全 文 ：冬虫夏草及其代用品有效成分比较研究
山东省临朐县中医院( 262600) 吴洪臻 董新红 马德恩
辽宁省丹东市药检所 颜春华
辽宁中医学院 孟 舒 姜 泓 刘 珂
冬虫夏草 Cordy cep s sinensis ( Berk. ) Sacc 为
子囊菌门麦角菌科虫草属药用真菌, 生产于西藏、青
海、四川、云南等地。由于冬虫夏草的野生资源十分有
限, 人工培育这一研究课题引起了国内学者的关注,
东北地区的学者培育出蚕蛹虫草及人工蛹虫草子实
体并先后通过了国家科委组织的专家鉴定。由国家专
利局 1993 年公布,经化学、药效、毒理等系列实验研
究, 结果表明, 它们所含虫草素、甘露醇等成分均达到
或超过名贵中药冬虫夏草, 而且证明三者都具有滋
补、强壮、抗疲劳、抗衰老、增强免疫力和性功能的作
用, 本文对虫草属的主要有效成分——核苷类成分进
行比较研究,为虫草的质量考察提供科学依据。
1 实验材料
1. 1 冬虫夏草由山东中医学院提供并鉴定为
Cordy cep s sinensis; 人工蛹虫草子实体由山东中医
学 院 提 供 经鉴 定 为 C. mil itar is of artif icial
sorophor c; 蚕蛹虫草由辽宁丹东市药检所提供经鉴
定为C. mili tari s of silkw orm。
1. 2 对照品:虫草素( Sigma 公司) , 腺苷及 N 6-甲
基腺苷为辽宁省丹东市药检所提供, HPLC 分析与
薄层层析证明为单一成分。
2 薄层色谱鉴别
2. 1 薄层板的制备: 硅胶 GF 25410 g 加 0. 1% CMC
和 0. 1 mol/ L 磷酸氢二钠( Na2HPO 4·12H2O)溶液
各 15 mL 调匀铺板 7 块放置备用必要时烘干。
2. 2 供试液制备:分别取冬虫夏草、蚕蛹虫草、人工
蛹虫草子实体粉末各 3 g 加 20%乙醇溶液 60 mL
超声处理 30 min, 滤过,滤液浓缩至 10 mL, 然后将
滤液通过硅胶 H 干柱用 90%乙醇溶液 60 mL 冲
洗,收集洗脱液浓缩至干, 残渣用 50%乙醇溶液定
容至 5 mL 作为供试品液, 另取虫草素,腺苷, N 6-甲
基腺苷对照品用 50%乙醇水溶液制成每 1 mL 含
0. 2 mg 作为对照品液。点样量各 8 L。
2. 3 薄层色谱: 展开剂以氯仿-乙酸乙酯-异丙醇-
浓氨水( 8∶2∶6∶0. 6)为展开剂(中国医学科学院
药物研究所主编 . 中草药现代研究 . 北京: 中国医
学科学院中国协和医科大学联合出版社, 1995: 91) ,
展开至 5 cm 取出晾干,置紫外光灯( 254 nm)下检
1-虫草素 2-腺苷
3-N 6-甲基腺苷
4-人工蛹虫草子实体
5-天然冬虫夏草
6-蚕蛹虫草
图 1 冬虫夏草、
蚕蛹 虫草
和人 工蛹
虫草 子实
体薄 层色
谱图
视结果见图 1。
图 1结果可见在绿色背景下
有黑色斑点。人工蛹虫草子实体,
蚕蛹虫草都含有虫草素, 人工蛹
虫草子实体的虫草素斑点深于蚕
蛹虫草中虫草素的斑点, 三者都
含有腺苷,而N 6-甲基腺苷仅在人
工蛹虫草子实体中存在。
3 高效液相色谱法鉴别
3. 1 仪器与试剂
仪器: 日本日立公司 L-7000
系列高效液相色谱仪, D-7500 积
分仪, CSF-1A 超声波发生器(上
海超声波仪器厂)。试剂:甲醇为色
谱纯,水为重蒸水, 其它为分析纯。
3. 2 方法与结果
3. 2. 1 液相色谱条件: 色谱柱
Nucleo sil-100C18反相柱 4. 6 m×
250 mm×5 m, 流动相甲醇-水
( 15∶ 85) 临用前以微孔滤膜
( 0. 45 m)过滤并经超声波脱气处理, 流速 1 mL/
m in检测波长 260 nm 检测灵敏度 0. 1 AUFS 柱温
为室温。
3. 2. 2 样品分析:分别精密吸取用于薄层层析的供
试品溶液 1 mL 置 10 mL 容量瓶中加 50%乙醇水
溶液稀释至刻度摇匀, 溶液经微孔滤膜( 0. 45 m)
滤过作样品溶液。于上述色谱条件进样每次 6 L,
样品色谱图见图 2。
Ⅰ-人工蛹虫草子实体 Ⅱ-冬虫夏草 Ⅲ-蚕蛹虫草
1-腺苷 2-虫草素 3-N 6-甲基腺苷
图 2 人工蛹虫草、冬虫夏草和蚕蛹虫草的 HPLC
色谱图
·576· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2000 年第 31卷第 8期
通过 HPLC 色谱图可明显看出 3 种药材不仅
在虫草素、N 6-甲基腺苷、腺苷等成分上有明显区别,
而且人工蛹虫草子实体 tR 在 28, 30 min左右有一个
色谱峰而冬虫夏草 t R 在 9 m in之后无峰。
4 讨论
4. 1 由于冬虫夏草生态环境的构成十分复杂, 产量
