全 文 ：·1332· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
2．8加样回收率试验：精密称取约6．0mg含莪术
醇0．0404mg／mL的样品3份，置2mL量瓶中，分
别精密加入莪术醇对照品储备液0．10、0．30、0．50
mL，制备供试品溶液，依法测定，结果平均回收率为
99．69％，RSD为0．82％(以一9)。
2．9样品测定：取复方莪术油软胶囊3批，制备供
试品溶液，注入气相色谱仪，内标两点法测定莪术醇
的质量分数，结果见表1。
表1 复方莪术油软胶囊中莪术醇测定结果(弹一3)
Table1 DeterminationofcurcumoiinCompound
EzhuOilSoftCapsules(n一3)
3讨论
由于复方莪术油软胶囊的成分大多是极性较小
的成分，且成分复杂，传统的填充柱不能使各成分完
全分离。文献报道n’3“1的色谱柱也大多数为非极性
毛细管色谱柱，其中最多的为聚硅氧烷类色谱柱，所
以本实验采用了oV一1毛细管色谱柱。
本实验曾采用了文献报道[3]的程序升温，初始
温度为75℃，以3C／min升至145~c。但此时莪术
醇与相邻物质未实现基线分离，所以尝试采用了
1．5℃／min升到132。C，此时莪术醇与相邻物质实
现基线分离。在待测物质流出色谱柱后，采用50℃／
min到210℃，维持4rain，这样使其他高沸点的物
质尽快流出色谱柱，从而达到减少分析时间的目的。
文献报道嘲的内标物为正十三烷。本实验采用
正十三烷作内标时，由于复方莪术油软胶囊成分复
杂，未达到基线分离。用萘作内标时出峰时间较早，
与陈皮油中成分未达到基线分离。用正十八烷作内
标时，它与莪术醇未达到基线分离。基于上述现象，
采用沸点较高的内标物质。本实验尝试用了正二十
烷、正二十五烷、蒽醌，三者都能实现基线分离，但是
正二十五烷、蒽醌的保留时间过长，正二十烷保留时
间适中，所以本实验采用正二十烷作为内标。
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注射用苦参素细菌内毒素检查法的研究
肖贵南1，陆惠文H，宜 全2
(1．广东省药品检验所，广东广州 510180；2．广州医学院，广东广州510182)
摘 要：目的 探讨注射用苦参素进行细菌内毒素检查的可行性。方法 采用凝胶法和动态浊度法鲎试验对样品
中的细菌内毒素进行定性和定量检测。结果 3批注射用苦参素稀释至500mg／L和250mg／L后对细菌内毒素检
查均没有干扰作用；所测样品的细菌内毒素均小于1000EU／g，凝胶法和动态浊度法鲎试验均证实了这一点。结论
可建立注射用苦参素的细菌内毒素检查法，日常细菌内毒素检查时可将样品稀释至500mg／L以下以排除其干扰
作用。
关键词：注射用苦参素；细菌内毒素；鲎试验；干扰作用
中图分类号；R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)09—1332—04
Investigationforbacterialendotoxinsinkurorinonefori jection
XIAOGui—nanl，LUHui—wenl，YIQuan2
(1．GuangdongInstituteforDrugControl，Guangzhou510180，China；
2．GuangzhouMedicalCo lege，Guangzhou510182，China)
收稿日期：200412-22
作者简介：肖贵南(1972一)，男，江西南康人，副主任药师，硕士，发表论文21篇，研究方向为新药药理及细菌内毒素分析。
Tel：(020)81853842E—mail：gzxgn@163．com
*通讯作者陆惠文
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1333·
Keywords：kurorinonefor jection(KFI)；bacterialendotoxins：tachypleusmebocytesate
(TAL)test；interferenceeffects
自从20世纪60年代阐明鲎血凝集的机制并由
此建立鲎试验方法以来，世界各国越来越多地以细
菌内毒素检查药品生物制品中的致热物质来替代兔
法热原检查以控制药品质量，如《中国药典>>2005年
