数为0．1837％，RSD为1．73％，茎中香豆素
平均质量分数为o．1310％，RSD为1．63％。
2．8回收率试验：精密称取已知香豆素量的南戴河
黄香草木犀叶花、茎样品各9份，分别精密加入一定
量的香豆素对照品溶液，按2．3项下方法制备供试
液，制备成3个不同质量浓度的供试液，每个质量浓
度分别制备3份，按上述色谱条件进行分析，结果表
明回收率良好，叶花中平均回收率为100．73％，
RSD为1．77％(n=9)，茎中平均回收率为
99．16％，RSD为1．88％b一9)。
2．9样品的测定：制备各地草木犀供试品溶液，按
上述色谱条件进行分析，测得香豆素的量。结果见
表i。
3讨论
3．1在供试品溶液制备过程中，先后采取了超声提
取法，醋酸乙酯提取法和甲醇加热回流法，70％乙醇
水浴加热回流提取法。以70％乙醇加热回流提取得
香豆素量最高，而且本溶剂无毒，提取条件简单，易
衰1不同产地草术雎中的番豆素抽一2)
Table1 Coumadnin．M．offtrinalisfrom
varjo∞haMtats抽一2)
操作。并进行了提取终点考察，结果表明，提取2次，
每次1h，香豆素已经基本提取完全。第3次提取量
约为前两次提取量的1％，第4次提取已无香豆素
检测出。所以提取2次，每次1h作为提取终点。
3．2本法与文献[3]报道的用紫外分光光度法和薄
层扫描法相比具有优越性，用紫外分光光度法测得
的香豆素量会偏高，因为样品提取液中含有其他成
分，对紫外吸收有贡献，最大吸收波长也极为接近，
不经进一步分离处理直接测定，结果偏高，而分离中
萃取浓缩极易产生操作误差。而薄层扫描法条件不
易控制，操作繁琐、费时，受仪器及显色剂的限制，精
密度和重现性不好。所以本研究建立的HPLC法测
定草木犀中香豆素，方法简便、快速、重现性好、灵敏
度高，更适用于实际工作，对进一步开发和利用这一
丰富的自然资源具有重要意义和实用价值。
3．3不同产地和不同采收期草术犀中香豆素的测
定结果表明，不同产地的样品中均含有香豆素，但量
差异较大，而且茎、叶花中量相差也较大。采收期对
其量也有很大的影响。以7月青海省西宁市城北区
大h子黄花草木犀叶中香豆素最高，达0．3663％，
而天津蓟县黄花草木犀茎中香豆素量最高，达
0．1438％。江苏苗期和成熟期黄花草木犀比较，其
中香豆素量变化也较大。这说明香豆素的量受产地
和采收季节的影响较大，特别是采收期的影嘀更大，
以花期采收香豆素量最高。
Referencest
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万方数据
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RP—HPLC法测定不同时期垂柳中木犀草素一7-0一p一口吡喃葡萄糖苷
刘可越1，高文远”，张铁军2，郑教男3，陈海霞1
j
(1，天津大学药学院，天津300072}2．天津药物研究院中药现代部，天津300193
3．吉林农业大学中药材学院，吉林长春130118)
垂柳SalixbabylonicaL．为杨柳科柳属植物，
《中药大辞典》将垂柳的叶、枝和柳絮收载为中药“3。
《本草纲目》中有记载：柳为本经下品，其性寒、味微
苦，具有祛风、利尿、止痛、消肿的功能，可用于治疗
风湿痹痛、淋病、白浊、水肿等症01。现代临床上用于
治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病、慢性气管炎、烧烫
伤“]。据报道，柳叶中含有丰富的黄酮类化合物o]，
其次是酚糖苷类化合物Ⅱ“]，还有多糖”’3]、有机
酸03等其他化合物，其中大多数柳树中均含有木犀
草素及其糖苷o]，其中木犀草素一7一O-O-D一吡喃葡萄
糖苷具有多种药理活性，如抗生物氧化“⋯、抗炎、止
痉、抗组胺的作用“”，以及抗癌、抗辐射等诸多生物
活性o“。鉴于此，笔者对垂柳中的木犀草素一7—0_p
D一毗喃葡萄糖苷进行定量分析，建立了RP—HPLC
法测定其量，并对比了其在不同采收期叶片、枝条及
柳絮中的量，以确定利用此化合物的最佳采收期及
采收部位，为进一步开发垂柳的药用资源提供理论
依据。
1仪器与材料
Agilent1100高效液相色谱仪；G1314A(VwD
检测器)；Agilent1100化学工作站。
木犀草素一7—0一pD一吡哺葡萄糖苷对照品(中国
药品生物制品检验所，质量分数99％)}经改造微波
炉(KJ25一BA)广州顺德美的微波炉制造；离心机
(LCl0—2．4A)jg京医用离心机厂；垂柳(由吉林农业
大学刘霞教授鉴定)叶片、枝条(从2003—5一12～
2003。10—12，每隔15d采样一次，5、10月分别为东
北地区垂柳刚发叶和落叶时期)、柳絮(2003—5—12)
采于吉林农业大学中草药苗圃2年生垂柳；甲醇、醋
酸均为色谱纯。
譬嚣景箨尹高矍嚣
2方法与结果
2．1 色谱条件：流动相：甲醇一水一醋酸(57．5；
42．5：0．5)}柱温：30℃；体积流量0．8mL／minI
AgilentC8高效液相色谱分析柱(150mitt×4．6
mm，5”m)；检测波长：254nm；进样量10pL。色谱
图见图1。
t
L沁
0 5 10 15 0 5 10 15
t／nfin
圈l术犀草素一7一D一}肛吡啊葡萄糖苷对照品(A)和
垂柳群提物(B)的HPLC圈谱
Fig．1HPLCchromatogramsfluteolin一7．D-B_D-
glucopyranoslde(A)andethanolextr ct
ofS．babylonica(B)
2．2供试品溶液的制备：精密称取粉碎过40目筛
的不同生长时期的垂柳叶片、枝条及柳絮各2g左
右，用滤纸包成小包，以70％乙醇为溶剂浸泡10
mln，在改造后的微波炉(设定功率2000w)中提取
40rain，减压回收溶液，挥干溶剂。用甲醇一水(1：1)
溶解残渣，离心，沉淀洗涤3次，合并上清液。取上清
液于50mL量瓶中，加甲醇一水(1t )至刻度，分别
取此液2mL于lOmL量瓶中，加甲醇一水(1：1)至
刻度，微孔滤膜滤过，备用分析。
2．3对照品溶液的制备：精密称定木犀草素一7一O—
pD一吡喃葡萄糖苷对照品约20mg，于100mL量瓶
中加甲醇一水(1t 1)适量，超声10rain使溶解，放
冷，加甲醇一水(1t 1)稀释至刻度，精密量取4mL
万方数据
HPLC法测定草木犀中香豆素
作者： 张兴福， 薛艳， 张铁军， 袁丹
作者单位： 张兴福,袁丹(沈阳药科大学中药学院,辽宁,沈阳,110016)， 薛艳,张铁军(天津药物研究院
,天津,300193)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 5次

参考文献(3条)
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