全 文 ：·1496· 中草药ChineseTraditionalandHerba[Drugs第36卷第lo期2005年lo月
临界相对湿度是药物吸湿与否的临界值，可以
根据它确定生产环境的湿度。实验结果表明，安宫胶
囊临界相对湿度为60％，在生产中控制湿度，以免
影响产品质量。
References：
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九州虫草中核苷类成分的HPLC法测定
罗珊珊，陈 畅，史艳秋，孙迎节，张长铠+
(山东大学微生物技术国家重点实验室，山东济南250100)
虫草属[Cordyceps(Fr．)Link]真菌是一太类
昆虫病原真菌，迄今记载的已有360多种，在我国分
布的有70多种o]。冬虫夏草为我国传统的名贵药
材，具有很好的强壮滋补功效和多种医疗保健作用。
由于其生长环境独特，加之人们盲目挖采，资源已临
近枯竭。因此寻找冬虫夏草的替代品以满足市场需
求已刻不容缓。九州虫草Cordycepsbushuensis
Kob．采自山东蒙山，现已通过无性型菌株回接天
然寄主获得了人工栽培成功“]。根据现有的对该虫
草与冬虫夏草的化学成分监测、生物药效、体外抑瘤
试验及抗氧化性能研究，表明其具有较高的药用价
值．有望替代价格昂贵的冬虫夏草应用于临床01“。
核苷类物质为虫草属真菌中重要的药用成分之
一，具有广泛的生理功能。如改善心脑血管的血液循
环、防止心律失常、抑制神经递质的释放和调节腺苷
酸环化酶的活性等。虫草素(3L脱氧腺苷)为含氮配
糖体的核酸衍生物，属于嘌呤类生物碱，最先从蛹虫
草中提取提到的，并且在少数种类的冬虫夏草中存
在，具有广谱的抗菌活性，具有抑制肿瘤、抗疟原虫
和抑制mRNA翻译的作用。目前对虫草核苷类成分
研究多采用Ti。c和CZE法。但是，TI。C只能用作
定性分析和半定量分析03；CZE则存在准确度不
高“J，大部分成分分离不开等缺点；HPI。C法现在已
广泛用于样品的定性和定量分析中，它具有分离效
果好，准确度高等诸多优势。因此本实验采用HPLC
法对九州虫草中核苷类活性成分进行了测定。
1仪器与试剂
Agilent1100型液相色谱仪(惠普公司)；2487
uV双波长检测器；3K--18型超速冷冻离心机
(Sigma公司)；KQ一218超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司)fRE～52A旋转蒸发器(上海亚荣
生化仪器厂)。
九州虫革通过无性型菌株回接天然寄主获得，
本校生命科学学院菌种室提供，经中国科学院微生
物研究所郭英兰确认。冬虫夏草购自西藏自治区药
材公司；腺苷(A)、鸟苷(G)、尿苷(u)、27一脱氧腺苷
(2’一dA)和37．脱氧腺苷(3，_dA)对照品均购自
Sigma公司，乙腈及其他试剂均为国产色谱纯。
2方法与结果
2．1流动相的选择：根据文献报道o]，对核苷类成
分进行色谱分离时，其流动相为乙腈一水(1，99)洗
脱5min后过渡为乙腈一水(3：97)至洗脱完全。但
由于样品中成分的差异，分离效果不好，重叠峰和拖
尾现象明显。设计流动相分别采用①乙腈一水(1：
99)洗脱5rain后，增加流动相中乙腈的比例最终至
乙腈一水(3：97)；②乙腈一水(1：99)洗脱5rain后，
增加流动相中乙腈的比例最终至乙腈一水(4t 96)；
③乙腈一水(It 99)洗脱5min后，梯度增加流动相
中乙腈的比例最终至乙腈一水(5：95)；每次实验重
复3次，得出最佳流动相组成。将样品乎行配置3份
分别在不同条件下进行洗脱，根据色谱图峰形及分
离状态表明，乙腈一水(1，99)洗脱5rain后过渡为
乙腈一水(4t 96)具有较好的分离作用。
2，2色谱条件：色谱柱：YwG—c，。柱(250mm×4．6
n％m，5“m)，REsTEKPinnacleii型；检测波长：260
nm；体积流量；1．0mL／min；灵敏度：1．0AUFS；进
样量：5止l柱温为室温。
2．3标准回归方程的建立：精密称取腺苷、鸟苷、尿
鉴墓最翟：翟禁吾萄鎏攻关计划项目(。。。。。。。。。，
