全 文 ：　　　　　　表 2　L9 ( 34)正交试验结果
Table 2　Results of L9( 34) orthogonal test
实验
号 A B C D(空白)
出油量
/ (m L)
A-亚麻
酸/ %
综合
评分
1 1 1 1 1 64 66. 29 　3. 81
2 1 2 2 2 50 66. 07 - 1. 66
3 1 3 3 3 40 63. 18 - 8. 23
4 2 1 2 3 56 67. 08 　1. 58
5 2 2 3 1 45 64. 25 - 5. 31
6 2 3 1 2 60 71. 60 　7. 50
7 3 1 3 2 40 63. 35 - 8. 07
8 3 2 1 3 75 69. 92 11. 49
9 3 3 2 1 60 69. 20 　5. 15
K 1 - 6. 08 - 2. 68 22. 80 　3. 65
K 2 　3. 77 4. 52 　 5. 07 - 2. 23
K 3 　8. 57 4. 42 - 21. 61 　4. 84
R 14. 65 7. 20 　44. 41 　7. 07
表 3　方差分析表
Table 3　Variance analysis
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F值 显著性
A 38 2 19 4. 75
B 12 2 　6 1. 5
C 334 2 167 41. 75 P< 0. 05
D(误差) 　8 2 　4
总和 392 8
　　F0. 05( 2, 2) = 19　F0. 01( 2, 2) = 99
高,容易获得。
3. 2　采用超临界萃取技术进行中药的研究开发及
产业化具有许多独特的优点:对提取温度和(或)压
力的改变可改变溶解度, 可选择性的进行中药中多
种物质的分离, 从而可减少杂质,使有效成分高度富
集, 便于减小剂量和质量控制,产品外观大为改善;
操作温度低,可较好地保存有效成分不被破坏,不发
生次生化。因此,特别适合于对热敏感性强、容易氧
化分解破坏的成分的提取; 提取时间快、生产周期
短, 一般 2～4 h 便可完全提取;流程简单, 操作方
便,污染小等。
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RP-HPLC法测定大鼠血浆中苦参碱的含量
何盛江1, 2 ,宋　力2,栾立标2X
( 1. 南京海陵中药制药工艺技术研究有限公司,江苏 南京　210049; 2. 中国药科大学 药剂学教研室,江苏 南京　210009)
　　苦参碱类生物碱以苦参碱为代表,来源于豆科
植物苦 参 S op hora f lavescens Ait .、苦豆子 S.
alop ecuroides L. 及广豆根 S . subp r ostrata Chun et
T . Chen中 [ 1]。苦参碱有多方面的药理作用和功效,
如抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗过敏、抗心律失常、消肿利
尿、免疫及生物反应调节作用等 [ 2]。本实验建立了
RP-HPLC 法测定大鼠血浆中苦参碱含量的方法,
为进行苦参碱的药动学研究提供了一个灵敏、可靠
的检测手段。
1　仪器与试药
岛津 LC—10AT 高效液相色谱仪, SPD—10A
紫外检测器(日本岛津公司) ; N—2000 双通道色谱
工作站(浙江大学智能信息工程研究所) ; BS110S 型
电子天平(北京赛多利斯天平公司) ; KQ—250DE
型超声处理仪(昆山市超声仪器有限公司)。
苦参碱对照品(宁夏盐池制药厂提供, 批号:
020711,纯度为 98. 9%) , 乙腈(江苏双邦科技有限公
司,色谱纯) ,其他试剂均为分析纯,水为重蒸水。苦参
碱氯化钠注射液( 5 mL∶50 mg)由本实验室自制。
　　SD大鼠, 200～250 g, 由中国药科大学实验动
物中心提供。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: ODS C18柱( 250 mm×4. 6
mm, 5 Lm,大连依立特公司, 5 cm 预柱) ;流动相: 乙
腈-水( 10∶90,磷酸盐缓冲液调 pH 至 2. 7) ; 体积流
量: 0. 7 mL/ min;检测波长: 220 nm;柱温: 25 ℃; 灵
·999·中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 35 卷第 9 期 2004年 9月
