全 文 ：3 2薄荷脑3 2m entho l
图 1　薄荷脑对照品 (A)和薄荷油 (B)的 GC 图谱
F ig1 1　GC chromatogram s of men thol (A) and
O leum M en thae D em en thola tum (B)
213　供试品溶液的制备: 取薄荷油约 50 m g, 精密
称定, 置 10 mL 量瓶中, 加适量正己烷溶解, 并稀释
至刻度, 摇匀, 即得。
214　线性关系考察: 取薄荷脑对照品适量, 精密称
定, 加正己烷溶解制成 15100 m gömL 的溶液, 作为
储备液。分别精密称取储备液 012、016、110、114、
210 mL 于 10 mL 量瓶中, 用正己烷稀释至刻度, 摇
匀, 分别进样 1 ΛL。以薄荷脑峰面积和对应质量浓
度绘制标准曲线, 得回归方程: Y = 120 779 X +
1 11212, r= 01999 8。结果表明: 薄荷脑在 0125～
2150 m gömL 与峰面积呈良好的线性关系。
215　精密度试验: 取薄荷脑对照品溶液, 进样1 ΛL ,
重复进样 5 次 , 测定峰面积 , 计算得其R SD 为
0193%。
216　重现性试验: 取同批薄荷油 6 份, 制备供试品
溶液, 进样, 测定, 计算薄荷脑的质量分数, 结果其
R SD 为 0190%。
217　稳定性试验: 取供试品溶液于制备后 0、2、6、
8、12 h 依法测定峰面积, 结果薄荷脑峰面积的R SD
为 0197%。
218　回收率试验: 精密称取含薄荷脑 300136 m gög
的薄荷油样品 25100 m g, 共 6 份, 各加入薄荷脑对
照品 7150 m g, 制备成供试品溶液, 每次进样 1 ΛL ,
依法测定并计算加样回收率。结果平均回收率为
99172% , R SD 为 1110%。
219　样品测定: 取供试品溶液和对照品溶液, 分别
进样 1 ΛL , 测定峰面积, 按外标法计算薄荷脑的含
量, 见表 1。
表 1　薄荷油中薄荷脑的测定结果 (n= 3)
Table 1　M en thol in O leum M en thae D em en thola tum (n= 3)
厂　家 批　号 薄荷脑ö(m g·g- 1) RSD ö%
上海万香日化有限公司 20209132 328120 1102
中南药业有限公司 031106　 301127 0198
031108　 310104 1134
031205　 296138 1113
3　讨论
　　采用本法测定薄荷油中薄荷脑的含量, 方法灵
敏、结果准确, 各成分能达到基线分离, 可以作为控
制薄荷油质量的检测手段。
栀子中京尼平苷的分离及其含量测定
张丽茹1, 于治国13 , 范　岩2, 涂继辉1Ξ
(11 沈阳药科大学药学院, 辽宁 沈阳　110016; 21 沈阳药大集琦药业有限责任公司, 辽宁 沈阳　110016)
　　栀子为茜草科植物栀子Ga rd en ia jasm inoid es
E llis 的干燥成熟果实, 味苦、性寒, 主治热病心烦、
黄疸尿赤, 具有泻火除烦、清热利尿等作用。栀子化
学成分复杂, 主要成分为环烯醚萜苷类, 京尼平苷
(gen ipo side, 栀子苷)为主要有效成分之一。京尼平
苷的提取分离方法主要有铅盐沉淀法、活性炭吸附
法、中性氧化铝除杂质法等[1 ]。本实验根据京尼平苷
的理化特性, 通过硅胶柱色谱分离、醋酸乙酯2丙酮
重结晶纯化, 制备京尼平苷单体, 并采用H PL C 法
对各产地栀子药材中京尼平苷的含量进行测定, 为
栀子的深入研究及质量控制提供可行方法。
1　仪器与试药
岛津高效液相色谱仪 (配有L C—10A T vp 输液
泵, SPD—10A vp 可变波长紫外检测器, TA —130
柱温箱,ANA STA R 色谱数据处理系统)。
　　甲醇 (色谱纯) , 重蒸水 (自制) , 其他试剂均为分
析纯。栀子药材购自各地药材公司及药店。
2　方法与结果
·3521·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 11 期 2004 年 11 月
Ξ 收稿日期: 2003212212
作者简介: 张丽茹 (1977—) , 女, 山东荷泽人, 沈阳药科大学药物分析学硕士研究生。3 通讯作者　T el: (024) 2384371123366　E2m ail: yzg2cnn@ 1631com
211　京尼平苷的分离鉴定: 取栀子仁 100 g, 加
75% 乙醇回流提取 3 次, 每次 500 mL , 提取 4 h, 合
并提取液, 回收乙醇, 得浸膏。取浸膏用热水 90 mL
超声溶解, 石油醚萃取 4 次, 每次 30 mL。取水层用
水饱和正丁醇萃取, 萃取至正丁醇层显淡黄色, 合并
萃取液, 回收正丁醇得干浸膏。干浸膏用约 2 倍量硅
胶拌样后上样于硅胶柱, 先以 5 倍体积氯仿洗脱, 再
用氯仿2甲醇 (14∶1) 洗脱, 分别收集洗脱液。经
