全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36眷第10期2005年10月
丹皮多糖2b主要成分的相对分子质量的测定
刘长安，赵帜平，沈业寿4，戴玲
安徽大学生命科学学院糖复合物与糖工程实验室，安徽台肥230039)
摘要：目的测定丹皮多糖2b(PSMn)主要成分的相对分子质量，为建立对照品的标准提供依据。方法PSM“
经Sepharose413枉分离，冷冻干燥后得到丹皮多糖的两个成分PSM¨，n和PSM：u小采用HpLC法检泓均一性和相
对分子质量；并分别以0．7“Na：SO，溶液和超纯水作为流动相进行比较。结果PSMtn一为均一性的糖蛋白，是
PSMn的主要成分。流动相为0．7％Na。SO，溶液时，其相对分子质量为3．5962×105，分散度指数(D)为4．15。流
动相为超纯水时，其相对分f质量为4．758×105，分散度指数为1．03。结论采用HI’I。C法测定丹皮多糖主要成
分的相对分子质量时．不同流动相测定的结果有差异．流动相采用超纯水比07％Na：SO。溶液更为适台。
关键词：丹皮多糖2b；高效液相色谱I相对分子质量
中国分类号：R284．11R286．02 文献标识码：A 文章鳙号：0253—2670t2005)10—147703
Determinationofrelativemolecularweightinpolysaccharjde一2bofmoutan(PSM2b)
I．1UChangan，ZHA()Zhi—ping，SHENYe—shou．DAILing
(Laboratoryof(；IycoconJugatesandGlycutechno【ogy．School()fLife ience．AnhuiUniversity，Hefei230039，China)
Abstract：ObjectiveTodeterminetherelativemolecularweight(M，)ofpolysaceharide一2bofmoutan
(PSM2¨)toes ablishthetandardof eferencesubstance．MethodsPSM2bwaseparatedbyaSepharose
4BcolumnandthenPSM?h。^andPSM2bDwereobtainedaftercryodesicca“on．ThenHPI，Cwasusedto
determinetheirM，．Ultrapurewat rwasusedasmobilephasetocomparewith0．7％Na2S04solution．
ResultsPSM¨．^V,rO．Spure．TheMandpolydispersity(D)ofPSM¨．^obtainedbyuseofdextranas
standardwere3．5962×10
5
and4．15i110．7％NatSO^solutionphase，respectively，andinultrapurewater
phasetheM，andDwere4．7585×105and1．03，respectively+ConelusionDIffcrentsultsaredetected
bydifferentmobilephasesindeterminationofMrandDofPSM曲AbyHPI，C．Andtheultrapurewateras
mobilephaseismoresuitablethan0．7％Na2SO。solution．
Keywords：polysaccharideofmoutan(PSM扑)；HPJ，C；relativemo]ecularweight(尬)
丹皮为芍药科牡丹PaeomasuJfruticosaAndr．
的干燥根皮，具有清热凉血、活血祛瘀的功效。常见
于降糖复方中。以丹皮为原料制取的丹皮多糖2b
(polysaccharides2bofmoutan，PSM¨)系降血糖
活性有效部位，具有明显降低葡萄糖和四氧嘧啶诱
发的鼠高血糖，降低糖化血红蛋白，升高SOD和载
脂蛋白A。水平，改善氢化可的松琥珀酸钠诱导的
胰岛素抵抗。可降低Ⅱ型糖尿病大鼠空腹血糖，改善
葡萄糖耐量异常及衄脂异常，提高肝细胞膜低亲和
力，胰岛素受体最大结合容量及胰岛素敏感性指数
等作用“。]。本研究对PSMn进一步的分离并测定其
主要成分的相对分子质量M，及其分布．为开发降
血糖药物，建立其对照晶标准提供依据。
