全 文 ：12. 8最大 ,回收率 Y= 98. 3% 。
甘草饮片提取液 ,当 V乙醇 = 6 mL, V浓缩液 = 4
m L,磷酸氢二钾为 1. 5 g,加酸后提到结晶 0. 052 g ,
结晶是白色松散粉末。 与传统工艺相比 ,工艺简洁 ,
且结晶性状、纯度较高。
乙醇 /磷酸氢二钾是基于与水互溶的有机溶剂
和盐水相的双水相萃取体系 ,具有溶剂价廉、低毒、
较易挥发而无需反萃取和避免使用粘稠水溶性高聚
物等特点 ,易回收、易处理、操作简便。这种新型的萃
取体系在中草药有效成分提取中的应用还未见报
道 ,用此体系萃取其他中药有效成分还需继续研究。
参考文献:
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出版社 , 1997.
HPLC法同时测定三七总皂苷中人参皂苷 Rg1与 Rb1的含量
梁 宁1 ,赵怀清1 ,周迎春1 ,曲 燕 1 ,鲁鑫焱 1 ,张福蔓 2
( 1. 沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 110016; 2. 沈阳药大集琦药业有限责任公司 ,辽宁 沈阳 110016)
摘 要 :目的 建立 HPLC同时测定三七总皂苷中人参皂苷 Rg1与 Rb1的方法。方法 采用 HPLC法 ,以茶碱为内
标 ,氨基键合相为固定相 ,流动相为乙腈 -水 ( 80∶ 20) ,检测波长 203 nm。结果 三七总皂苷中人参皂苷 Rg1和 Rb1
与其他成分分离良好 ,保留时间分别约为 5. 7和 21. 5 min。 人参皂苷 Rg1在 80～ 280μg /m L( r= 0. 999 5) , Rb1在
80～ 240μg /mL (r= 0. 999 3)线性关系良好 , Rg1和 Rb1加样回收率分别为 97. 1%和 98. 4% , R SD分别为 2. 44%
和 2. 35% ( n= 9)。 结论 本法操作简便 ,准确 ,重现性好 ,可用于人参及三七的质量控制。
关键词: 三七总皂苷 ;人参皂苷 Rg1;人参皂苷 Rb1 ;高效液相色谱法
中图分类号: R286. 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2002) 08 0704 02
Determination of ginsenos ide Rg1 and Rb1 in total saponins of Panax notoginseng by HPLC
LIAN G Ning1 , ZHAO Huai-qing1 , ZHOU Ying-chun1 , QU Yan1 , LU Xin-yan1 , ZHANG Fu-man2
( 1. School of Pha rmacy , Shenyang Pharmaceutica l Univ er sity , Sh enyang 110016, China;
2. Shenyang Yaodajiqi Pharmaceutical Co. , L td. , Shenyang 110016, China )
Key words: tota l saponins o f Panax notoginseng ( Burk. ) F. H. Chen; ginsenoside Rg1 ; ginsenoside
Rb1; HPLC
三七为五加科植物三七 Panax notoginseng
( Burk. ) F. H. Chen的干燥根 ,有散瘀止血、消肿
定痛的功效 ,用于咯血 ,吐血 ,衄血 ,便血 ,崩漏 ,外伤
出血 ,胸腹刺痛 ,跌扑肿痛等。三七总皂苷主要有效
成分为人参皂苷 Rg1和 Rb1。 《中华人民共和国药
典》 2000年版一部采用薄层色谱法以人参皂苷 Rg1
和 Rb1为指标进行含量测定。目前有关文献报道测
定人参单体皂苷的方法有薄层光密度法 [1 ] ,薄层扫
描法 [2 ] ,高效液相色谱法 [3～ 6 ]。而在同一色谱条件下
以内标法同时测定多种皂苷含量的方法未见报道。
本实验采用氨基柱 ,流动相配比简单 ,以茶碱作内
标 ,使人参皂苷 Rg1与 Rb1与三七总皂苷中的其他
成分及内标物均达到较好分离。实验证明 ,该方法准
确可靠 ,重现性好 ,能够有效地测定三七总皂苷中人
参皂苷 Rg1和 Rb1的含量。
1 仪器、试剂与材料
日立 L-7110型高效液相色谱仪 ,日立 L-7400
型紫外检测器 ,江申色谱工作站 , DT-100A光电天
平。 人参皂苷 Rg1 ( 0703-200015)与人参皂苷 Rb1
( 0704-200012)对照品由中国药品生物制品检定所
提供 ;三七总皂苷原料由沈阳药科大学天然药化研
究室王金辉副教授提供 ,乙腈为色谱纯 ,水为重蒸
水 ,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
·704· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2002年第 33卷第 8期
