全 文 ：从银杏叶中制备聚戊烯乙酸酯
杨小明 1 ,陈　钧 2
( 1. 镇江医学院　江苏 镇江　 212001;　 2. 江苏理工大学生物与环境工程学院 ,江苏 镇江　 212013)
摘　要: 目的　研究银杏聚戊烯乙酸酯的制备技术。方法　以石油醚为提取溶剂 ,获得的石油醚浸膏经硅胶吸附能
除去大部分极性较大的杂质 ;再经制备 TLC分离、脱蜡、制备 TLC纯化得到聚戊烯乙酸酯同系物的混合物。 结果
　经 HPLC外标法测定其同系物的纯度为 84%。 结论　该方法简便易行 ,大大降低了工作量。
关键词: 银杏 ;聚戊烯乙酸酯 ;制备
中图分类号: R284. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 05 0392 03
Preparation of polyprenyl acetates from leaves ofGinkgo biloba
YAN G Xiao-ming1 , CHEN Jun2
　　 ( 1. Zhenjiang M edical Co llege , Zhenjiang Jiang su 212001, China; 2. Bio-envi ronment Co lleg e, Jiang su Univ ersity of
Science and Technolog y , Zhenjiang Jiang su 212013, China)
Abstract: Object　 To develop a method fo r the separation and purification o f polypreny l aceta tes f rom
the leaves of Ginkgo biloba L. Methods　 Lipids, including po lyprenyl acetates w ere ex t racted by pet ro leum
ether, and adsorbed by silica gel to remove most of the po lar impurities. Af ter removing w ax from the pa r-
tially puri fied ex t ract, i t wa s further puri fied wi th silica gel chroma tog raphy. Results　 Finally , a mix ture
o f homolo gues polyprenyl acetate was obtained. The puri ty of which as determined by HPLC ex ternal
standa rd method w as 84% . Conclusion　 This procedure is simple and relativ ely ef fectiv e.
Key words: Ginkgo biloba L. ; po lypreny l acetates; preparation
　 　银 杏叶 中的 聚戊 烯 乙酸 酯 ( polyprenyl
acetates )是具有 2个反式 -异戊烯基、若干个顺式 -
异戊烯基和α-乙酰氧基所组成的线型长链化合物。
因该类化合物独特的结构 ,被认为是合成哺乳动物
中具有重要生理功能的多萜醇 ( do lichol )的合适中
间体。 哺乳动物中的糖基化多萜醇磷酸酯可作为糖
的供体 ,在寡糖合成中作为糖基转移酶的底物 ;多萜
醇磷酸盐是 N -配糖体连接低聚糖链生物合成的专
一中间体 [1, 2 ]。银杏聚戊烯乙酸酯是 Grigna rd偶合
法人工合成多萜醇的原料。 波兰科学院生物化学和
生物物理研究所与日本 Curaray Co. Ltd. 对植物
尤其是银杏中的聚戊烯类化合物的提取纯化和多萜
醇的合成等方面做了大量工作 ,通过反复多次柱色
谱分离已从银杏叶中提取出纯度达 99%的聚戊烯
醇 ,并通过结构修饰转化成 ( S )-多萜醇 [3 ]。 目前 ,已
有关于银杏叶聚戊烯乙酸酯合成多萜醇药物的多项
专利 [4～ 7 ]。
我国目前对该聚戊烯类化合物的研究较少。有
关银杏叶中聚戊烯乙酸酯的提取分离仅有少量报
道 [8, 9 ]。本文在前人研究的基础上研究了银杏聚戊烯
乙酸酯的提取方法 ,采用硅胶吸附法除去银杏叶石
油醚浸膏中极性较大的杂质 ,较文献报道直接将石
油醚浸膏进行柱色谱分离 ,大大降低了工作量。
1　实验部分
1. 1　原料与试剂:银杏叶采摘自江苏理工大学校园
