全 文 ：暴露第一颈椎翼状孔 ,电灼烧凝固双侧翼小孔内的
锥动脉 ,造成永久性闭塞 ; 24 h后乙醚浅麻醉 ,切开
腹侧颈中皮肤 ,分离双侧颈总动脉 ,用动脉夹可逆性
夹闭双侧颈总动脉 5 min,缺血共 3次 ,每次间隔 1
h。术后饲养 4周。进行灌注固定并取材切片。 GP
200 mg /kg给药组 , ig给药 1周后 ,按照大鼠血管
性痴呆模型的制备方法进行手术 ,术后饲养 4周并
观察。 伪手术对照组: 同样进行手术但不灼烧锥动
脉 ,不夹闭颈总动脉 ,术后饲养 4周。
2. 2　取材和切片:取上述各组大鼠 , ip戊巴比妥钠
40 mg /kg麻醉固定后 ,于 30～ 40 min内 ,从左心室
快速依次灌注生理盐水 100～ 150 m L, 4% 多聚甲
醛 500 mL ( 4℃ )。迅速取脑 ,置 4℃ 的同样的固定
液中固定 7～ 9 h后 ,移入 20% 蔗糖溶液中浸泡 12
h以上 ,以恒冷箱冰冻切片机切片 (片厚 50μm) ,
pH 7. 4的 0. 01 mol /L PBS接片 ,进行吖啶橙染
色 [2 ] ,荧光显微镜下观察结果并拍照。
3　结果
在荧光显微镜下 (彩图见封 3) ,对照组大脑皮
层及海马 CA1区及 CA3区 DNA和 RNA呈黄绿
色 ,均匀分布于大脑皮层的细胞层和海马锥体细胞
层 (图 1-1～ 3) ;血管性痴呆模型大脑皮层和海马
CA1区及 CA3区的 DNA和 RNA荧光反应强度
(反映 DNA和 RNA含量 )明显减低 (图 1-4～ 6) ;
GP ( 200 mg /kg ) 给药组大脑皮层和海马 CA1区、
CA3区的 DNA和 RNA荧光反应强度较血管性痴
呆模型组明显增强 (图 1-7～ 9) ,与对照组反应强度
和分布模型基本相同。
4　讨论
已有研究表明 , GP对大鼠全脑缺血再灌注损
伤及家兔急性不完全性脑缺血具有保护作用 ,认为
GP对缺血脑组织的保护作用不仅与其抑制自由基
的产生和脂质过氧化有关 ,而且与其对缺血脑组织
的神经细胞膜及微血管的稳定性的保护作用相
关 [3 ]。此外 ,尚有报道 , GP对老龄大鼠学习记忆有
改善作用 [4 ] ,此作用可能与 GP清除氧自由基有关。
脑缺血 /再灌注可导致神经元凋亡或坏死 ,进而
引起痴呆、学习记忆能力下降。 而 DNA梯 ( DN A
laddering ) 的形成是神经元凋亡的重要特征之一。
缺血可使胞浆内钙离子增多 ,激活钙 /镁依赖的核苷
酸内切酶 ,将 DNA切割成许多大小不一的寡核苷
酸片段。 在中枢神经系统中 ,大脑皮层、海马等部位
是缺血易损区 ,实验结果显示大脑皮层及海马 CA1
区、 CA3区锥体细胞层 DNA和 RNA荧光反应强度
明显减低 ,表明该区神经元 DNA及 RNA受到缺
血性损伤。已有研究表明 ,随着缺血时间的延长 ,可
能有诱导型一氧化氮合酶 ( iN OS)的激活 ,从而产
生大量具有神经毒性作用的 NO,在海马迟发性神
经元凋亡以至 VD的形成中发挥了一定作用 [5 ]。
DNA及 RNA与蛋白质的合成密切相关 ,此作用的
机制及其与 GP抗衰老、改善学习记忆及对血管性
痴呆保护作用的关系 ,有待于进一步研究。
参考文献:
[1 ]　许丹芸 ,游国雄 ,苗建亭 ,等 . 脑缺血及血管性痴呆形成过程中
一氧化氮机制的实验研究 [ J ] . 中华老年医学杂志 , 1999, 18
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[2 ]　鄂　征 .组织培养技术 [M ]. 北京:人民卫生出版社 , 1988.