X 收稿日期: 2003-12-13作者简介:何盛江( 1975—) ,男,硕士研究生。T el : ( 025) 83505999-2888　E-mai l: h erbs j@ elong. com
敏度: 0. 02 AU FS。理论塔板数按苦参碱计不低于
2 800。
2. 2　方法专属性考察:将大鼠的空白血浆经预处理
后[ 3] , 取 20 LL 供 HPLC 分析, 所得色谱图见图 1。
可见,在上述色谱条件下,空白血浆对苦参碱的分析
测定无干扰, 方法专属性良好。
图 1　空白血浆(A)、苦参碱对照品( B)
和含苦参碱血浆(C)HPLC 图谱
Fig. 1　HPLC of blank plasma ( A) , matrine ref erence
substance (B) , and matrine in plasma (C)
2. 3　标准曲线及线性范围:精密称取苦参碱对照品
10 mg ,置 10 mg 量瓶中,加蒸馏水至刻度。用蒸馏
水分别稀释成 0, 2. 5, 5. 0, 12. 5, 25. 0, 50. 0, 75. 0,
125. 0 Lg/ mL 的溶液。取试管 8支,加大鼠空白血浆
0. 2 mL 及上述稀释液各 0. 2 mL, 蒸馏水 0. 1 mL,
20%氢氧化钠溶液 0. 4 mL,混合后用乙醚 5 mL 提
取,涡旋振荡 1 min,离心吸取乙醚层, 45 ℃水浴通
氮气挥干乙醚,残渣加 50 LL 流动相溶解。离心,取
上清液 20 LL 供高效液相色谱分析。对苦参碱峰面
积( A )和质量浓度( C)回归,得到苦参碱在血浆中的
标准曲线 A = 21 970 C+ 27 938, r= 0. 999 5,苦参
碱在 1～50 Lg/ mL 与峰面积线性关系良好。
2. 4　精密度试验:用空白血浆配制含苦参碱对照品
溶液 5. 0, 25. 0, 50. 0 Lg / mL, 分别进样 5次, 每次
20 LL, 测定峰面积;计算日内精密度及日间精密度,
结果见表 1。
表 1　精密度试验结果 ( n= 5)
Table 1　Result of precision test ( n= 5)
质量浓度/
( Lg·mL- 1)
日内精密度
均值
/ (Lg·mL- 1)
RSD
/ %
日间精密度
均值
/ ( Lg·mL - 1)
RSD
/ %
5. 0 4. 1 3. 92 3. 9 4. 31
25. 0 24. 3 3. 21 24. 1 3. 62
50. 0 48. 9 2. 12 48. 5 2. 41
2. 5　稳定性试验:精密吸取含苦参碱的同一样品的
溶液 20 LL,每隔 1 h 进样,共 4次,测定苦参碱峰面
积,计算,结果 RSD为 1. 39%。说明苦参碱在本色
谱条件下 3 h 内保持稳定,可适用于体内血药浓度
测定。
2. 6　加样回收率试验:精密称取已知含量的苦参碱
血浆供试品 3份,分别加入苦参碱对照品,按 2. 3项
下方法测定含量, 把结果代入标准曲线, 计算回收
率, 结果见表 2。结果表明该方法回收率较高,能够
满足血浆中苦参碱的测定要求。
表 2　回收率试验结果 ( n= 5)
Table 2　Result of recovery test ( n= 5)
质量浓度/
( Lg·mL- 1)
加入量
/ Lg
测得量
/ Lg
回收率
/ %
RSD
/ %
5. 0 5. 0 4. 92 98. 51 2. 11
25. 0 12. 5 12. 42 99. 31 1. 09
50. 0 25. 0 24. 77 99. 12 1. 13
2. 7　测定结果: 大鼠尾静脉注射 6 mg / kg 后,血浆
中的质量浓度在 1. 0～30 Lg / mL。未见到干扰。符
合一级消除模型。
3　讨论
　　实验中血浆处理采用 20%氢氧化钠碱化,再用
乙醚提取的方法,使苦参碱在碱性环境下呈分子状态
而被乙醚萃取,内源性杂质含量少, 方法回收率较高。
　　预试验考察了乙腈与水不同比例的流动相及不
同 pH 值对苦参碱出峰时间的影响,在文献 [ 4]条件
下, 流动相 pH 在 7. 6左右, 苦参碱为分子形式, 即
使加入扫尾剂三乙胺,仍有较为明显的拖尾现象。当
用磷酸调节 pH 为 2. 7, 在酸性环境下, 苦参碱离子
峰形无拖尾,对称性较好,能与血浆中的内源性物质
得到良好分离。
　　采用流动相中加入离子对试剂, 血浆中与内源
性物质难以分离,稳定性受影响。在本实验色谱条件
下苦参碱的 HPLC 峰出峰时间适宜, 重现性好, 且
无离子对试剂, 能延长色谱柱的寿命。
References:
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