全 文 ：养正合剂的免疫作用研究
李　明 1 ,曹于平 2 ,柳晓泉2 ,刘国卿2
⒇
( 1. 浙江尖峰药业有限公司 ,浙江 金华　 321000;　 2. 中国药科大学 药理教研室 ,江苏 南京　 210009)
摘　要: 目的　考察养正合剂的免疫调节作用。 方法　对小鼠碳粒廓清速率进行测定 ;对三硝基氯苯 ( DNCB)所致
迟发型超敏反应 ( DNCB-DT H)进行测定 ;对小鼠血清溶血素含量进行测定 ,对大鼠脾细胞产生 IL-Ⅱ 水平进行测
定。 结果　养正合剂可使小鼠碳粒廓清速率明显升高 ;大剂量养正合剂可明显增加荷瘤小鼠低下的 DTH;显著增
加接种 S180瘤株小鼠的血清溶血素含量并明显促进大鼠脾细胞的 IL-Ⅱ的生物活性。结论　养正合剂可对抗环磷酰
胺的免疫抑制作用 ,对荷瘤小鼠免疫功能有明显增强作用。
关键词: 养正合剂 ;免疫调节 ;抗肿瘤
中图分类号: R285; R967　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 01 0054 03
Studies on effect of YANGZHENG COMPOUND MIXTURE on immunity
LI M ing1 , CAO Yu-ping2 , L IU Xiao-quan2 , L IU Guo-qing2
　　 ( Zhejiang Jianfeng Pha rmaceutical Co. L td. , Jinhua Zhejiang 321000, China; 2. Depar tment of Pharmacolog y, China
Pha rmaceutical Univ e rsity , Nanjing Jiangsu 210009, China)
Key words: YN GZHENG COMPOUND M IX TU RE; regulation o f immuni ty; anti tumo r
　　养正合剂由人参、黄芪、猪苓、茯苓、枸杞子和女
贞子等药物组成。据文献报道猪苓、枸杞和茯苓有较
强的抑瘤作用 [ 1～ 3] ,黄芪能明显提高机体免疫功
能 [4 ]。为考察其药理活性 ,我们对其免疫调节作用进
行了实验研究。
1　材料
1. 1　药品与试剂:养正合剂由浙江衢州制药总厂提
供 ,批号 931206,每毫升相当于原药材 0. 6 g;强的
松龙注射液 ,上海第九制药厂生产 ,批号 930210;印
度墨汁 ,上海向群中学化学试剂厂产品 ;环磷酰胺 ,
上海第十二制药厂生产 ,批号 921217;刀豆素 A
( ConA) , Sigma产品 ;白介素-Ⅱ ( IL-Ⅱ )标准品及
CTIL-2细胞 ,由上海第二军医大学免疫组曹雪涛教
授提供 ; M TT, Sigma产品 ; RPM I1640, Gibco产
品 ,内含 25 mmo l /L HEPES, 16 mmol /L NaHCO,
2 mmol /L谷氨酰胺 , 50μmo l /L 2-硫基乙醇 , 100
μg /mL链霉素 , 100μg /mL青霉素及 10%灭活新生
小牛血清。
1. 2　动物: N IH小鼠 ,体重 18～ 22 g ,由江苏省卫
生防疫站提供 ;昆明种小鼠 ,体重 18～ 22 g ,由中国
药科大学动物房提供 ; Wistar大鼠 , 250 g左右 ,雄
性 ,由苏州医学院动物房提供。
1. 3　瘤株:肉瘤 180( S180 )由江苏省肿瘤防治研究
所提供。
1. 4　仪器: CO2培养箱 (日本平泽制作所 ) ;酶标仪
(南京分析仪器厂 ) ; Costo r96孔培养板 (美国 )。
2　方法和结果
2. 1　对小鼠碳粒廓清速率的影响: NIH小鼠 80
只 ,雌雄各半 ,随机分成 8组 ,设正常对照组、环磷酰
胺模型组 (剂量为 50 mg /kg , ip)、 3组单用养正合剂
组 (剂量为 7. 5, 15, 30 g /kg )及 3组环磷酰胺与养正
合剂合用组 ,连续给药 7 d,于末次给药后 1 h,每鼠
尾 iv印度墨汁 10 m L /kg , 2, 15 min各采血 20μL,