1仪器和试药
Uhrospec3100紫外一可见光扫描仪，瑞典
Pharmac[aBiotech；Alphal2冷冻干燥机，德国
Christ；Waters高效液相色谱系统：515HPI。C
Pump，410 RefractivelndexDeteetor，
UitrahydraGel“500柱(300ntm×7，85mm)，
Millennium”software(版本3．05．01)；Milli—Qplus
超纯水仪，美国Millipore；标准葡聚糖DextranT
系列为Pharmaeia产品：T一500(皿4500 0)、T一100
(M11000)、T70(M。68000)、T一40(M，44
000)、T一10(尬儿000)；Sepharose4B，瑞典
pharmacia产品；PSMⅢ安徽大学生命科学学院糖
复合物与糖工程实验室提供；其他试剂均为国产分
收稿日期：2001119
基金颐目，国家自然科学基金资助项日(30840066)；安徽省“十五”重大科技专项綦盒资助项目(0180301I)l安徽省自然科学基金资助
项It(0304330t)
作者简介：刘长安(198{1一)．男，安徽六爱人．硼土研究生，主要从事多糖类的生物化学、分子生物学研究匣天然药物开发。
E—mail；jiuca8009@yahoo．COITI“n
*通讯作者沈业寿Tel；(0551)5107574E—mail：shysh@ahuedu，cn
万方数据
·1478· 中草药ChineseTrgditionalandHerbalDrugs第36卷第lo期2005年10月
析纯。
2方法和结果
2．1 PSM。。的分离纯化及其主要成分的制备：将
PSMn用蒸馏水配制成20rag／ml，溶液。取1mI。上
Sepharose4B柱(96cm×2cm)。水洗脱，体积流量
为12mI。／h。苯酚一硫酸显色，在490nm波长下比色
检测洗脱液。合并各洗脱峰液，冷冻干燥得两种成
分，分别命名为PSM。¨和PSMm。洗脱曲线见图
1。可见，PSM。b经Sepharose4B柱分离后有两个洗
脱峰，分别冷冻干燥后其平均得率：PSMmn为
29．13％，PSM2bB为13．78％。
型
簧
掣
0 50 100 】50 200 250 300
洗脱作@{／mL
暖l PSM：b经过Sepharose4B柱分离的洗脱曲线
Fig．1ElutioncurveofPSMnseparated
bySepharose4Bcolumn
2．2色谱条件及相对分子质量标准曲线的制作：采
用HPLC法，先用标准葡聚糖DextranT系列标准
品制作相对分子质量标准曲线，然后根据样品在相
同色谱条件下的保留时间(k)，从标准曲线上求出
样品的相对分子质量。
色谱条件：流动相分别为0．7％NazSOt溶液01
和超纯水。以0．7％Na：SO。溶液为流动相时体积流
量为1．0mL／mln，以超纯水为流动相时体积流量
为0．6mL／min。柱温为(30±0．1)C，进样量为
lo“I，。示差折光检测。
将5个标准葡聚糖用流动相溶解配成5rag／
mI，溶液并用0．22”m漶膜滤过。分别取10pL注
入液相色谱仪，记录色谱图和保留时间h。以tn为
横坐标，lgM。为纵坐标作图。得到相对分子质量标
准曲线图和回归方程。各标准葡聚糖在两种流动相
中的保留时间(“)见表1。以0．7％NazSO。溶液为
流动相得回归方程为lgM,=tO．1235—0．6985tn，
r=0．9989}以超纯水为流动相得回归方程lgMr；
7．6007—0．2258tR．r一0．9965。表明在本实验的
两种流动相条件下，标准葡聚糖相对分子质量在1×
104～5×10t时，其保留时间与其相对分子质量对数
均呈良好线性关系。
寰l各标准葡聚精的HPLC保留时间
TableHPLCretentionmeofstandarddextran
2．3 PSMm．和PSM。¨的均一性及相对分子质量
测定：称取6个批号的PSM2bn和PSM2b．u适量，分别
用两种流动相溶解，配成lmg／mI。的溶液。取lo
pL注入液相色谱仪，记录色谱图和保留时间。重均
分子量(Mw)和数均分子量(肘。)，分散度指数(D)由
GPC软件按下式计算：
腻：∑(RI。×M)／∑RI，
MP∑RI．／∑(RI．／M)
D—Mr／M,
孟中RI，为保留时间I的峰高；肘．为保留时闻I的相对
分于质量．可由标准曲线查得。
PSM。bIA和PSM。n，，在两种流动相中的HPI。c分
