全 文 ：References:
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五虎散质量标准的研究
毛彦杰1 ,岳　敏1 ,谷学新1* ,范国强2,段豫萍2,秦　晨2X
( 1. 首都师范大学 化学系, 北京　100037; 2. 北京同仁堂股份有限公司 科学研究所, 北京　100011)
摘　要: 目的　建立五虎散的质量标准。方法　采用 TLC 法对处方中当归、白芷、红花进行定性鉴别; 采用 HPLC
法测定升麻苷和 5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量。结果　升麻苷在 0. 370 0～1. 850 0 Lg, 5-O-甲基维斯阿米醇苷在
0. 191 0～0. 955 0 Lg 与峰面积具有良好的线性关系; 平均回收率分别为 100. 74%和 98. 33% , RSD 分别为 0. 67%
和 1. 91% ( n= 5)。结论　建立的方法简便、准确、可靠, 可作为控制该药品的质量标准。
关键词: 五虎散;升麻苷; 5-O-甲基维斯阿米醇苷; 质量标准;高效液相色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2004) 12 1354 03
Quality standard of Wuhu Powder
MAO Yan-jie
1 , YU E M in
1 , GU Xue-xin
1, FAN Guo-qiang
2 , DUAN Yu-ping
2, QIN Chen
2
( 1. Depar tment of Chemistr y , Capital Normal U niver sity , Beijing 100037, China; 2. Scientific Research
Institute o f Beijing Tong Ren Tang Co. , L td. , Beijing 100011, China )
Abstract: Obj ect　To establish the quality standard for Wuhu Powder. Methods　Radix Angelicae
Sinensis ( RAS) , Radix A ngel icae Dahuricae ( RAD) , and Flos Car thami ( FC ) w ere determined qualita-
tiv ely by TLC. T he content o f cim icifugo side and 5-O-methylv isamm io side w er e determined by HPLC. Re-
sults　T he linear ranges of cim icifugo side and 5-O-methy lvisamm ioside w er e 0. 370 0—1. 850 0 Lg and
0. 191 0—0. 955 0 Lg. T he recoveries w ere 100. 74% and 98. 33% , RSD were 0. 67% and 1. 91% ( n= 5) ,
respect iv ely . Conclusion 　T he method is simple, accur ate, cr edibility, w hich can be used as the quality
cont rol standard of Wuhu Powder.
Key words : Wuhu Powder ( a Chinese prescr ipt ion composed of FC, RAS, and RAD, etc. ) ; cim icifu-
goside; 5-O-methy lvisammioside; quality standar d; HPLC
　　由红花、当归、白芷等药材配伍而成的五虎散是
一种具有活血散瘀、消肿止痛等功效的中药,用于跌
打损伤,瘀血肿痛的治疗[ 1]。防风中的升麻苷和 5-
O-甲基维斯阿米醇苷具有较好的解热、镇痛、抗炎
消肿等生理活性[ 2]。为了有效地控制五虎散的质量,
本实验采用高效液相色谱法对处方中的升麻苷和
5-O-甲基维斯阿米醇苷进行测定,并对当归、白芷、
红花进行了薄层鉴别, 结果令人满意。
1　仪器与材料
Waters 高效液相色谱仪 ( Water s515高压泵,
Waters515 柱温箱, Waters717 自动进样器, Wa-
ters2996检测器)。
　　当归对照药材(批号: 927-200110)、白芷对照药
材 (批号: 945-9903)、红花对照药材 (批号: 907-
200006)、欧前胡素对照品(批号: 0826-200206)、异
欧前胡素对照品(批号: 0827-200105)、升麻苷对照
品(批号: 1522-200001, 含量测定用)和 5-O-甲基维
斯阿米醇苷对照品(批号: 1523-200001, 含量测定
用)购于中国药品生物制品检定所。五虎散由北京同
仁堂股份有限公司制药厂生产, 批号为 3100024、
3100025。甲醇为色谱级试剂, 其他试剂均为分析纯。
2　实验方法
2. 1　薄层色谱鉴别
2. 1. 1　当归、白芷的鉴别:取五虎散 3 g ,加无水乙