置于 0. 1% NaHCO3溶液 2 mL中 , 1 h后测定吸光
度 ( A ) ,按下列公式计算廓清指数 ( K )及校正廓清
指数 ( X ) ,结果见表 1。
K=
1
13log ( A2 /A15 )
X=
3
K× 体重肝重+ 脾重
2. 2　对三硝基氯苯 ( DN CB)所致迟发型超敏反应
( DNCB-DT H)的影响
2. 2. 1　对正常及强的松龙免疫抑制小鼠 DN CB-
DT H的影响:昆明种小鼠 80只 ,雄性 ,每鼠颈背部
sc 7% DNCB丙酮液 20μL致敏。 致敏后随机分为
正常对照组、强的松龙模型组 (剂量为 5 mg /kg,
im)、单用养正合剂组 (剂量为 7. 5, 15, 30 g /kg, ig )
·54· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 1期
⒇ 收稿日期: 2000-06-12作者简介:李　明　 1962年 8月生 ,男 ,山东人 ,工程师 ,硕士 ,主要从事抗肿瘤中药新药的开发。
Tel: ( 0579) 2326868转 3602　　 E-mai l: zjjf yy @ mail. jh pt t. i j. cn
及强的松龙与养正合剂合用组 ,小鼠连续给药 9 d,
每天 1次。并在给药 8 d后 ,各鼠右耳廓涂以同样量
的 DNCB丙酮液攻击 , 16 h后测量左、右耳廓厚度
差以此表示 DT H强度。 结果见表 2。
表 1　养正合剂对正常及环磷酰胺免疫抑制小鼠碳粒廓清速率的影响 (x± s ,n= 10)
组别 剂量 ( g /kg) K　　 α　　
对照 - 0. 021 0± 0. 004 0 4. 42± 0. 57
养正合剂 7. 5 0. 020 3± 0. 005 9 4. 62± 1. 10
15 0. 024 7± 0. 005 8 5. 07± 0. 59*
30 0. 028 2± 0. 006 6* * 5. 27± 1. 12*
环磷酰胺 0. 05 0. 014 4± 0. 005 1* * 3. 70± 0. 70*
养正合剂+ 环磷酰胺 7. 5+ 0. 05 0. 016 5± 0. 007 0 4. 22± 1. 32
15+ 0. 05 0. 020 5± 0. 005 0△ 4. 62± 0. 74△
30+ 0. 05 0. 022 6± 0. 006 5△△ 4. 78± 0. 71△△
　　　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01;　与环磷酰胺组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01
表 2　养正合剂对正常及强的松龙免疫抑制
小鼠 DNCB-DTH的影响 ( x± s ,n= 10)
组别 剂量
( g /kg)
左、右耳廓厚度差
(× 10-2mm )
对照 - 12. 5± 2. 5
养正合剂 7. 5 12. 8± 4. 0
15 15. 2± 2. 9*
30 16. 4± 4. 2*
强的松龙 0. 005 6. 7± 2. 8* *
养正合剂+ 强的松龙 7. 5+ 0. 005 8. 4± 2. 1
15+ 0. 005 10. 7± 3. 4△
30+ 0. 005 11. 1± 3. 8△△
　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
与强的松龙组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01
2. 2. 2　对荷瘤小鼠 DN CB-DT H的影响:昆明种小
鼠 ,雌性 , 50只 ,分成 5组 ,设 1组为正常对照组 ,另
4组小鼠右腋窝下 sc经生理盐水稀释的 S180瘤株
0. 2 mL
[5 ] ,并于接种次日 , 5组小鼠颈背部 sc 2%
DNCB丙酮液致敏 ,致敏后 , 3组荷瘤小鼠分别给予
养正合剂 (剂量为 7. 5, 15, 30 g /kg , ig )连续 9 d,并
在给药 8 d后各组小鼠右耳廓涂以同样量的 DNCB