少远远不能满足药用。培养虫草菌的无性型以进行
其代用品的研究有其深远意义。
4. 2 核苷类成分作为虫草属的主要有效成分是控
制虫草质量的重要指标之一。由于核苷类成分极性
较大且显碱性薄层层析时易产生拖尾, 所以采用碱
板并在展开剂中加入氨水以防止其解离。
( 1999-03-29收稿)
生菜茎叶挥发油的研究
白求恩医科大学基础医学院 (长春 130021) 赵春芳 李平亚 张 宏* * 周明娟
菊科植物莴苣属生菜 Lactuca sativa L. 为一年
生草本植物。据报道,其干燥种子注射液具有降低血
压、减慢心律、降低血脂和抗动脉粥样硬化及抗心律
失常作用[ 1～4] ,但目前关于其挥发油方面的研究尚
未见报道。本文对生菜茎叶挥发油成分进行了初步
研究,经过水蒸气蒸馏提取,利用 GC-MS 计算机联
用技术进行测定分析,确定了35个化合物及其相对
含量。
1 挥发油的提取
新鲜生菜茎叶 9 kg , 经过水蒸气蒸馏, 乙醚萃
取,无水硫酸钠干燥后,得到挥发油 0. 5 mL, 保存在
乙醚液中。
2 分离鉴定
2. 1 气相色谱条件: GC: 美国惠普 HP 6890 MSD
色谱仪。毛细管柱: HP-5石英毛细管柱 25 mm×
0. 32 mm。进样量: 1 L。载气: He。柱前压: 133. 16
kPa。分流比: 30∶1。进样口温度: 265℃。程序升温
条件: 65℃ 5℃/ min 125 ℃ 8℃/ m in 260 ℃
2. 2 质谱条件:美国 HP MS 5973型质谱仪。电离
方式: EI。离子能量: 70 eV。离子源温度: 200℃。电
子倍增器电压: 2 400 eV。扫描范围: 33～450 amu。
2. 3 GC 6890/ MS 5973计算机联用仪: 美国惠普
公司。
3 结果与讨论
3. 1 实验结果:取挥发油 0. 1 L 进样,进行分离鉴
定,将所得的质谱与标准的图谱比较确定化合物,同
时根据归一化法计算相对含量, 结果(相对百分含
量)如下: 苯乙基醇 1. 27, 2-乙基乙酸 2. 01,苯并噻
唑3. 22, 丁酸丁酯 1. 28,苯乙酰胺 1. 97, 4, 8, 8-三甲
基-9-甲撑-1, 4-十氢甲撑 2. 04, 2, 6, 10, 14-四甲
基正十五烷 3. 01, 1, 13-十四碳二烯 0. 76, 菲 8. 49,
二苯乙炔 1. 40, 2, 6, 10, 14-四甲基正十六烷 3. 48,
咔唑 1. 53, 1, 2-苯二羧酸( 2-甲基丙基)酯 8. 31, 1-
十八碳烯 1. 89, 9-甲基蒽 2. 05,四氢环戊菲1. 29, 十
六酸甲酯 1. 97,十六酸 3. 06, 二十烷 2. 69, 2, 6, 10-
三甲基十二烷 1. 62, 二十烷 3. 20, [ Z, Z, Z] -9-12,
15-十八碳三烯羧酸甲酯 0. 86, 芘 5. 03, 苯并[ b]萘
并[ 2, 3-d]呋喃 0. 68, 2, 6, 10, 14, 18-五甲基十九烷
0. 74, 1-二十碳烯 1. 25, 4-十八碳烯 3. 82, 乙基环二
十二烷 1. 03,十一烷基环己烷 1. 31, [ Z] -9-十八烯-
2-乙醇醚 1. 23,三亚苯 1. 18, ( E) -3-二十碳烯 6. 98,
二十二烷酸甲酯 3. 02, 邻苯二羧酸双( 2-乙基己基)
酯 1. 10, 1-氯二十七烷 2. 87。
3. 2 讨论:通过研究发现生菜茎叶挥发油中含有近百
种成分,经过计算机检索鉴定了 35 个化合物, 占总含
量的87. 64%,其中菲, 1, 2-苯二羟酸双( 2-甲基丙基)
酯, 芘及( E ) -3-二十碳烯含量较高, 分别为 8. 49% ,
8. 31%, 5. 03%及 6. 98%。另外, 研究发现生菜很难
被害虫侵蚀, 为了探索其中的奥秘,我们首先对其茎叶
挥发油进行了研究。有关生菜中化学成分的对各种害
虫的拒避实验及其他生物活性正在研究之中。
参 考 文 献
1 边学义,赵士林,高清溢,等 . 锦州医学院学报, 1982, 3( 2) : 20
2 边学义,李桂攀,付振华,等 . 中西医结合杂志, 1985, 5( 3) : 184
3 王维芝,边学义,王化洲,等 . 中草药, 1992, 23(7) : 366
4 王维芝,肖志洁,边 原,等 . 中国中药杂志, 1995, 20( 1) : 50
( 1999-04-23收稿)
·577·中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2000 年第 31卷第 8期
赵春芳 女, 33岁,讲师,硕士。从事天然药物化学研究,共发表论文 7篇。
* * 东北师范大学