·1354· 中草药　Chinese T radit ional and Herbal Drugs　第 35 卷第 12 期 2004年 12 月
X 收稿日期: 2004-02-15作者简介:毛彦杰( 1977—) ,男,河北省张家口市人,首都师范大学分析化学专业研究生,从事中草药分析。
* 通讯作者　E-mail: Gu xuex in@ 263. net
1-当归对照药材　2～4-五虎散
　5-白芷对照药材　6-欧前胡素
对照品　7-异欧前胡素对照品
　1-RAS　2—4-Wuhu Pow der
　5-RAD　6-imperatorin
　7-isoimp eratorin
图 1　五虎散中当归、
白芷薄层鉴别
Fig. 1　TLC of RAS
and RAD in
Wuhu Powder
醇 10 mL, 超声处理 10
min, 静置,滤过,滤液浓
缩至约 1 mL, 作为供试
品溶液。另取当归、白芷
对照药材各 1 g , 分别同
法制成对照药材溶液。
另取欧前胡素、异欧前
胡素对照品, 加无水乙
醇制成 1 mg / mL 的溶
液,作为对照品溶液。照
薄层色谱法试验, 吸取
上述对照品、对照药材
溶液各 2 LL, 供试品溶
液 5 LL, 分别点于同一
硅胶 G 薄层板上, 以石
油醚( 60～90 ℃) -醋酸
乙酯( 4∶1) 为展开剂,
展开, 取出, 晾干。置紫
外光灯( 365 nm )下检视。供试品色谱中, 在与对照
药材色谱相应位置上, 显相同颜色的荧光斑点。在与
欧前胡素、异欧前胡素对照品色谱相应位置上, 显相
同颜色的荧光斑点,阴性无干扰。见图 1。
1-红花空白对照　 2～4-
五虎散　5-红花对照药材
　1-b lank solut ion
　2—4-Wuhu Pow der
　5-FC
图 2　五虎散中红花
薄层鉴别
Fig. 2　TLC of FC in
Wuhu Powder
2. 1. 2　红花的鉴别: 取五虎
散 3 g , 加 80%丙酮溶液 10
mL, 超声处理 10 min, 静置,
吸取上清液, 作为供试品溶
液。同法制备缺红花的空白对
照溶液。另取红花对照药材
0. 5 g, 同法制成对照药材溶
液。吸取上述 3 种溶液 10
LL,分别点于同一硅胶 G 薄
层板上, 以醋酸乙酯-甲酸-
水-甲醇( 7∶2∶3∶0. 4)为展
开剂,展开,取出, 晾干。供试
品色谱中,在与对照药材色谱
相应位置上, 显相同颜色的斑
点,阴性无干扰。见图 2。
2. 2　含量测定
2. 2. 1　色谱条件: 色谱柱: Zorbax SB-C18 ( 150
mm×4. 6 mm , 5 Lm) ;流动相: 甲醇-水( 38∶62) ;体
积流量: 1 mL/ min;检测波长: 254 nm;柱温: 35 ℃。
在上述条件下,升麻苷和 5-O-甲基维斯阿米醇苷与
其他组份均能达到基线分离,升麻苷和 5-O-甲基维
斯阿米醇苷出峰位置分别在 6. 0 min 和 17. 7 min
左右(图 3)。
1-升麻苷　2-5-O-甲基维斯阿米醇苷
1-cimicifugoside　2-5-O-methylvis amm ios ide
　　图 3　混合对照品(A)、五虎散( B)和缺防风的
阴性对照(C)的 HPLC图
Fig. 3　HPLC chromatog rams of mixed reference
substances ( A) , Wuhu Powder ( B) ,
and negat ive sample without
Radix Saposhnikoviae (C)
2. 2. 2　对照品溶液的制备:精密称取 110℃干燥至
恒重的升麻苷及 5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适
量,精密称定,各加入甲醇制成含升麻苷 0. 370 mg /
mL 及 5-O-甲基维斯阿米醇苷 0. 191 mg/ mL 的
溶液。
2. 2. 3　供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品
3 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇 25
mL, 密塞, 称定质量,超声处理(功率 100 W , 频率
40 kHz) 45 min,取出,放冷, 再称定质量, 用甲醇补
足减失的质量,摇匀,用微孔滤膜( 0. 45 Lm)滤过,
取续滤液,即得。
2. 2. 4　线性关系考察:精密吸取升麻苷对照品溶液
( 0. 370 mg / mL) 1、2、3、4、5 mL,分别置 10 mL 量
瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,按上述色谱条件, 分
别精密吸取10 LL,注入液相色谱仪测定峰面积。以
进样量为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线,
得回归方程: Y = 881 550. 10 X - 10 439. 26, r =
0. 999 95。结果表明, 升麻苷在0. 370 0～1. 850 0 Lg
与峰面积具有良好的线性关系。
　　精密吸取 5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液