丙酮液攻击 , 16 h后测量左、右耳廓厚度差 ,结果见
表 3。
表 3　养正合剂对荷瘤小鼠 DNCB-DTH的
影响 (x± s,n= 10)
组别 剂量
( g /kg)
左、右耳廓厚度差
(× 10-2mm )
正常组 - 16. 7± 5. 3*
对照组 - 10. 4± 2. 8
养正合剂 7. 5 9. 3± 3. 4
15 11. 6± 3. 8
30 14. 1± 2. 6*
　　与对照组比较: * P < 0. 01
2. 3　对血清溶血素含量的影响
2. 3. 1　对正常及环磷酰胺免疫抑制小鼠血清溶血
素的影响: N IH小鼠 ,雌雄兼用 ,随机分为正常对照
组、环磷酰胺模型组、养正合剂组及环磷酰胺合用养
正合剂组 ,每组小鼠 sc 20%绵羊红细胞 ( SRBC) 0. 2
mL免疫 ,养正合剂组于 SRBC致敏前 1 d开始给
药 ,连续 7 d,环磷酰胺组与环磷酰胺合用养正合剂
组分别于致敏当日及其后第 3, 5天 ip环磷酰胺 50
mg /kg ,给药 7 d后眼眶取血 ,离心 ,取血清稀释 ,以
稀释血清 1 mL加 5% SRBC 0. 5 mL及稀释的豚鼠
血清 ( 1∶ 10) 1 mL, 37℃温育 20 min,按比色法测
定 ,并计算半数溶血值 ( HC50 ) ,结果见表 4。
表 4　养正合剂对正常及免疫抑制小鼠血清
溶血素含量的影响 ( x± s ,n= 10)
组别 剂量 ( g /kg ) HC50
对照组 - 205. 7± 60. 8
养正合剂 7. 5 210. 8± 70. 2
15 237. 7± 85. 0
30 233. 3± 78. 0
环磷酰胺 0. 05 94. 3± 31. 7* *
养正合剂+ 环磷酰胺 7. 5+ 0. 05 113. 8± 38. 0
15. 0+ 0. 05 121. 7± 32. 6
30. 0+ 0. 05 142. 0± 57. 7△
　　与对照组比较: * * P < 0. 01;　与环磷酰胺组比较: △ P < 0. 05
2. 3. 2　对荷瘤小鼠血清溶血素的影响: N IH小鼠
50只 ,雄性 ,分成 5组 , 1组为正常对照组 ,另 4组小
鼠接种 S180瘤株 ,取 3组荷瘤鼠自接种次日 ig养正
合剂 (剂量为 7. 5, 15, 30 g /kg ) ,连续 9 d,各组小鼠
于接种后第 3天进行致敏。给药 9 d后眼眶取血 ,离
心 ,取血清稀释 ,以稀释血液 1 mL SRBC 0. 5 mL及
稀释的豚鼠血清 ( 1∶ 10) 1 mL, 37℃温育 20 min,
按比色法测定 ,并计算 HC50 ,结果见表 5。
表 5　养正合剂对荷瘤小鼠血清溶血素含量的影响 (x± s )
组别 剂　量
( g /kg)
动物数
(只 ) HC50
正常组 - 10 205. 7± 60. 8* *
对照组 - 10 79. 4± 29. 2*
养正合剂 7. 5 10 108. 1± 33. 6
15 10 115. 4± 31. 3*
30 10 141. 6± 44. 7* *
　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
·55·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 1期
2. 4　养正合剂对大鼠脾细胞产生 IL-Ⅱ的影响:
Wista r大鼠 ,雄性 ,制备脾细胞悬液 ,以 RPM I1640
洗涤 3次后 ,配成 5× 106 cfu /mL悬液 ,加入 ConA
5μg /m L,将含 ConA的细胞悬液分为 5份 ,分别为
空白对照和养正合剂 2. 5, 50, 100, 200μg /mL,置
37℃ 含 5% CO2的培养箱中培养 72 h,吸取上清
液 ,置 - 20℃保存备用。采用 MT T比色法检测 IL-
Ⅱ活性 ,将 CTIL细胞洗涤后配成 2. 5× 105 cfu /mL
悬液 ,在微孔培养板中每孔加入 50μg ,将待测样品
及 IL-Ⅱ标准品作 2倍连续稀释 ,稀释标本再加于
微孔培养板中 ,每孔 100μL,每一稀释度均为复孔 ,
