全 文 ：·药理实验与临床观察·
三七总皂苷抗炎作用机制的实验研究△
第三军医大学药理教研室 (重庆 400038)　　李淑慧 　李晓辉
华西医科大学药理教研室　　　　 　　　　楚　延
摘　要　以角叉菜胶 ( Ca r) 25 mg /kg sc诱导大鼠气囊滑膜炎为模型 ,分别采用 Low ry法、试管稀释法、硫代巴比
妥酸分光光度法 ,观察了三七总皂苷 ( PnS)对气囊滑膜炎渗出液中蛋白含量、白细胞数量及脂质过氧化物丙二醛
( MDA)含量的影响 ,此外 ,采用细胞色素 C还原法及放射免疫分析法 ,进一步观察了 Pn S对渗出液中中性粒细胞
( Neu) 释放超氧阴离子 ( O÷2 )及其胞内 cAM P含量的影响。结果发现: PnS 60, 120, 240 mg /kg 3个剂量组均能剂
量依赖性地抑制 Ca r诱导的白细胞游出和蛋白渗出 ;显著降低 MDA含量、抑制 Neu释放 O÷2 ;但能升高 Neu内
cAM P含量。提示 PnS对大鼠气囊滑膜炎具有明显抗炎作用 ,其抗炎机制与升高 Neu内 cAM P从而抑制氧自由基
生成、减轻脂质过氧化损伤有密切关系。
关键词　三七总皂苷　气囊滑膜炎　丙二醛　超氧阴离子　环磷酸腺苷
Studies on Anti-Inflammatory Mechanisms of Saponin of
Panax pseudo-ginseng var. notoginseng ( Sanchi)
　　Depar tment of Pha rmaco log y , Third M ilita ry Medica l Univ er sity ( Chongqing 400038)　 Li Shuhui and Li Xia ohui
　　Depar tment of Pha rmaco log y , West China Univ er sity o f Medical Sciences　 Chu Yan
Abstract　　 Effects of saponin of Panax pseudo-ginseng var. notoginseng ( Burk. ) Hoo et Tseng
( PnS) on neutrophi l ( Neu ) count , protein and malondialdehyde ( MDA) contents in the exudate o f rat
acute ai r-pouch synovi tis model induced by sc injection of 25 mg /kg carrageenan w ere investig ated by
Low ry and test tube dilution methods and thiobarbi turic acid spect ropho tometry. It s effects on the
int racellular cAMP content in and release of O
÷
2 from Neu were further assessed by radioimmunoassay and
cy toch rome C reduction methods respectively. The resul ts show ed that PnS 60, 120, 240 mg /kg ip reduced
the mig ra tion of Neu and exudation o f protein, low ered the content of MDA and inhibi ted the release o f O
÷
2
f rom N eu; but elev ated the cAMP content of Neu in a dose-dependent manner. These resul ts rev ealed that
Pns has an obvious anti-inflammatory ef fect and i ts primary action w as rela ted to the increase of cAMP
content in Neu, follow ed by inhibi tion of th e f ree radical production.