[3 ]　王竹筠 ,邱培伦 . 绞股蓝总皂甙对家兔急性不完全性缺血的保
护作用 [ J] .中国药理学与毒理学杂志 , 1992, 6( 3): 204-206.
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改善作用 [ J ]. 中国老年学杂志 , 1995, 15( 6): 359-361.
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油菜吲哚硫苷降解物对 S180小鼠抗肿瘤作用的实验研究
文碧玲 1 ,李培武 2 ,李航森 1 ,赵　力 1 ,余　萍 1 ,邹俊清 1 ,张　文 1 ,丁小霞 2 ,杨　湄 2 ,汪雪芳 2 ,吴　渝2
( 1. 湖北中医学院附院 ,湖北 武汉　 430061; 2. 中国农业科学院油料作物研究所 ,湖北 武汉　 430062)
摘　要: 目的　探讨油菜资源中吲哚硫苷降解物对肿瘤的抑制作用及对免疫功能的影响。 方法　分别将两种不同
提取法制备的高、低浓度的吲哚硫苷对 S180小鼠 ig给药 , ip环磷酰胺。结果　吲哚硫苷降解物 2号高浓度和吲哚硫
苷降解物 1号低浓度治疗组与生理盐水对照组相比有明显的抑制作用 ,能增加淋巴细胞转化率。 结论　吲哚硫苷
·331·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
收稿日期: 2001-08-08基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 39770452)作者简介:文碧玲 ( 1962-) ,女 ,副主任医师 ,主要从事中医药临床和实验研究 ,现为此项课题组主要成员之一。
降解物可能是通过增强机体免疫功能来抑制移植性肿瘤生长 ,起到抗肿瘤的作用。
关键词: 吲哚硫苷 ; S180;抗肿瘤作用
中图分类号: R286. 91　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 04 0331 03
Studies on antitumor effect of INDL-GLN in rape on mice transplanted S180 cell
WEN Bi-ling
1 , L I Pei-wu
2 , LI Hang-sen
1 , ZHAO Li
1 , YU Ping
1 , ZO U Jun-qing
1 ,
ZHANG Wen
1
, DIN G Xiao-xia
2
, YAN G Mei
2
, WANG Xue-fang
2
, WU Yu
2
( 1. Affiliated Hospital of Hubei Colleg e of TCM , Wuhan Hubei 430061, China;
2. Oil Crops Research Institute of Chinese Academy o f Ag riculture Sciences, Wuhan Hubei 430062, China )
Abstract: Object　 To study the anti tumo r and immuno logical effect of IN DL-GLN in rape on the can-
cerous mice t ransplanted S180 cell. Methods　 The treatment g roup w as administ ra ted ( ig ) IN DL-GLN at
tw o doses ( high and low dose) , cont rol g roup w as administ ra ted ( ip) cy clophophamide. The mechanism of
i ts anti tumo r action was assessed by lymphocyte convertion test. Results　 Both high ( No. 2) and low
( No. 1) doses of IN DL-GLN exhibi ted significant anti tumo r ef fects as compared w ith the control g roup,
the lymphocy te convertion ra te was increased, respectiv ely. Conclusion　 IN DLO-GLN has g reat antitu-
mo r activi ty and immunostimula tion, i ts anti tumo r mechanism may be due to it s immunostimulation.