尊嘉蔫窄窘8器饕堵81高：亳窖常嚣婴坦刍’4翟惑雾气：}；嚣毪事sd徽u,生ed物u．制cn药方面研究
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第】0期2005年10月·1497·
苷、20脱氧腺苷、30脱氧腺苷各10mg溶于蒸馏水
中，定容至50mL，分别精密量取7．5、5、2．5、1．25、
0．625ml，于10mL量瓶中，加水至刻度。将所配制
的上述标准品溶液分别进样5止，在优化条件下进
行HPI。c分离，得5种标准品的回归方程。其中x
代表质量浓度，y代表峰面积，线性范围均为
0．025～1．025mg／mL。
A：Y=42．27182X一17．05376，r一0．9998；
U：Y=31·53282X一3·16643·，一0·999；G：y一
30．58996X一14．36780，r一0．9998；2’一A：Y一
43．4466 X一1．73680，r一0．999；3’一A：Y一
52．02569X一4．3762，r=0．9999。
2．4供试品溶液的制备：将冬虫夏草子座和九州虫
草不同部位(子座、虫体、全草、菌丝体)样品60c烘
干至恒重、粉碎、制成样品粗粉。准确称取每种样品
粗粉各3份，每份1．00g，置80mL玻璃管中，加双
蒸水40mI。，常温下浸提24h，提取物于12000r／
min离心20min，取上清液，将提取物分别蒸发浓
缩、冷冻干燥、双蒸水溶解并定容至10ml。。4C冰
箱保存备用。
2．5溶剂的选择：精密称取1．00g九州虫草子座
干粉，分别选择无水乙醇、双蒸水和吞油醚作为提取
溶剂，按供试品溶液的制备方法操作，将3种溶剂提
取液分别过HPLC柱，结果发现水提取液色谱峰和
重现性均最佳，核苷类物质基本提取完全；无水乙醇
提取液有洗脱峰出现，但量太小。而石油醚提取液只
洗脱出几个杂质峰，几乎无核苷类成分存在。这可能
与核苷类物质具有良好的水溶性有关。
z．¨定性分析，分别将标准品，九州虫草和冬虫夏
草子座水提取液5tLL进样，HPLC法分析，每个样
品重复3次，结果表明谱型图具有很好的重现性，且
各组分与标准品的相应成分具有近似的保鹭时间，
因此可以基于组分保留时间的～致性进行定性分
析o]。结果表明冬虫夏草中含有鸟苷、尿苷、37一脱氧
腺苷；九州虫草中含有腺苷、20脱氧腺苷、30脱氧腺
苷，尿苷和鸟苷。此时通过标准加入法将九州虫草样
品中加入5种核苷标准品混合物口]，同样条件下进
行HPLC检测，进一步验证了上述活性结论。
2．7精密度和稳定性试验：精密称取九州虫草子座
粉末1．00g，制备供试品溶液，以5pL连续进样5
次，按30脱氧腺苷峰面计，RSD为0．9％。每隔3h
连续进样4次，结果表明30脱氧腺苷峰匝积在9h
内稳定，RSD为1．8％。
2．8 回收率试验：分别取含3L脱氧腺苷2．415g
的九州虫草子座0．5g(以3’一脱氧腺苷为检测指
标)，3份，分别加入37一脱氧腺苷标准样品0．25、
0．5、o．75mg，制备供试品溶液，计算得平均回收率
101．5％，RSD为3．O％。
2．9定量分析及不同提取液中核苷比较：利用标准
回归方程，根据九州虫草不同部位色谱峰中各组分
的峰面积代人各组分对应的回归方程计算，结果见
表1，表明九州虫草子座中所含的核苷类成分最高。
裹l九州虫蕈不同部位中按苷类成分
Table1 NueleosldesIndifferentpar sofC．kyushuensis
根据九州虫草和冬虫夏草中各组分的峰面积代
人各组分回归方程计算，结果见表2。可看出，九州
虫草子座中30脱氧腺苷明显高于冬虫夏草，而尿苷
和鸟苷略高于冬虫夏草。因此通过改善培养条件，九
州虫草有望替代价格昂贵的冬虫夏草应用于临床。
衰2九州虫草和冬虫夏草子座中各核苷类成分
Table2 NuclestdesInC， inensisandC．kyushuensis
3讨论
本实验采用HP[，C法检测九州虫草中的核苷
类成分，为深入研究九州虫草的药用价值提供有用
的数据参考。结果表明该法灵敏度高，定性准确，重
复性好，回收率高等优点，是目前成分分析方面首选