Key words　　 saponin of Panax pseudo-ginseng var. notoginseng ( Burk. ) Hoo et Tseng　 ai r pouch
synoviti s　 malondialdehyde　 O÷2　 cAM P
　　三七是五加科人参属植物 ,传统用于止血化瘀、
消肿镇痛。近年发现其主要有效成分三七总皂苷
〔saponins of Panax pseudo-ginseng var. notogin-
seng ( Burk. ) Hoo et Tseng , PnS〕对多种实验性炎
症模型具有良好的抗炎活性 [ 1]。鉴于 O÷2等自由基
诱发的脂质过氧化损伤是炎症发生发展的重要病理
机制之一 [2 ] ;加之近年研究发现胞内第二信使分子
环磷酸腺苷 ( cAM P)升高具有抑制自由基释放的
作用 [3 ] ,为此 ,本研究以交叉菜胶 ( Car )诱导大鼠气
囊滑膜炎为模型 ,以地塞米松为阳性对照 ,进一步观
察了 PnS的抗炎作用及其机制 ,旨在为发掘有效抗
炎药提供理论依据。
1　材料与方法
1. 1　药品与试剂: Pn S (纯度 99% ,中国科学院昆
明植物研究所提供 ) ;地塞米松 ( Dex , 卫生部药品检
定所 ) ;角叉菜胶 ( Car,辽宁药物研究所 ) ;硫代巴比
妥酸 ( TBA,上海试剂二厂 ) ;十二烷基磺酸钠 (日本
进口分装 ) ;四乙氧基丙烷 (瑞典产品 ) ;细胞色素 C
(Ⅲ型 , Sigma公司 ) ; A23187 ( Sigma公司 ) ; cAM P放
免分析药盒 (上海第二医学院 ) ;其它试剂均为国产
·676· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期
Address: Li Sh uhui, Departm en t of Pharmacology, Thi rd Mi lit ary M edical Univ ersi ty, Chongqing李淑慧　华西医科大学 93级药理学硕士生 , 1996年获硕士学位。 主要从事抗炎免疫药理方向研究 ,申请获得校管课题 1项 ,参与完成国家自然科学基金面上项目各 1项。发表论文: An ti-inf lammatory effect s of total saponins of Panax notoginseng , Acta Pharmacol Sin , 1999, 20
( 6): 551,被 SCI收录。△重庆市中医药管理局课题 No: 99032
分析纯。
1. 2　实验动物处理: 雄性 Wista r 大鼠 ,体重
( 185± 34) g ,第三军医大学实验动物中心提供 (医
动字第 24301050号 )。随机将大鼠分为 6组:正常
组、致炎组、 Ca r+ PnS 60, 120, 240 mg /kg 3个组、
Car+ Dex 1 mg /kg组。 药物处理组于 Ca r致炎前
30 min及致炎后 6 h分别 ip相应药物 ,对照组给予
等容量溶媒 ,各组大鼠于 Ca r致炎后 12 h脱颈椎处
死 ,用无钙镁 Hank s液 ( HBSS)灌洗 ,收集灌洗液
进行有关指标测定。
1. 3　大鼠气囊滑膜炎模型复制: 参照文献方法进
行 [4 ]。气囊内注射 Car 25 mg /kg致炎 ,各组动物处
死后 ,用 HBSS灌洗气囊 ,收集灌洗液 ,少许行白细
胞计数及分类计数 ,其余离心 ,分别收集上清液和白
细胞 ( Typan blue检查白细胞活力大于 97% , Neu
占约 95% ) ,供各项指标测定。
1. 4　白细胞计数及分类计数:按常规法进行 [ 5]。
1. 5　灌洗液中蛋白含量的测定: 按 Low ry 法进
行 [6 ]。
1. 6　 灌 洗 液 中 脂 质 过 氧 化 物 丙 二 醛
( malondialdehyde, MDA)含量测定: 参照向荣等
硫代巴比妥酸分光光度法进行 [ 7]。
1. 7　 Neu释放 O÷2的测定:参照文献方法 [8 ]略加改
进。取已制备好的细胞悬液 ,用 HBSS调整成 5×
10
5
/mL,各取悬液 0. 2 mL,加入 HBSS 0. 3 mL,置
37℃ 振荡孵育 15 min,立即置于冰浴中 ,加 HBSS
1. 5 mL,离心 ( 4℃ , 3 000× g , 5 min) ,弃沉淀 ,上
清液于 550 nm处测定 A值。对照管不加刺激剂 ,余
与测定管相同。按下列公式计算细胞色素 C减少
量 ,以代表 O÷2生成量。
Cy t C减少量= 对照管 A-测定管 A消光系数 ε×时间 t
ε= 21. 0 L /mmol· cm
最后结果以 Cy t C减少量 ( nmol /106 cel ls / 5
min)间接代表 O÷2释放量。
1. 8　 Neu内 cAMP含量的测定:参照文献方法进
行样品处理及测定 [9 ]。 ( 1)样品处理: 取细胞悬液
( 1× 106 /mL) 1 mL,于已硅化试管中 ,于 100℃ 水