收稿日期: 2001-10-15作者简介:梁 宁 ( 1967-) ,女 ,辽宁沈阳人 ,工程师 ,药物分析专业硕士研究生 ,研究方向为中药材和中成药质量评价方法以及中药药动学研究。 Tel: ( 024) 23902568 E-mail: zfmln@ online. ln. cn
2. 1 色谱条件: 色谱柱为 N H2 P-50柱 ( 4. 6 mm×
250 mm, 5μm) ,流动相为乙腈-水 ( 80∶ 20) ,流速
为 1. 0 mL /min,检测波长为 203 nm,柱温为室温 ,
进样量为 20μL。在此色谱条件下 ,对照品与样品的
色谱图见图 1。
1-人参皂苷 Rg1 2-茶碱 3-人参皂苷 Rb1
图 1 对照品 (A)和样品 (B)色谱图
2. 2 对照品溶液及内标溶液制备:精密称取人参皂
苷 Rg1 5 mg及人参皂苷 Rb1 4 mg,分别置 5 mL量
瓶中 ,用流动相溶解并稀释至刻度 ,摇匀。
取茶碱约 7. 5 mg ,精密称定 ,置 25 mL量瓶中 ,
用流动相溶解并稀释至刻度 ,作为内标溶液。
2. 3 供试品溶液制备:精密称取三七总皂苷原料约
8 mg,置 10 m L量瓶中 ,加内标溶液 0. 4 mL,用流
动相溶解并稀释至刻度 ,摇匀。
2. 4 线性范围考察:分别精密吸取人参皂苷 Rg1对
照品溶液 0. 08, 0. 12, 0. 16, 0. 20, 0. 24, 0. 28 m L和
人参皂苷 Rb1对照品溶液 0. 10, 0. 14, 0. 18, 0. 22,
0. 26, 0. 30 mL及内标溶液 0. 04 mL,用流动相定容
至 1 mL,得到系列浓度的对照品混合溶液 ,分别进
样 ,以对照品溶液浓度为横坐标 (X ) ,对照品与内标
物峰面积比为纵坐标 ( Y ) ,进行线性回归 ,人参皂苷
Rg1和 Rb1的回归方程分别为: Y = 0. 003 8X+
0. 021 7(r= 0. 999 5)和 Y= 0. 003 X - 0. 069 6(r=
0. 999 3) ,人参皂苷 Rg1在 80～ 280μg /mL,人参皂
苷 Rb1在 100～ 300μg /m L呈现良好线性关系。
2. 5 精密度试验: 取 2. 4项下同一对照品溶液 ,按
上述色谱条件重复进样 6次 ,人参皂苷 Rg1和 Rb1
的色谱峰与内标物的峰面积比值的 RSD分别为
0. 26% (n= 6)和 1. 21% (n= 6)。
2. 6 重现性考察: 按 2. 3项下平行制备 5份供试
品 ,测定含量 ,人参皂苷 Rg1与 Rb1的平均含量分
别为 237. 1 mg /g ( RSD= 1. 14% )和 285. 2 mg /g
(RSD= 1. 04% )。
2. 7 稳定性试验: 取供试品溶液分别于 0, 2, 4, 6,
8, 12 h进样 20μL,测得人参皂苷 Rg1和 Rb1的色
谱峰与内标物的峰面积比值的 RSD分别为 1. 63%
(n= 6)和 1. 74% (n= 6)。结果表明 12 h内供试品溶
液基本稳定。
2. 8 回收率试验:精密称取已知含量的样品 ,分别
加入人参皂苷 Rg1与 Rb1及内标溶液适量 ,用流动
相稀释至刻度 ,摇匀 ,在上述色谱条件下取 20μL进
样 ,结果人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Rb1的平均回收
率及 其 RSD 分别 为 97. 1% , 2. 44% ; 98. 4% ,
2. 35% (n= 9)。
2. 9 样品测定: 按 2. 3项下制备供试品溶液 ,取 20
μL注入高效液相色谱仪 ,记录色谱峰面积 ,采用工
作曲线计算人参皂苷 Rg1的含量为 237. 3 mg /g
( RSD= 1. 31% , n = 3) ,人参皂苷 Rb1的含量为
287. 6 mg /g ( RSD= 1. 14% ,n= 3)。
3 小结与讨论
3. 1 色谱条件的选择:文献报道采用 ODS柱较多 ,
大多是对一种人参皂苷单体进行定量 ,我们分别用
ODS柱和氨基柱以甲醇 -水 ,甲醇 -水-磷酸 ,乙腈 -甲
醇-水 ,乙腈 -水以不同比例的流动相对色谱条件进
行了考察。实验结果表明 , ODS柱分离效果较差。文
献中同时测定多种皂苷成分采用的是梯度洗脱法 ,
对设备要求高 ,重复性差。本法采用氨基键合相 ,乙
腈 -水 ( 80∶ 20)的二元溶剂系统为流动相 ,配比简
单 ,就可使人参皂苷 Rg1与相邻峰分离较好 ,人参皂
苷 Rb1的保留时间适中。
3. 2 内标物的选择:文献报道未见采用内标法对人
参皂苷 Rg1与 Rb1的含量测定 ,采用上述色谱条
件 ,人参皂苷 Rg1的 tR= 5. 7 min,人参皂苷 Rb1的
tR= 21. 5 min。为了减小定量误差 ,并获得较好的重
现性 ,经过考察几种物质 ,最终选用茶碱作为内标 ,
其 tR= 12. 2 min,与相邻峰分离度均大于 1. 5。
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·705·中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2002年第 33卷第 8期