的技术之一。
本研究通过对溶剂的选择，确定了以双蒸水提
取其结果的重现性和准确度最优。本文首次准确地
对九州虫草不同部位的核苷类成分进行了定性和定
量分析。为进一步开发和利用九州虫草资源提供了
理论依据。
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表面活性剂对大黄总蒽醌提取率的影响
韩刚，史国友，孙海燕’，王炳强。，安晋’
(华北煤炭医学院药学系t河北唐山063000)
大黄具有清热解毒、抗菌消炎、泻热通肠等功
效。其主要化学成分为结台和游离的大黄酸、大黄
酚、大黄素、大黄素甲醚和芦荟大黄素等蒽醌类化合
物。游离愁醌难溶于水，溶于乙醇、氯仿和乙醚等有
机溶剂。结合蒽醌易溶于水和乙醇，难溶于氯仿和乙
醚等有机溶剂。大黄总蒽醌的提取多采用70％～
8()％乙醇回流提取“。]，但所使用的乙醇体积分数
高．回收耗能高。利用表面活性剂能够提高姜黄中姜
黄素提取率o]，因此本实验研究了不同表面活性剂对
大黄中总蒽醌提取率的影响，结果表明十二烷基硫酸
钠(SDS)可大幅度提高大黄中总蒽醌的提取率。
l仪器与试药
AE--240S十万分之一电子天平(瑞士梅特
勒)；THz一82气浴恒温振荡器(江苏金坛市医疗仪
器厂)；TUml800紫外可见分光光度计(北京普析
通用仪器公司)。
1，8-=羟基蒽醌对照品(中国药品生物制品检
定所，供测定用)；表面活性剂为化学纯(浙江黄岩人
民化工厂)；其余试剂均为分析纯；实验用水均为去
离子水。大黄饮片购自唐山市药材采购供应站，批号
040306．经鉴定为掌叶大黄RheumPalmatumI～
2方法与结果
2．1大黄粉末的制备：取大黄饮片于烘箱中60c
干燥24h，粉碎至全部通过20耳筛备用。
2．2标准曲线的制备：精密称取干燥后的1。8-二
羟基蒽醌2．5mg，置于25mI。量瓶中，以0．5％醋
酸镁甲醇溶液为显色剂定容。分别准确量取该溶液
0．50、1．00、1．50、2．00、2．50mL于lOmL量瓶中，
0．5％醋酸镁甲醇溶液定容。以0．5％醋酸镁甲醇溶
液为参比，于510nm波长下测定吸光度(A)值“]，
回归得标准曲线A=32．74C+0．0135．r一
0．999，线性范围为5～25pg／mL。
2．3提取方法和提取溶剂的选择：精密称取大黄粉
末0．5g于比色管中，准确加入提取溶剂10mL，浸
泡30rain，35C气浴恒温振荡器中振荡30rain，静
置2min，迅速用0．45pm微孔滤膜滤过。准确量取
续滤液0．5mL于具塞试管中，沸水浴挥去乙醇，加
入1．5ml。蒸馏水，加入0．5mL40％三氯化铁水解
20mln，再加入0．2mI．稀盐酸沸水浴30m{n，水浴
蒸干。加水2mL，用乙醚萃取3次，至醚层无色。合
并乙醚萃取液，转入量瓶中，水浴挥干乙醚，残渣用
0．5％醋酸镁甲醇溶液定窖。于510rim波长下测量
A，按照提取率一总蒽醌质量／药材质量×100％，计
算总蒽醌提取率。见表1。结果显示：70％乙醇提取率
最高。以70％乙醇的提取率为相对标准100％．选定
40％乙醇为提取溶剂，此工艺条件下总蒽醌提取率相
对70％乙醇的提取率为49．2％，提取率适中，以便考
察表面活性剂对提取率的影响。以40％乙醇为溶剂，
考察加入不同的表面活性剂对总蒽醌提取率的影响。
2．4表面活性剂的选择：以40％乙醇为溶剂，加入
箨薯品羿：嚣04晶；j饶7一)，男。河北唐山人，教授．硕士生导师，主要从事中药有效成分提取分离及药物新剂型的研究
。华北煤￡芸≤谣爨薯盟‰k黯型‘。。。“6@163”⋯。
万方数据
九州虫草中核苷类成分的HPLC法测定
作者： 罗珊珊， 陈畅， 史艳秋， 孙迎节， 张长铠
作者单位： 山东大学,微生物技术国家重点实验室,山东,济南,250100
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(10)
被引用次数： 2次
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200510023.aspx