Key words: IN DL-GLN; S180; anti tumor ef fect
　　吲哚硫苷是油菜中的一类芳香族硫代葡萄糖
苷 ,国内外学者近几年的研究表明 ,吲哚硫苷可提高
小鼠抗癌能力。本研究以动物实验探讨了两种高、低
浓度的吲哚硫苷降解物抗肿瘤作用及对免疫功能的
影响。
1　实验材料
1. 1　动物: BALB /C小鼠 120只 ,雌雄皆用 ,体重
20～ 25 g ,由湖北省医学科学院动物中心提供 ,符合
三级实验动物质量标准。
1. 2　药物和试剂: 吲哚硫苷降解物 ( INDL-GLN )
由中国农业科学院油料作物研究所从油菜籽中分离
制备 ,分别得到 INDL-GLN 1号和 2号 ,采用高效
毛细管电泳仪分离检测 [1 ]含量分别为 108和 720
mg /kg。用双蒸水制成 50% 和 25% 的两种高、低浓
度 ,用于动物试验。环磷酰胺 ( C TX) ,上海华联制药
公司生产 ,批号 00824;植物血凝素 ( PHA) ,上海市
医学化验所产品 ,批号 00903。
1. 3　细胞株和动物移植性肿瘤: S180由湖北省肿瘤
研究所提供 ,湖北中医学院附院肿瘤研究所传代 ,实
验时在无菌条件下用生理盐水稀释成癌细胞悬液 ,
浓度为 1× 107 /mL。
2　方法和结果
2. 1　吲哚硫苷降解物抗肿瘤作用
2. 1. 1　吲哚硫苷降解物对 S180小鼠瘤重、胸腺重和
抑瘤率的影响: 小鼠右腋窝 sc S180癌细胞悬液 0. 2
m L,次日动物随机分组 ,雌雄兼有 ,每天分别灌服 1
号 50% INDL-GLN ( 54 mg /kg ) , 1号 25% INDL-
GLN ( 27 mg /kg ) , 2号 50% INDL-GLN ( 360 mg /
kg ) , 2号 25% INDL-GLN ( 180 mg /kg ) ,设生理盐
水空白对照组 25 mL /kg ,连续 15 d,设 CTX阳性
对照组 ( 20 mg /kg , ip, 隔日 1次 ) ,第 16天处死 ,
称体重 ,剥瘤和胸腺 ,称重 ,计算抑瘤率 [2 ]。
肿瘤抑制率 (% )= 对照组平均瘤重 - 给药组平均瘤重对照组平均瘤重 × 100%
结果显示: 治疗组 1号 50% INDL-GLN抑制
率为 35% , 1号 25% INDL-GLN抑制率 59% , 2号
50% IN DL-GLN抑制率为 71% , 2号 25% IN DL-
GLN抑制率为 43% ,见表 1。
表 1　吲哚硫苷降解物对小鼠 S180瘤重、
胸腺重和抑瘤率的影响
组　别 动物数
(只 )
剂量
(mg /kg)
瘤重
( g)
胸腺重
( mg )
抑瘤率
(% )
生理盐水对照 10 - 1. 22± 0. 33 0. 026± 0. 019
CTX阳性对照 10 20 0. 83± 0. 23 0. 023± 0. 0079 32
1号 50% INDL-GLN 10 54 0. 76± 0. 39 0. 024± 0. 0049 35
1号 25% INDL-GLN 10 27 0. 50± 0. 32 0. 031± 0. 012 59*
2号 50% INDL-GLN 10 360 0. 36± 0. 17 0. 025± 0. 0065 71* *
2号 25% INDL-GLN 10 180 0. 69± 0. 33 0. 033± 0. 017 43*
　　与 CTX组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
2. 1. 2　吲哚硫苷降解物对肿瘤组织形态的影响: 剥
瘤后取组织 ,用 4% 甲醛溶液固定 ,常规石蜡切片 ,
肉眼和镜下观察组织病理学形态改变。 肉眼观察 , 2
号 50% IN DL-GLN治疗组的瘤体小 ,呈乳白色 ,质
地较硬 ,比较光滑 ,干燥 ;生理盐水组 ,瘤体边界不
清 ,如豆腐渣 ,与周围组织粘连紧 ,不易剥离。镜下结
果 , 2号 50% 和 1号 25% INDL-GLN治疗组和对
照组比较 [3 ] ,肿瘤组织细胞变性坏死 ,瘤细胞数明显
减少 ,肿瘤组织边缘整齐 ,可见淋巴细胞浸润。
·332· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
2. 2　吲哚硫苷降解物对小鼠免疫功能的影响: 给小
鼠右腋窝 sc S180癌细胞悬液 0. 2 mL,分组及给药方