树龄 30年以上的雄性银杏树 ,采摘后洗净、烘干、碾
碎、加干燥剂密封保存。银杏聚戊烯乙酸酯同系物混
合物标准品由日本 Curaray Co. Ltd. , T. Taki-
gaw a博士赠送。 100～ 200目柱层析用硅胶 (上海五
四化学试剂厂生产 )。薄层层析用硅胶 GF254 (中国医
药集团上海试剂公司 )。所用试剂正己烷、石油醚 (沸
程 60℃～ 90℃ )、乙酸乙酯、丙酮和氢氧化钠为分
析纯。水为重蒸水。 HPLC流动相用正己烷、异丙醇
HPLC级 (美国 Tedia公司 ) ;甲醇 HPLC级 (美国
Fisher公司 )。
1. 2　仪器分析及条件: 立式薄层层析缸 (长 12 cm
×高 12 cm×宽 5 cm玻璃缸 ) ;薄层硅胶板 60F254 ,
层厚 0. 2 mm (德国 Riedelde Haen公司 ) ; Wiret rol,
·392· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期
收稿日期: 2000-08-25基金项目:国家自然科学基金资助项目 No. 29976018作者简介:杨小明　女 ,镇江医学院讲师 , 2000年毕业于江苏理工大学获硕士学位。 研究方向:天然产物有效成分的提取及活性。
Tel: ( 0511) 8780196　　 Emai l: sh ch en@ jsust . ed u. cn
10μL玻璃毛细点样管 (美国 Drummono Scientific
Company公司 ) ;薄层层析以正己烷-乙酸乙酯 ( 9∶
1)为展开剂 ,碘蒸气显色。
JASCO高效液相色谱仪配置如下: DG-980-50
三通道脱气器 , LG-980-02三通道梯度器 , PU-980
HPLC泵 , TU-300分析柱恒温箱 , UV IDEC-100-V I
紫外分光检测器 (以上为日本分光株式会社 ) ; Iner t-
si l ODS-3( 5μm, 4. 6 mm× 250 mm)高效液相色谱
分析及保护柱 (日本 GL Sciences Inc. 公司 ) ; 10, 20
μL进样器 ( M ICROLITER○R# 701美国 ) ; Rheo-
dyne Model 7125进样阀 (美国 Rheodyne公司 ) ;
0. 45μm微孔滤膜 (浙江台州路桥四青生化材料
厂 ) ; N2000型色谱工作站系统 (浙江大学智能信息
工程研究所 )。 流动相为异丙醇 -甲醇 -正己烷-水
( 220∶ 110∶ 45∶ 8) ,流量 1. 0m L /min,炉温 38℃ ,
UV检测器 ,检测波长为 210 nm。
1. 3　样品制备:样品的制备流程见图 1。
　　　　　　银　杏　　　　　 石油醚过滤
　　 　　　　　　　　　　　
滤　渣　　　　　　　　石油醚浸膏　　　　　　　　　　　
　　　　　　　硅胶吸附、正己烷洗脱　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　制备薄层初步分离　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　制备薄层纯化
图 1　聚戊烯乙酸酯分离图
称取 50. 0 g 20～ 40目的银杏碎叶浸泡于 250
m L石油醚中 ,于室温 ( 10℃～ 15℃ )间歇搅拌 7 d,
减压过滤 ;滤渣浸入 250 mL石油醚 ,于室温搅拌 10
h后 ,分离提取液并再重复提取 1次。在滤渣中再加
入石油醚搅拌后 ,作 T LC检测 ,以聚戊烯乙酸酯标
准品为对照 ,发现经 3次提取银杏叶中的目的物已
基本提净 ,合并、挥去滤液后得 3. 4 g墨绿色浸膏。
将该浸膏用少量正己烷溶解 ,以一定比例的柱层析
用硅胶吸附。再以正己烷为洗脱液进行洗脱 ,洗脱液
以 TLC检测 ,至无聚戊烯乙酸酯为止。挥去正己烷
得红棕色膏状物。将该膏状物溶于少量正己烷中 ,在
活化好的硅胶制备板上点样 ,以正己烷 -乙酸乙酯
( 95∶ 5)为展开剂上行展开。展开结束 ,捕吸 Rf值较
大的第二条黄色条带 ,以乙酸乙酯洗脱后 ,作 TLC
检测与标准聚戊烯乙酸酯对照 ,确认为含聚戊烯乙
酸酯的混合物。将收集得到的该红棕色物质用 50倍
的丙酮溶解后 ,置于 0℃保存 10 h ,蜡质呈白色絮状
析出 ,用 0. 45μm滤膜迅速抽滤 ,除去大部分冷藏
时析出的蜡质。 除蜡后 ,降低展开剂的极性 ,再经制
备薄层作进一步的纯化。用展开剂正己烷 -乙酸乙酯
( 97∶ 3)进行二次展开 ,分离出 Rf约为 0. 5的黄色
条带。洗脱后经 TLC检测显示 1个斑点 ,确定为聚