浴煮沸 3 min,立即冰浴冷却 , 3 000 r /min离心 10
min,取上清于另一试管中 ,真空干燥待测。 ( 2)测
定: 具体操作方法按 cAMP放免药盒说明书进行。
结果以 pmol /106 cell表示。
1. 9　统计分析:将各组数据在电子计算机上进行 t
检验和相关显著性检验 ,结果用均数±标准差 (x±
s )表示。
2　结果
2. 1　 PnS对灌洗液白细胞数及蛋白含量的影响:
Car致炎前 30 min及致炎后 6 h ,分别 ip PnS 60,
120, 240 mg /kg及 Dex 1 mg /kg,于 Car致炎后 12
h活杀大鼠 ,收集灌洗液进行测定。 PnS 3个剂量组
均能一定程度地降低灌洗液中白细胞数 ( P <
0. 01) ,且呈剂量依赖性。 Dex具有类似作用 (见表
1)。
表 1　 PnS对灌洗液白细胞数及蛋白含量的影响
(x± s , n= 8)
组别 剂量
( mg /kg)
Neu
( 1× 109 /L)
蛋白　　
( g /L)　　
正常组 — 2. 95± 0. 54 0. 59± 0. 20
致炎组 — 47. 9± 15. 3△△ 7. 46± 1. 26△△
Car+ PnS 60 30. 3± 9. 5△△* * 7. 41± 1. 55△△
120 21. 2± 7. 2△△* * 5. 70± 1. 47△△*
240 17. 0± 6. 2△△* * 4. 41± 1. 35△△*
Car+ Dex 1 16. 9± 7. 0△△* * 5. 39± 1. 20△△* *
　　与正常组比较: △△ P < 0. 01
与致炎组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
2. 2　对灌洗液中 MDA含量的影响: Car致炎后 ,
大鼠气囊灌洗液中 MDA含量明显升高 ( P <
0. 01) , PnS 60, 120, 240 mg /kg剂量依赖性阻止灌
洗液中 MDA含量的升高 ,其抑制率分别为:
2. 75% , 33. 10% , 37. 95% , Dex也具有类似作用 (见
表 2)。
表 2　 PnS对灌洗液中 MDA含量、Neu释放 O÷2及 Neu内 cAMP含量的影响 (x± s , n= 8)
组别 剂量
( mg /kg )
MDA　
( nm ol /mL)　
O÷2
( nmol /106 cell· 15min)
cAMP
(pmol /106 cell)
正常组 — 7. 26± 2. 59 34. 58± 6. 29 1. 960± 0. 460
致炎组 — 29. 0± 8. 6△△ 116. 8± 11. 1△△ 0. 725± 0. 216△△
Car+ PnS 60 28. 2± 7. 4△△ 104. 9± 12. 3△△ 0. 665± 0. 195△△
120 19. 4± 5. 6△△* 81. 8± 8. 3△△* * 1. 247± 0. 547△*
240 18. 1± 5. 7△△* * 68. 4± 6. 3△△* * 1. 823± 0. 520* *
Car+ Dex 1 16. 3± 4. 7△△* * 67. 8± 8. 4△△* * 1. 414± 0. 503△* *
　　　　与正常组比较: △ P < 0. 01,　△△ P < 0. 01;　与致炎组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
2. 3　对灌洗液中 Neu释放 O÷2的影响: 由表 2可 见 , Ca r致炎后 ,灌洗液 Neu释放 O÷2显著增加 , PnS
·677·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期
3个剂量组均能抑制 Neu释放 O÷2 ,且呈剂量依赖
性 ,其抑制率分别为 10. 19% , 29. 96% , 41. 43%。
2. 4　对灌洗液中 Neu内 cAMP含量的影响: 由表
2可见 , Ca r致炎后 ,灌洗液 Neu内 cAMP含量明
显降低 ( P < 0. 01) ; PnS能剂量依赖性地增加 Neu
内 cAMP含量 ,且其大剂量组能使 Neu内 cAMP
含量恢复到正常水平。 Dex也具有类似作用。
3　讨论
自由基是广泛存在于生物体组织细胞内的非特
异性损伤因素 ,也是炎症发生发展的重要病理机制
之一 [2 ]。炎症时 ,活化的白细胞呼吸暴发过程产生的
O
÷
2等活性氧自由基 ,不仅具有增加血管通透性的作
用 ,而且极易与生物膜的多不饱和脂肪酸发生脱氢
反应 ,从而诱发组织细胞的脂质过氧化损伤 [ 10]。本
实验结果发现 , Pn S 3个剂量组均能剂量依赖性地
抑制 Car致炎大鼠 Neu释放 O÷2 、降低灌洗液中脂
质过氧化物 MDA的含量 ,且与其降低 Neu数量及
蛋白含量呈平行性变化。这与 Pns对体外多形核白
细胞呼吸暴发时产生的氧自由基及黄嘌吟氧化酶体