法同 2. 1. 1,连续 6 d,第 7天开始给每只小鼠 im
PHA 6 mg /kg ,连续 3 d,第 10天由小鼠尾静脉取
血推片 ,瑞氏染色 ,显微镜下数 100个淋巴细胞 ,淋
巴母细胞及过渡态细胞数 ,计算淋巴细胞转化率 [4 ]。
结果表明 , 2号 50% INDL-GLN 和 1 号 25%
IN DL-GLN治疗组与生理盐水组相比 ,有极显著性
差异 (P < 0. 01) ,而 CTX组与生理盐水组比较 ,无
明显差异 ( P> 0. 05) ,见表 2。
表 2　吲哚硫苷降解物对 S180小鼠的
淋巴细胞转化率的影响 (x± s)
组别 动物数
(只 )
剂量
( mg /kg )
淋巴细胞转化率
(% )
1号 25% INDL-GLN 10 27 37. 00± 4. 80* *
1号 50% INDL-GLN 10 54 32. 40± 5. 10
2号 25% INDL-GLN 10 180 30. 10± 3. 70
2号 50% INDL-GLN 10 360 40. 50± 6. 20* *
CTX 10 20 9. 80± 2. 60
生理盐水 10 - 29. 00± 5. 30
　　与生理盐水组比较: * * P < 0. 01
3　讨论
油菜是白花菜目十字花科中我国种植面积最大
的油料作物 ,吲哚类硫苷是油菜籽硫苷中的重要组
成部分。自 1974年加拿大育出第一双低油菜品种 ,
世界各国油菜育种家致力于降低油菜籽中硫苷含量
研究 ,并选育出适于不同生态种植的双低油菜品种。
研究发现这些双低油菜品种降低的硫苷含量主要是
脂肪族硫苷 ,而吲哚类硫苷含量保持相对稳定。本研
究采用从双低油菜籽中提取的吲哚类硫苷进行试
验 ,结果 2号 50% 吲哚硫苷降解物治疗组抑瘤率
71% , 1号 25% 吲哚硫苷降解物治疗组抑瘤率
59% ,从组织形态学上观察 ,吲哚硫苷治疗组与生理
盐水空白组相比 ,有明显的抑瘤作用 ,同时能提高淋
巴细胞转化率 ,说明吲哚硫苷降解物能抑制移植性
肿瘤的生长 ,具有抗肿瘤的作用 [5 ] ,其机制可能是通
过增强机体免疫力来实现的 ,而两种不同提取法制
备的高、低浓度的吲哚硫苷其抗肿瘤作用不同 ,可能
与吲哚硫苷纯度所含杂质成分有关 ,有待进一步的
深入研究。
参考文献:
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[ 5 ]　 Yannai S, Bradlow H L. International Euro Food Tox Ⅲ .
[M ]. Olsz tyn Poland, 1994.
四逆汤有效成分不同组合抗心肌缺血再灌注损伤的作用研究
孙慧兰 ,吴伟康
(中山大学中西医结合研究所 ,广东 广州　 510080)
摘　要: 目的　考察四逆汤有效成分不同组合抗心肌缺血再灌注损伤的作用。方法　采用正交试验法 ,以超氧化物
歧化酶 ( SOD)、丙二醛 ( MDA) 以及乳酸为指标 ,考察附子生物碱 ( A)、干姜挥发油 ( B)、甘草酸粗品 ( C) 3个因
素。 结果　 3种有效成分最佳剂量为 A4B4C4 , 3因素对 SOD和 M DA影响大小顺序为 A> C> B,对乳酸影响大小
顺序为 A> B> C。结论　 3种有效成分临床极量组合的疗效最佳。附子生物碱是四逆汤有效成分组合中的关键因
素 ,干姜挥发油和甘草酸粗品也是组方中不可或缺的因素。
关键词: 四逆汤 ;有效成分 ;心肌缺血再灌注 ;正交设计
中图分类号: R286. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 04 0333 04
·333·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
收稿日期: 2000-10-11基金项目:中山大学“ 211工程”重点建设项目 ( 98176) ; 广东省中医药管理局科研基金项目 ( 100118)作者简介:孙惠兰 ( 1972-) ,女 ,山西太原人 , 1995年本科毕业于山西中医学院临床专业 , 1997年硕士毕业于湖南中医药研究院中医内科专业 , 1997～ 1999年在山西中医药研究院中心实验室从事中药新药的开发工作 ,现为中山大学中西医结合研究所在读博士生 ,导师吴伟康教授 ,主要从事中西医结合心血管病理生理学研究 , Tel: 020-87331624　 E-mail: h jjlosh l@ 263. com