戊烯乙酸酯。以 HPLC外标法进行纯度测定。
1. 4　聚戊烯乙酸酯外标曲线的测定:聚戊烯乙酸酯
的定量分析主要依靠 HPLC来完成。有关聚戊烯乙
酸酯的反相 HPLC分析方法的报道并不多见 ,本文
采用异丙醇-甲醇-正己烷 -水 ( 220∶ 110∶ 45∶ 8)为
流动相 ,以 ODS3分析柱成功地对聚戊烯乙酸酯的
纯度进行了测定 (分析条件见 1. 2) ,在该分析条件
下 ,聚戊烯乙酸酯各同系物获得良好的基线分离 ,由
此建立了由外标法测定聚戊烯乙酸酯含量的方法。
准确称取 25. 0 mg银杏叶聚戊烯乙酸酯标准
品 ,配成 50. 00 mL的正己烷溶液 ,取该溶液 2. 0
mL稀释成 10. 00 m L的正己烷溶液。配成的浓度为
0. 100 mg /mL的聚戊烯乙酸酯标准溶液经针头过
滤器过滤后 ,分别以 6. 0, 10. 0, 14. 0, 16. 0和 20. 0
μL进样 ,每个体积平行进样 3次 ,取平均值。将聚戊
烯乙酸酯 5个主要同系物的峰看作一个组分进行处
理 ,作出聚戊烯乙酸酯 5个主要峰面积之和与进样
量 (μg )之间的对应关系曲线 ,可得聚戊烯乙酸酯的
外标曲线回归方程为: Y= 0. 637 5X - 0. 034 7, r=
0. 998 1。检测下限参考其他研究者的处理方法 [10 ] ,
按背景噪音的 3倍量估算为 0. 12μg。因此该方法的
检测线性范围为: 0. 12～ 2. 0μg。
2　结果与讨论
2. 1　硅胶吸附除杂的作用:聚戊烯乙酸酯处于银杏
叶的强亲脂性部位 ,用石油醚多次提取可提取出绝
大部分的聚戊烯乙酸酯。 在银杏叶的脂溶性部位中
除聚戊烯乙酸酯外 ,还有易溶于非极性有机溶剂的
胡萝卜素、叶绿素、蜡质、脂肪酸等杂质。为了除去银
杏叶石油醚提取物中极性较大的杂质 ,本试验中采
用了硅胶吸附的方法。硅胶是一种极性吸附剂 ,能够
吸附极性较强的成分 ,而对极性相对较弱的成分的
吸附能力较差。 银杏叶的石油醚提取物经硅胶吸附
后 ,再用极性较弱的溶剂将弱极性成分洗脱 ,而极性
较强的成分保留在硅胶上 ,从而达到除去杂质的目
的。经硅胶吸附处理后 ,用正己烷洗脱得到的洗脱液
为红褐色。提取液中的叶绿素、鞣质、有机酸等极性
较大的组分被吸附在硅胶上。 而蜡质、胡萝卜素、小
分子萜类、聚戊烯乙酸酯等被洗脱。硅胶吸附处理能
除去大部分极性较大的杂质 ,大大减轻了后续分离、
·393·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期
纯化步骤的工作量。
2. 2　制备聚戊烯乙酸酯的纯度测定: 称取 14. 9 mg
制备的聚戊烯乙酸酯配成 50. 00 mL正己烷溶液 ,
稀释成 0. 178 8 mg /mL的正己烷溶液 ,以 HPLC外
标法检测其纯度。 聚戊烯乙酸酯同系物的峰型分布
见图 2。经测定提取的聚戊烯乙酸酯纯度为 84%。所
提取得到的聚戊烯乙酸酯各主要同系物的链长 ,经
与标准品 (见图 3)对照可能为聚戊烯乙酸酯 -16, -
17, -18, -19和 -20(简写为 PA-17, PA-18, PA-19和
PA-20)。 其准确链长有待通过液相色质仪确定。
图 2　制备的聚戊烯乙酸酯的 HPLC图
图 3　聚戊烯乙酸酯标准品的 HPLC图
比较聚戊烯乙酸酯标准品和自制的聚戊烯乙酸
酯的 HPLC图可见 ,二者都以聚戊烯乙酸酯 -18的
峰高为最高 ,而聚戊烯乙酸酯 -17和-19的峰高则有
所不同。标准品中聚戊烯乙酸酯-16, -17, -18, -19和
-20各同系物的含量分布按其 HPLC面积比约为
6. 3∶ 27. 32∶ 39∶ 19∶ 7. 51;而自制的聚戊烯乙酸
酯各同系物的含量按其 HPLC面积比约为 1. 3∶
17. 4∶ 44. 4∶ 22. 5∶ 14. 5。这种聚戊烯乙酸酯同系
物分布的差异可能与植物生长的地域不同有关。
3　结论
银杏叶石油醚提取物中除含有聚戊烯乙酸酯
外 ,还含有叶绿素、胡萝卜素、脂肪酸、蜡质、碳氢化
合物等。该提取物经过硅胶吸附除杂、制备薄层分
离、脱蜡和制备薄层纯化后 ,所得产物经 T LC检测
显示 1个斑点 ,确定为聚戊烯乙酸酯同系物的混合
物。再经 HPLC测定该聚戊烯乙酸酯同系物的混合
物纯度为 84% ,其同系物主要链长可能为聚戊烯乙
酸酯 -16, -17, -18, -19和-20。
致谢:本试验所用标准品由 T. Takig aw a博士
赠送 ,在此表示衷心感谢!
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