培养 36 h后 ,每孔加 MT T( 5μg /m L) 10μg ,再培
养 4 h,加酸化异丙醇溶解甲 结晶 ,然后将微孔板
放入酶标仪作比色分析 ,测定波长为 570 nm,参比
波长为 630 nm,每孔两个波长处的吸光度 ( A )之差
即为该孔的实测 A值。将待测样品与参比标准品同
时作倍比稀释 ,分别测出二者使检测细胞达到最大
增殖 50%的稀释度 ,按下式计算 IL-Ⅱ活性单位 ,结
果见表 6。
样品 IL-Ⅱ活性单位 ( U /mL)= (样品使检测细
胞达最大增殖 50%时的稀释倍数 /标准品使检测细
胞达最大增殖 50%时的稀释倍数 )×标准品 IL-Ⅱ
活性单位
3　讨论
实验发现养正合剂对调节机体免疫功能及肿瘤
所致的免疫功能降低具有明显恢复作用 ,使正常小
表 6　养正合剂对大鼠脾细胞产生 IL-Ⅱ的影响
(x± s, n= 5)
组别 质量浓度 (μg /mL) IL-Ⅱ活性 ( U /m L)
对照组 - 1. 30± 0. 23
养正合剂 200 2. 95± 0. 81* *
100 1. 58± 0. 06*
50 1. 36± 0. 23
25 1. 55± 0. 44
　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
鼠 K、X 值明显升高 ;可明显对抗环磷酰胺所致小
鼠碳粒廓清速率低下 ,使 K、X值恢复至正常水平。
大剂量养正合剂可明显增加荷瘤小鼠低下的 DTH。
养正合剂还显著增强接种 S180瘤株小鼠低下的血清
溶血素含量 ,并明显促进大鼠脾细胞的 IL-Ⅱ生物
活性。综上所述 ,养正合剂可提高机体的体液免疫和
细胞免疫功能 ,对临床用于癌症患者的辅助治疗有
一定的实际意义。
参考文献:
[1 ]　王柏昆 ,邢善田 ,周金黄 ,等 . 枸杞子多糖对 S180荷瘤小鼠细胞
免疫功能的影响及其抑瘤作用 [ J ] . 中国药理学与毒理学杂
志 , 1988, 2( 2): 127-130.
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能的影响 [ J ]. 第一军医大学学报 , 1990, 10( 3): 267-268.
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[5 ]　徐叔云 ,卞如濂 ,陈　修 . 药理实验方法学 [M ] . 北京:人民卫
生出版社 , 1991.
墓头回诱导脐血基质细胞形成及分泌 GM-CSF的实验研究
赵　丽 ,李兴玉 ,马海珍
⒇
(兰州医学院血液病研究所 ,甘肃 兰州　 730000)
摘　要: 目的　应用细胞培养技术检测了墓头回水提物对人脐血基质细胞生成及其分泌粒系造血刺激因子的实验
研究。 方法　将不同浓度的墓头回水提物与脐血共同培养 14 d,检测基质细胞上清液中的 GM-CSF活性。结果　
墓头回水提物对人脐血基质细胞具有促进形成的作用 ,最高峰为 0. 01μg /m L,为了检测基质细胞上清液中的 GM-
CSF活性 ,进行了 GM-C FU实验 ,结果表明 ,实验各组数据与对照组比较 ,具有非常显著性差异 (P < 0. 01)。结论　
墓头回水提物不仅是一种强烈的抗癌药物 ,也是一种造血祖细胞促进剂。
关键词: 墓头回 ;基质细胞 ; GM-CSF
中图分类号: R285　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 01 0056 03
·56· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 1期
⒇ 收稿日期: 2000-08-18作者简介:赵　丽 ( 1963-) ,女 ,云南省巍山县人 ,硕士学位 ,现任兰州医学院第一附属医院血液科副主任医师 ,副教授。 1984年至今从事血液病的临床、教学及科研工作。研究白血病细胞耐药逆转及外周血造血干细胞移植治疗恶性肿瘤的基础与临床。
Tel: ( 0931) 8625200转 6251　　 E-mai l: lil y jin sh an@ sina. com