版规定进行细菌内毒素检查的品种为69个，而《美
国药典》24版已达586种。苦参素的主要成分为氧
化苦参碱，是从豆科槐属植物苦参、广豆根、管萼山
豆根等植物中提取的生物碱，临床主要用于慢性病
毒性乙型肝炎、肿瘤放疗和化疗后引起的白细胞减
少等症，其细菌内毒素是影响该药疗效好坏的重要
指标，《中国药典>>2001年版尚未收载该品种。本实
验对注射用苦参素(kurorinoneforinjection，KFI)
进行了细菌内毒素的凝胶法定性及动态浊度定量法
鲎试验研究，以考察该药进行细菌内毒素检查的可
行性。
1材料与仪器
注射用苦参素(批号030308、030309、030310；
每瓶100mg)由深圳清华源兴药业有限公司生产；
细菌内毒素标准品(批号981；每瓶9000EU)由中
国药品生物制品检定所提供；细菌内毒素检查用水
(批号020309；每瓶5．0mL，细菌内毒素小于5．0
EU／L)由湛江海洋生物制品厂生产；灵敏度为250
EU／i。(批号020125)的普通鲎试剂及30EU／L(批
号010402一C；每瓶1．2mL)的定量鲎试剂由湛江海
洋生物制品厂生产；灵敏度为250EU／L(批号
0204032)的普通鲎试剂由湛江安度斯生物有限公司
生产。
BET--32B型细菌内毒素定量测定仪由天津大
学无线电厂生产；旋涡振荡器(IKA～MS一1型)及
恒温水浴箱(19A型)由德国Julabo公司生产；实验
所用玻璃器皿经浓硫酸洗液处理后再以250。C干烤
2h去除外源性的细菌内毒素。
2方法与结果
2．1 鲎试剂标示灵敏度(入)的复核[1]：按《中国药
典》规定的方法对实验所用鲎试剂进行灵敏度复核，
结果鲎试剂的实测灵敏度均在(0．5～2．o)入，符合
规定，正式试验时以标示的鲎试剂灵敏度入为准。
2．2 样品细菌内毒素限值(L)的确定u]：细菌内毒
素限值L—K／M，其中K为人用每千克体重每小时
最大可接受的细菌内毒素剂量，非放射性药品在静
脉途径给药时K值定为5EU／(kg·h)；M为人用
每千克体重每小时最大可接受的药品剂量，注射用
苦参素的成人(60kg)每次最大临床用量为600
mg[2]，2h内静脉滴注完，经过计算求得L值为
1000EU／g。
2．3样品的干扰试验(凝胶法)
2．3．1干扰试验有效稀释质量浓度的计算：目前市
场上用于药品检验的鲎试剂其灵敏度一般在30～
500EU／L，故在确定了KFI的细菌内毒素限值为
1000EU／g后，可计算出样品的有效稀释质量浓度
范围为入。／L～入。／L，即30～500mg／L。由此可知待
测样品的最小非干扰质量浓度不能低于30mg／I。。
2．3．2样品的干扰预试验：任取1批KFI样品(批
号为030309)稀释至250rng／L及500mg／L，参照
有关文献报道[31以250Eu／L(批号为020125)的鲎
试剂进行细菌内毒素检查的干扰试验，并计算以样
品稀释液配制的细菌内毒素溶液反应终点质量浓度
的几何均值(Et)及用细菌内毒素检查用水配制的内
毒素溶液反应终点浓度的几何均值(Es)，结果见表
1。表明样品在两种质量浓度下对鲎试验检查均无干
扰作用。
表1注射用苦参素的干扰预试验
Table1 Pre—interferencetestforKFI
+表不阳性反应，形成r凝胶；一表不阴性反应，未形成凝股
+indicatespositivereactionwithgelatination；一indicates
negativereactionwithoutgelatination
2．3．3样品的干扰试验：取2个厂家灵敏度为250
EU／L(批号为020125和0204032)的鲎试剂，分别
对250mg／L及500mg／L的KFI稀释液进行细菌
内毒素检查的干扰试验，并计算以样品稀释液配制
的细菌内毒素溶液反应终点浓度的几何均值(Et)及
用细菌内毒素检查用水配制的内毒素溶液反应终点
浓度的几何均值(Es)，结果见表2。可见KFI稀释至
500mg／L或250mg／L时其Et与相应的Es相比
均在0．5～2．0，且Es在(o．5～2．O)入，表明此时样
品稀释液对鲎试验检查无于扰作用。
2．4 样品中细菌内毒素的常规检测：取上述3批
KFI稀释至250mg／L，以灵敏度为250EU／L的普
万方数据
·1334· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