系产生的 O÷2均具有清除作用的结果相一致 [11 ]。
细胞内的第二信使分子 cAM P在调控炎症发
生发展中具有重要作用 ,胞内升高的 cAMP可抑制
炎细胞释放自由基而产生抗炎活性 [3 ]。本实验观察
到 , Ca r致炎后 ,气囊灌洗液中 N eu内 cAMP含量
明显下降 ( P < 0. 01) , PnS 3个剂量组均能剂量依
赖性升高 Neu内 cAM P含量 ,相关分析结果显示 ,
PnS升高 Neu内 cAMP含量与其抑制 Neu释放
O
÷
2呈显著负相关 ( r= - 0. 938 4, P < 0. 01)。 上述
结果表明 ,升高 Neu内 cAMP从而抑制 Neu释放
O
÷
2 、减轻脂质过氧化损伤是 PnS发挥抗炎作用的
重要分子机制之一。
参 考 文 献
1　张晓丹 ,刘建军 ,马英丽 ,等 . 中医药信息 , 1993, ( 5): 28
2　 Maed a H, Akaike T. Bioch emist ry Mosc, 1998, 63( 7): 854
3　 Tak ei K, Tokuyama K, Kato M , et al . Ph armacology, 1998, 57
( 1): 1
4　 Edw ards J C W , Sedgwick A D, Willough by D A, et al . J
Path ology, 1981, 134( 2): 147
5　福州部队总医院编 . 临床医学检验 . 上海:上海科技出版社 ,
1978: 15
6　 Low ry O H, Rosebrough N J, Far r A L, et al . J Biol Chem,
1951, 193: 265
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1985, 29( 5): 747
9　陈海鑫 ,李振甲 . 生物化学与生物物理进展 , 1986, 5: 78
10　 Ignatowicz E. Pol J Pharmacol, 1994, 46( 3): 103
11　周金黄 . 免疫药理学进展—基础与临床 . 北京:中国科学技术
出版社 , 1993: 170
( 2000-03-08收稿 )
Studies on the Basic Principles for the Processing of Rhizoma Cibot ii
PartⅠ Influence of Rhizoma Cibot ii and Its Processed Samples on
Thrombin Induced Rabbit Platelet Aggregation
　　 Liaoning Co llege of TCM ( Sh enyang 110032)　　 Li Jun (李　军 ) , Jia Tianzhu (贾天柱 ) , Du Guangli and Han
Hongwei
　　 The Second Affiliated Hospital o f Dalian Medical Unive rsity　　 Liu Jinpeng (刘进鹏 )
摘　要　比较研究了狗脊及其不同炮制品对凝血酶诱导的兔血小板聚集作用的影响 ,各炮制品均有抑制血小板聚
集作用 ,抗血小板聚集作用砂烫品> 盐制品> 酒蒸品> 单蒸品> 生品。
关键词　狗脊　凝血酶　血小板聚集作用
Abstract　　 The inf luence o f Cibot ium barometz ( L. ) J. Sm. and i ts pro cessed samples on thrombin-
induced platelet agg regation in rabbi ts was studied. The results showed that all di fferent ly processed
samples tested could inhibi t pla telet ag grega tion, wi th activi ties in the decreasing o rder of Rhizoma Cibotii
roasted in sti rring sand> steamed af ter being sal ted> steamed af ter steeped in w ine> simply steamed> the
unprocessed crude Rhizoma Cibotii .
Key words　　 Rhizoma Ciboti i　 th rombin　 pla telet ag g regation
·678· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期
李　军　 1993年 7月毕业于辽宁中医学院中药专业 (英语班 )后 ,留在辽宁中医学院中药系炮制教研室任教。 1998年 7月获辽宁中医学院生药学专业硕士学位。 曾参加研究了国家中医药管理局资助课题“中药狗脊炮制工艺及原理研究”。