·1355·中草药　Chinese T radit ional and Herbal Drugs　第 35 卷第 12 期 2004年 12 月
( 0. 191 mg / mL) 1、2、3、4、5 mL, 分别置 10 mL 量
瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀, 按上述色谱条件,分
别精密吸取 10 LL,注入液相色谱仪测定峰面积。以
对照品进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标
准曲线, 计算得回归方程: Y = 2 086 267 X -
12 881. 00, r= 0. 999 97。结果表明, 5-O-甲基维斯
阿米醇苷在 0. 191 0～0. 955 0 Lg 与峰面积具有良
好的线性关系。
2. 2. 5　精密度试验:精密吸取升麻苷( 0. 011 mg/
mL)、5-O-甲基维斯阿米醇苷( 0. 057 3 mg / mL)对
照品溶液 10 LL,重复进样 5次, 计算得升麻苷峰面
积的 RSD 为 0. 21% , 5-O-甲基维斯阿米醇苷峰面
积的RSD为 0. 07%。
2. 2. 6　稳定性试验: 取同一供试品溶液 (批号:
3100026) ,分别于配制后 0、2、4、8、12、24 h 依法测
定峰面积,结果表明, 供试品溶液在 24 h 内基本稳
定,升麻苷峰面积的 RSD为 0. 32% , 5-O-甲基维斯
阿米醇苷峰面积的 RSD为 0. 99%。
2. 2. 7　重现性试验: 精密称取同一批号 (批号:
3100026)五虎散样品 5份,制备供试品溶液按上述
方法测定峰面积, 计算得升麻苷和 5-O-甲基维斯阿
米醇苷的质量分数分别为 0. 90、0. 51 mg/ g , RSD
分别为 1. 72%、1. 28% ( n= 5)。
2. 2. 8　回收率试验:采用加样回收法。精密称取已
知含量的同一批号 (批号: 3100026, 含升麻苷
0. 898 8 mg / g, 5-O-甲基维斯阿米醇苷0. 512 2 mg/
g ) 1. 5 g, 分别精密加入 0. 321 6 mg / mL 升麻苷对
照品溶液、0. 222 4 mg / mL 5-O-甲基维斯阿米醇苷
对照品溶液各 4 mL,平行测定, 按上述供试品溶液
的制备方法及色谱条件进行测定, 结果升麻苷的平
均回收率为 100. 74% , RSD= 0. 67%, 5-O-甲基维
斯阿米醇苷的平均回收率为 98. 33%, RSD =
1. 91%。
2. 2. 9　样品测定结果:分别精密吸取对照品溶液与
供试品溶液各 10 LL,注入液相色谱仪,测定结果见
表 1。
表 1　五虎散中升麻苷和 5-O-甲基维斯
阿米醇苷的测定结果 ( n= 4)
Table 1　Determination of cimicifugoside and 5-O-methyl-
risammioside in Wuhu Powder ( n= 4)
批号 升麻苷/ ( mg·g- 1) 5-O-甲基维斯阿米醇苷/ ( m g·g- 1)
3100024 0. 91 0. 53
3100025 0. 91 0. 51
3　讨论
3. 1　五虎散中当归、白芷和红花的定性鉴别, 采用
T LC法,并分别与各自的阴性对照液进行了对照试
验, 结果没有干扰, 斑点明显, 专属性好, 收到良好
效果。
3. 2　按照《中华人民共和国药典》2000年版一部红
花薄层鉴别方法中的硅胶 H 薄层板进行试验时, 发
现硅胶 H 薄层板展开速度极慢,后改用青岛产硅胶
G 薄层板进行试验,通过对阴性及 3批样品的试验
观察,阴性无干扰,并且节约展开时间 10 min左右。
3. 3　超声时间的选择:取本品装量差异项下的内容
物 3 g 4份, 按照 2. 2. 3项下方法处理,分别超声处
理15、30、45、60 min,测定。结果表明,超声处理45、
60 m in提取效果相差不大, 故选择超声提取时间为
45 m in。
3. 4　空白试验:按处方药味的比例, 自配不含防风
的群药,按其工艺制成空白制剂,按供试品溶液制备
方法制成空白溶液, 在上述色谱条件下测定, 结果空
白溶液在与对照品相同保留时间处未出现色谱峰,
故认为无干扰。
3. 5　采用高效液相色谱法同时测定五虎散中升麻
苷和 5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量, 处理方法简
单, 所测结果重现性、精密度好,适用于多种中药组
份配伍使用的升麻苷和 5-O-甲基维斯阿米醇苷的
定量分析。
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《中草药》杂志被确认为允许刊载处方药广告的第一批医药专业媒体
　　据国家药品监督管理局、国家工商行政管理局和国家新闻出版总署发布的通知, 《中草药》杂志作为第一批医
药专业媒体,允许发布“粉针剂、大输液类和已经正式发文明确必须凭医生处方才能销售、购买和使用的品种以及
抗生素类的处方药”广告。
电话: ( 022) 27474913　23006821　　传真: 23006821　　联系人:陈常青
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