全 文 ：·药剂与工艺·
胶束电动毛细管色谱分离大黄中有效成分的研究
尚小玉,袁倬斌a
(中国科学院研究生院,北京 100039)
摘 要: 目的 分离出大黄中 4 种有效成分:大黄酚、大黄素、土大黄苷和大黄酸。方法 采用胶束电动毛细管色谱
法( M ECC) ,缓冲溶液为 50 mmo l/ L H3BO 3-NaOH 含 20 mmo l/ L SDC, pH 值为 10,分析电压 17 kV。结果 4 种
成分在 5 m in 内全部分离。结论 本法简便、快速、结果令人满意。
关键词: 胶束电动毛细管色谱;大黄; 蒽醌类
中图分类号: R294. 1 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2001) 08 0691 02
Isolation of active constituents in rhubarb by micellar
electrokinetic capillary chromatography
SHANG Xiao-yu, YUAN Zhuo-bin
( G raduate Schoo l, Chines Academy of Sciences, Beijing 100039, China)
Abstract: Obj ect To isolate and ident ify the four act iv e const ituents, chry sophanol , emodin,
rhapont icin and rhein in rhubarb. Methods M icellar elect rokinet ic capillar y chromatog raphy ( M ECC )
w ith a buffer solut ion of 5 mmol/ L H3BO 3-NaOH containing 20 mmol / L of sodium deoxycholate ( SDC)
( pH= 10) w as used fo r their separ at ion at a vo ltag e of 17 kv . Results The four active const ituents were
completely separated w ithin 5 min. Conclusion This method w as found to be simple and rapid and gave
sat isfactory results.
Key words : micellar elect rokinet ic capillary chr omatogr aphy ( M ECC) ; rhubarb; anthraquinones
大黄是我国常用中药, 具有泻下、抗菌等作用。
近年来,高效毛细管电泳在中药有效成分的分离分
析中发挥着重要的作用。有用胶束电动色谱法采用
不同的缓冲溶液体系分离出大黄素、大黄酚、大黄
酸、芦荟大黄素和大黄素甲醚5种成分 [ 1～4]。对于土
大黄苷分离仅限于薄层层析法 [ 5] , 土大黄苷为二苯
乙烯的衍生物,存在于劣质大黄中,常以土大黄苷的
存在与否作为大黄质量的定性鉴别的手段。本文采
用胶束电动毛细管色谱法对大黄素、大黄酚、大黄酸
和土大黄苷进行了分离,通过对缓冲溶液浓度、pH、
表面活性剂浓度和外加电压的优化,得出了比较满
意的分离条件。在此条件下,对生大黄样品进行了分
离,且可简便地检验出优劣品质的大黄。
1 实验部分
2. 1 材料和试剂:大黄素、大黄酚、大黄酸和土大黄
苷标准品购自中国药品生物制品检定所。生大黄样
品购于河北安国,生大黄样品蒽醌衍生物的提取方
法照文献[ 4]进行。脱氧胆酸钠( SDC)购自北京市海
淀区微生物培养基制品厂,硼酸、磷酸二氢钠和氢氧
化钠均为分析纯。
2. 2 食品和分析条件: 北京新技术所 1229 型
HPCE Analyser 和中 科 院 研 究生 院 应 化 所
ACS2000型毛细管电泳仪, 空心熔融石英毛细管柱
( 40 cm×50 Lm) ,购于河北永年光纤厂, 柱上紫外
检测( 254 nm ) ,恒压 17 kV,电进样 5 s。分离用缓冲
溶液为 50 mmo l/ L H3BO 3-NaOH ( pH 10) 含 20
mmol / L SDC。标准品用无水乙醇和磷酸二氢钠
配制。
2 结果与讨论
2. 1 缓冲溶液 pH 影响: 缓冲溶液 pH 是影响毛细
管电泳分离的关键因素, pH 的改变, 将引起电渗流
( EOF)、峰形及分辨率的变化。本文在 pH 为 9. 5～
11. 5 的范围内考察了缓冲溶液 pH 值对分离情况
的影响, 4种成分在 pH 10条件下, 峰形较好, 而且
·691·中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2001 年第 32卷第 8期
a 收稿日期: 2000-11-13基金项目:国家自然科学基金( 29675022, 29875027) ,国家“九·五”科技攻关项目( 96-A23-01-06)和中科院长春应用化学研究所电分析化学开放研究实验室基金(OC 2000001)资助项目。作者简介:尚小玉( 1974-) ,女,河南省河涧人,毕业于河北工业大学化学工艺专业,现在中国科科学院研究生院攻读博士学位,从事分析化学专业。
* 联系人
全部分开。如图 1所示。
1-大黄酚 2-大黄素 3-土大黄苷 4-大黄酸
图 1 大黄中 4 种成分的电泳图
2. 2 缓冲溶液浓度的选择: 在恒定 pH 下,增加缓
冲溶液浓度, 可以降低电渗流( EOF) , 在恒电压下,
迁移时间随缓冲溶液浓度增加而加长,从而改善分
离度;而且,缓冲溶液浓度大,缓冲容量也大。但是,
浓度太大,会产生焦耳热效应,引起区带增宽。因此,
在 25～75 mmol/ L 浓度范围内, 选择了在最佳 pH
条件下能分离 4种成分的最大浓度为 50 mmol/ L。
2. 3 表面活性剂浓度的选择:表面活性剂 SDC 的
加入可以控制 EOF 大小与方向,达到增强分离选择
性,缩短分析时间,提高分离度的目的。图 2给出了
在 pH10条件下, SDC 浓度的不同对迁移时间的影
响。由图中可以看出, 迁移时间随着 SDC浓度增大
而增长。在SDC 浓度为 20 mmo l/ L 4种成分能够得
到完全分离。SDC 浓度过大,缓冲溶液粘度增大,易
使毛细管堵塞。
A-大黄酸 B-土大黄苷 C-大黄素 D-大黄酚
图 2 SDC浓度对迁移时间的影响
2. 4 外加电压的优化:外加电压增大,迁移时间变
短,减少了分析时间。本文考察了 pH 10, 缓冲溶液
50 mmo l/ L ( SDC 20 mmol / L ) , 13～17 kV 范围内
电压变化对迁移时间的影响,如图 3所示。在 17 kV
电压下, 4种成分能够完全分开。电压太大,会产生
大量的焦耳热, 导致分离效率下降。因此,我们选择
17 kV 为操作电压。
A、B、C、D-同图 2
图 3 分析电压对迁移时间的影响
3 结论
本文用胶束电动毛细管色谱法分离了大黄中的
4种有效成分: 大黄酚、大黄素、土大黄苷和大黄酸,
并对分离条件进行了优化。筛选出的分离条件如下:
缓冲溶液为 50 mmol / L H3BO 3-NaOH( pH 10) 含
20 mmol/ L SDC,分析电压 17 kV。在上述条件下,
4种成分完全分开,且峰形较好。生大黄样品中土大
黄苷峰型不明显, 在非正品大黄中大部分均含土大
黄苷,而正品大黄中不含土大黄苷。该法简便、快速,
为中药大黄的质量控制提供了新方法。
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