TL C 跟踪, 合并含京尼平苷的洗脱液。回收溶剂, 得
淡棕色粉末。用醋酸乙酯2丙酮 (1∶1) 为溶剂, 进行
重结晶, 得白色针状结晶。
　　结晶熔点为 148～ 150 ℃, 易溶于水, 溶于甲醇、
乙醇, 在热醋酸乙酯、丙酮中溶解度较大, 放冷后析
出结晶, 难溶于乙醚、氯仿、吡啶等。E I2M S 数据与
文献报道一致[2 ]。经 H PL C 分析, 确定该晶体为京
尼平苷, 纯度为 9918%。
212　色谱条件: 色谱柱: K rom asil C18 (250 mm ×
416 mm , 5 Λm ) ; 流动相: 甲醇2水2冰醋酸 (33∶66∶
1) ; 体积流量: 110 mL öm in; 柱温: 40 ℃; 检测波长:
238 nm。
213　对照品溶液的制备: 精密称取京尼平苷对照品
适量, 加流动相制成 015 m gömL 的对照品溶液。
214　供试品溶液的制备[3 ]: 取干燥栀子仁粉末约
012 g, 置 50 mL 量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 超声处
理 20 m in, 放冷, 用甲醇补充至刻度, 摇匀, 静置。取
上清液滤过, 精密量取续滤液 5 mL , 置 10 mL 量瓶
中, 加流动相稀释至刻度, 摇匀, 即得。
215　系统适用性考察: 取供试品溶液依法测定, 记
录色谱图, 结果京尼平苷的保留时间为 519 m in, 对
称因子为 019～ 112, 理论板数大于 3 000, 与相邻峰
的分离度大于 115, 见图 1。
216　线性范围考察: 精密吸取京尼平苷对照品溶液
(015 m gömL ) 适量, 用流动相稀释制成质量浓度为
10、20、40、80、100、150、200 ΛgömL 的系列溶液, 分
别各精密吸取 10 ΛL 注入高效液相色谱仪, 在上述
色谱条件下测定。以质量浓度为横坐标, 色谱峰面积
为纵坐标绘制标准曲线, 其线性回归方程为: A =
7 97612 C + 2 43714, r= 01999 9, 线性范围为 10～
200 ΛgömL。
217　精密度考察: 精密吸取同一供试品溶液 10ΛL , 重复进样 6 次, 记录色谱图, 测定京尼平苷峰面
积, 计算得其R SD 为 0108%。
218　稳定性考察: 精密吸取同一供试品溶液 10ΛL , 在 0、1、2、4、8、12 h 进样, 记录色谱图, 测定京尼
12京尼平苷
12gen ipo side
图 1　京尼平苷对照品 (A)和江西产
栀子 (B)的 HPLC 图谱
F ig1 1　HPLC chromatogram s of gen iposide (A ) and
F ructus Ga rden iae from J iangx i Prov ince
平苷峰面积, 计算得其R SD 为 0129% (n= 6) , 结果
表明供试品溶液在 12 h 内稳定。
219　加样回收率试验: 精密称取已知含量的样品各
011 g, 分别加入高、中、低 3 种质量浓度的对照品溶
液适量, 进样测定, 结果平均回收率为 10212% ,
R SD 为 017%。
2110　样品中京尼平苷的测定: 分别精密吸取对照品
溶液、供试品溶液各 10 ΛL , 注入高效液相色谱仪, 记
录色谱图, 以峰面积按外标法计算。结果见表 1。
表 1　栀子中京尼平苷的含量测定结果
Table 1　Gen iposide in F ructus Ga rden iae
产　地 京尼平苷ö(m g·g- 1)
浙江宁波 36105
江西赣州 47138
江苏　　 9180
广西柳州 7120
广西　　 8188
广东　　 30195
江西　　 19188
江西吉水 17180
3　讨论
311　萃取溶剂的选择: 萃取时不同的萃取溶剂的性
质对萃取效果有显著影响, 通过实验证明以水饱和
的正丁醇作为萃取溶剂时实验效果最佳。
312　TL C 展开剂的选择: 曾试用醋酸乙酯2丙酮2甲
醇2水 (10∶612∶015) 为展开剂, 京尼平苷的斑点扩
散严重, 并时有拖尾现象, 而采用氯仿2甲醇 (5∶2)
展开时斑点较集中无明显扩散现象。
313　色谱条件的选择: 用京尼平苷测定的流动相有
乙腈2水、乙腈2水2磷酸、甲醇2水等多种系统[4 ] ,《中
华人民共和国药典》2000 年版一部栀子项下采用乙
腈2水 (15∶85) , 经考察以甲醇2水较佳, 当加入适量
冰醋酸可进一步改善峰形, 故采用甲醇2水2醋酸
·4521· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 11 期 2004 年 11 月
(33∶66∶1)。
References:
[ 1 ]　Yan Y H 1 Simp le separation m ethod of gen ipo side in Gard em ia
jasm inoid es E llis [J ]1 Ch in J P harm A na l (药物分析杂志) ,