通鲎试剂进行常规凝胶法细菌内毒素检查，结果见
表3。表明KFI中的细菌内毒素均小于1000EU／g。
2．5样品的干扰试验及其定量检查(动态浊度法)
2．5．1标准曲线的制作及其可靠性评价：按照定量
用鲎试剂的装量加入细菌内毒素检查用水并分装
0．10mL鲎试剂于各反应管中(10mm×75mm)，
各加入0．10mL500、250、125、62．5、31．25EU／L
细菌内毒素，阴性对照管加入0．10mL内毒素检查
用水，上述各反应管插入细菌内毒素定量测定仪中
进行检测，每1浓度重复3管，建立成胶时间对数值
(19T)与细菌内毒素浓度对数值(19C)的相关性，全
部数据采用最dx--乘法回归处理。要求标准曲线的
相关系数IrJ>0．980，且阴性对照管的成胶时间在
检测时间限度之外时，结果才成立。
表2注射用苦参素的干扰试验
Table2 InterferencetestforKFI
表3注射用苦参素中细菌内毒素的常规检查
Table3 Routineexaminationofbacterial
endotoxinsinKFI
+表示阳性反应，形成了_凝胶；一表示阴性反应，未形成凝股
+indicatespositivereactionwithgelatination；一indicates
negati‘vereactionwithoutgelatination
2．5．2干扰预试验：取1批KFl分别稀释至500、
250、125、62．5、31．25mg／L作为A液；另取A液添
加终浓度为125EU／L细菌内毒素作为B液。同时
制备标准曲线进行干扰预试验，样品中添加内毒素
的回收率一[(B液内毒素值一A液内毒素值)／
1253X100％，结果求得曲线方程为IgT一
3．0416—0．24263lgC(T单位为S，C单位为
1000EU／L)，相关系数r---一一0．9928，阴性对照管
未出现成胶信号，结果见表4。
表4干扰预试验
Table4 Pre—interfefencet st
可见KFI稀释至500mg／L或更低浓度时其添
加细菌内毒素的回收率在50％～200％，表明此时
对细菌内毒素检查无干扰作用，正式试验时取KFI
的4倍稀释液(质量浓度为250mg／L)进行干扰试
验和细菌内毒素定量分析。
2．5．3干扰试验及细菌内毒素定量检查：取3批
KFI稀释至250mg／L作为A液；另取A液添加终
浓度为125EU／L的细菌内毒素作为B液。参照有
关文献报道[4]进行干扰试验及细菌内毒素的定量检
查，结果求得曲线方程为lgT=2．98024— ．24016
lgC(丁单位为S，C单位为1000EU／L)，相关系数
r一一0．9964，且阴性对照管无成胶信号出现，结果
见表5。
表5 注射用苦参素的干扰试验及细菌内毒素的定量检测
Table5 Interferencetestandquantitativedetermination
ofbacterialendotoxinsinKFI
可见3批KFI稀释至250mg／L时其添加内毒
素的回收率均在75％～125％，表明样品在该浓度
下对鲎试验检查无干扰作用；定量检查结果表明所
测3批KFI的细菌内毒素均小于1000EU／g。
3讨论
鲎试剂为东方鲎或美洲鲎的血液变形细胞溶解
物的冻干品，在一定条件下(适宜的温度、pH值及
无干扰作用时)该试剂能与微量的内毒素反应形成
凝胶，细菌内毒素的检查正是基于上述机制。主要的
方法有凝胶法和比浊法及比色法，前者为定性或半
定量试验；后二者为定量试验，由于其操作简便、直
观、准确、能迅速排除干扰，并可检测各种输液药品、
水质、食品及医疗器械中污染的细菌内毒素；临床上
可通过监测血液、腹水、脑脊液等体液中的细菌内毒
素，诊断革兰氏阴性杆菌内毒素血症、肝硬化、脑膜
炎等病症及评价烧伤病人的治疗效果，因而这种方
法在临床及药物分析部门得到了广泛的重视和应
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1335·
用，《中国药典}2000年版二部已经正式收载了该方
法。
一个新的中药品种是否可以采用细菌内毒素检
查法，首先要证实该样品本身是否存在干扰因素，进
行干扰试验的目的就是要确定该品种在什么样的有
效稀释浓度范围内进行细菌内毒素检查时既可以克
服干扰因素，又能客观地反映其所含内毒素的量是
否符合规定的限值；本实验在确定注射用苦参素的
细菌内毒素限值为1000EU／g后，应用2个厂家不