析结果见图2和图3。PSM。一6次上样的平均保留
时间在水作流动相为7．229min．在0．7％Na：SOt
作流动相为8．604min。PSMnm6次上样的平均保
留时间在水作流动相为9．403min，在0．7％
Na：SO。作流动相为16．391min。测得的M，、％、
^t。。(峰尖相对分子质量)及D值见表2。
2 4 6 8 Iu 12 14 2 4 6 8 10 12 14
，／mIll
圈2超纯水(A)和0．7％NajSO。(B)为流
动相的PSM2k^的HPLC阳请
Fig．2HPLCehromatogramsofPSMn．^elutedhy
ultrapurewater(A)and0．7NNa2S04(B)
3讨论
PSMm．经两种不同流动相洗脱，都呈单一对称
峰型。可认为其为均一性成分。PSMzb、B以0．7％
Na：SO。溶液作流动相时，呈一峰型，而以超纯水作
∽
㈨
∽
帅
万方数据
中草药ChineseTraditions[andHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月·1479·
圈3超纯水(A)和0，7％Na3S04(B)为流
动相的PSMmB的HPLC圈谱
Fig．3HPLCehromatogramotPSM；b．Belutedby
ultrapurewater(A)and0．7％Na2SO‘(B)
寰2 PSM：¨和PSM：n·的相对分子质量、数均分子质量
峰尖相对分子质量及分散度指数
Table2 M，，帆，肘㈣andDofPSM2h^andPSM2kB
流动相时，并不是单一峰型，故PSMmn的均一性尚
不能确定。从分离纯化的得率看，PSMmn约为
PSM¨n的2．1倍，故将PSMzbA看作是PSM2b的主
要成分。
HPLC法测定PSMn．n的相对分子质量时，在不
同流动相中的色谱图有所差别。PSMzb，A在水相中的
峰型对称且峰型较窄，分散度指数接近1。但以
0．7％Na。SO；溶液作流动相时，峰型虽较对称，但
谱峰较宽，分散度指数较大。同时，在测定PSM。be
时，在超纯水作流动相时，能分出杂质峰，而以
O．7蛎Na。SO。溶液作为流动相时不能分离出杂质
峰。从实验结果来看，采用超纯水作为流动相比用稀
盐溶液更适合。
PSM。。。为含蛋白质的酸性多糖口]。有报道认
为，酸性多糖在稀浓度的盐溶液中其构象相对紧密，
在水溶液中相对舒展n]，故通常采用稀盐溶液作流
动相来测定其相对分子质量。同时国家药典口3中测
定右旋糖酐时采用0．7％Na。SO。溶液作为流动相。
但是本实验发现与此不同。推测PSM¨在水溶液
中可能呈现一种有规则的空问结构，而在稀盐溶液
中，由于离子的作用，干扰了次级键的形成，使其构
象相对舒展．分散度增加。此外．我们还用相同离子
强度的PBS、NaCI、PBS+NaCI溶液作为流动相进
行了测定，结果和以0．7％Na。SO。溶液作流动相时
相近。由于多糖的结构和构象的差异，采用HPl。C
测定其均一性和相对分子质量时，流动相的选择应
有不同。
PSMmn的相对分子质量测定时，以超纯水作为
流动相比用0．7％Na：SO。溶液作流动相测得的
M，、M。及M。。“要大。可能是由于所采用的标准品是
中性多糖的原因。有研究表明，以中性多糖(如
dextran)和酸性多糖(如肝素)5t-别作为标准品测得
同一酸性多糖相对分子质量，前者比后者大得多”]。
有关选用不同对照品测定丹皮多糖2b主要成
分PSMn“相对分子质量及其降血糖生理活性等研
究工作正在进行中。
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万方数据
丹皮多糖2b主要成分的相对分子质量的测定
作者： 刘长安， 赵帜平， 沈业寿， 戴玲， LIU Chang-an， ZHAO Zhi-ping， SHEN Ye-shou，
DAI Ling
作者单位： 安徽大学生命科学学院,糖复合物与糖工程实验室,安徽,合肥,230039
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(10)
被引用次数： 1次

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引证文献(1条)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200510015.aspx