1998, 4 (4) : 22722291
[ 2 ]　W ang B Q 1 Q uality S tand ard and S tand ard S ubstance of Ch i2 nese T rad itiona l P a ten tM ed icine (中成药质量标准与标准物质研究 ) [M ]1 Beijing: Ch ina M edico2Pharm aceu tical Scienceand T echno logy Pub lish ing House, 19861[ 3 ]　Ch P (中国药典) [S ]1 V o l É 1 20001[ 4 ]　Chen F K1 D eterm ina tion of A ctive Constituen ts in Comm onCh inese H erba l M ed icine (常用中草药有效成分含量测定)[M ]1 Beijing: Peop les M edical Pub lish ing House, 19971
HPLC 法定量分析熊胆中胆酸类化合物
朱丽玢1, 洪筱坤2Ξ
(11 军事医学科学院毒物药物研究所, 北京　100850; 21 上海中医药大学 化学教研室, 上海　201203)
　　国外常采用离子抑制色谱法[1, 2 ]和离子对色谱
法[3, 4 ]分别测定结合型胆酸和游离型胆酸来实现胆
酸类化合物的分离, 该方法无法一次性测定含胆酸
类物质中胆酸类化合物的种类和含量。在洗脱方式
上, 因为胆酸类化合物的UV 检测波长很低 (205
nm ) , 而洗脱剂又是在该波长下有一定吸收的乙腈、
甲醇等溶剂, 因而均采用等梯度洗脱, 这样就无法一
次性分离极性相差较大的结合型和游离型胆汁酸。
本实验建立了分离胆酸类化合物的双泵双比例反相
离子抑制高效液相色谱法, 效果良好。
1　仪器与材料
P—E series 200 pump , 235C 二极管阵列检测
器, 1022 p lu s 工作站。
　　乙腈 (H PL C 级) , 水为市售 Spak lin 纯蒸馏水,
其他试剂均为分析纯。胆酸 (CA )、脱氧胆酸
(DCA )、脱氢胆酸 (DHCA )、牛磺胆酸 (TCA )、牛磺
去氧胆酸 (TDCA )、鹅去氧胆酸 (CDCA )、牛磺鹅去
氧胆酸 (TCDCA )、牛磺熊去氧胆酸 (TUDCA ) 对照
品为 Sigm a 产品; 熊去氧胆酸 (UDCA ) 由上海医科
大学提供。
　　熊胆样品由国家中药制药工程技术研究中心提
供, 经叶愈青教授鉴定为熊科动物黑熊 S elena retos
th ibetanus Cuvier 的胆囊。
2　方法与结果
211　对照品溶液的配制: 精确称取CA、DCA、UD 2
CA、CDCA、DHCA、TCA、TDCA、TUDCA、TCD 2
CA 对照品适量, 用甲醇溶解, 配成浓度分别为 2
m gömL 的单个对照品溶液。再精确称取上述对照
品适量, 用甲醇溶解, 配成各组份浓度均为 2 m gö
mL 的混合对照品溶液。
212　供试品溶液的制备: 将熊胆风干后研成粉末
(密度约为 1 göcm 3) , 精确称取约 100 m g, 加 25 倍
体积的甲醇, 混合后超声 15 m in, 2 500 röm in 离心
10 m in, 吸取上清液置 10 mL 量瓶中, 重复 3 次, 补
充甲醇溶液至刻度, 进样前用 415 Λm 滤膜滤过, 取
续滤液, 即得。
213　流动相 pH 值的选择: 实验考察了在 pH
215～ 610 时混合对照品溶液的分离情况。结果表
明: 流动相的 pH 值对各组份的保留时间及分离度
的影响是至关重要的。随着流动相pH 值的降低, 分
离效率也越来越好。考虑到柱的承受能力, 本实验选
择流动相的 pH 值为 3。
214　缓冲溶液浓度的选择: 本实验考察了磷酸盐浓
度为 2～ 50 mmo löL 时混合对照品溶液的分离情
况。缓冲溶液浓度的增加提高了各组份的 K 值, 这
是由于流动相的离子强度增加的缘故。但各组份的
分离度并无明显改进, 为了避免不必要的麻烦 (柱的
堵塞) , 选用缓冲溶液的浓度为 5 mmo löL。
215　流动相组成比例对分离的影响: 首先考察了等
梯度分离时的情况。在乙腈含量为 60% 时, TDCA、
DHCA、CA、DCA、UDCA、CDCA 6 种组份得到分
离, 而 TCA、TUDCA、TCDCA 则混在一起出峰。当
乙腈含量为 25% 时, 先洗脱出柱的成分虽然可以分
开但极性小的成分由于保留时间过长而引起的区带
扩散导致峰形过宽, 甚至未见洗出。而试图采用梯度
洗脱时, 基线漂移严重。因而, 考虑采用分级洗脱方
式, 首先用低乙腈含量的洗脱剂分离极性大的组份,
再在适当的时候换上高乙腈含量的洗脱剂以使极性
·5521·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 11 期 2004 年 11 月
Ξ 收稿日期: 20042012253 通讯作者