同灵敏度的鲎试剂对3批注射用苦参素进行了细菌
内毒素检查的干扰试验，动态浊度法定量试验及普
通凝胶法鲎试验均证实样品在稀释至500mg／L或
更低浓度时对细菌内毒素检查无干扰作用，说明可
建立该品种的细菌内毒素检查法。
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六昧地黄纳米颗粒的显微结构及丹皮酚的测定
马培艳1“，傅正义1，张金咏1，王玉成1，王为民1，张清杰1
(1．武汉理工大学材料复合新技术国家重点实验室，湖jE武汉430070；
2．武汉理工大学理学院应化系，湖北武汉430070)
六味地黄作为一种滋补肾阴的传统复方药物已
被使用了几千年，近年来，六味地黄因具有抗癌、提
高人体免疫作用口3而备受关注。虽然它的药效明显，
但由于煎煮时问长，味苦，同时较低的溶出率也抑制
了六味地黄中成药的发展。纳米技术在生物、医药领
域的迅速发展对中药产生了深刻的影响。受到矿物
中药的启示，徐辉碧教授发现药物的药效不仅取决
于药物组成，与药物制备时的状态也有关。当药物颗
粒达到纳米级别时，药物会呈现出常态时不具有的
新的物理化学、生物特性，据此提出了纳米中药的概
念。目前已有一些纳米药物和专利的报道[2~5]，这些
研究都表明了纳米技术可以显著提高矿物中药的药
效。本实验采用高速离心剪切粉碎机制备了纳米六
味地黄颗粒，对所得纳米颗粒进行了粒度分布测定
和红外光谱分析，并测定了指标成分丹皮酚，为研究
纳米粉碎对六味地黄化学成分的影响奠定基础。
1仪器与试剂
HSCS粉碎机(日本NARA机械制造有限公
司)；1110高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；
DEGASSER在线脱气机(美国)；QuatPump，DAD
(美国)；Analyst色谱数据工作站；ZetaPALS粒度
分析仪(美国Brookhaven公司)；药材从湖北省中药
材公司购得，经湖北中医研究院中药研究中心鉴定。
丹皮酚对照品(质量分数99．92％)由中国药品生物
制品检定所提供；所用试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1纳米六味地黄的制备：药材清洗、干燥，均匀粉
碎后过80目筛，得六味地黄细粉。取该细粉适量投
入到HSCS粉碎机的投料罐中粉碎，即得。
2．2粒度和粒度分布：粉末用ZetaPALS粒度分析
仪进行粒度分析，见图1。六味地黄粉碎后的平均粒
径为161．9nm，并且曲线分布较窄，说明通过纳米
粉碎技术可以得到均匀分布的纳米六味地黄粉末。
2．3 红外光谱分析：将六味地黄纳米粉末用KBr
压片法进行红外光谱的测试，六味地黄细粉用同样
的方法测试。结果见图2。纳米粉碎前后六味地黄无
论峰的位置还是峰的形状都相差不大，说明纳米粉
碎后六味地黄主要成分的基团结构并没有发生
变化。
2．4丹皮酚的HPLC测定
2．4．1 色谱条件：色谱柱：C。8柱(150mm×4．6
mm，5肛m)；流动相：乙腈一水(55：45)；体积流量：
收稿日期：2005—04—15
蕹喜器界：雪耄皂答雾差考冬誉器凳炅：聱瑟：臀至：薪凳努高为纳米技术在中药中的应用。T。l：(027，62581510作者简介 马培艳(1974一)，女，河北人，讲师，博士，研究方向为纳米技术在中药中的应用。Tel：)
万方数据
注射用苦参素细菌内毒素检查法的研究
作者： 肖贵南， 陆惠文， 宜全， XIAO Gui-nan， LU Hui-wen， YI Quan
作者单位： 肖贵南,陆惠文,XIAO Gui-nan,LU Hui-wen(广东省药品检验所,广东,广州,510180)， 宜全
,YI Quan(广州医学院,广东,广州,510182)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(9)
被引用次数： 4次

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3.注射用卡铂细菌内毒素检查的方法学评价与应用[期刊论文]-实用全科医学 2006(5)
4.细菌内毒素定量检测方法在中药注射剂质量控制中的应用研究[期刊论文]-中草药 2009(12)

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