全 文 ：尸内
行廿
廿口刁月己占
司
。 压片 一 ‘ 宽峰 ,
, , , , , ,
。 ‘ 一 见表 。
化合物 羊齿烯醇 , 分子式 ,
一 。 无色针晶 氯仿和甲醇混合液 。
’ , , 基峰 , , ,
, , , , , , , , , 。
致谢 承 蒙本所仅器分析 中心各位 同仁
帮助汉定 、 、 及 、 一 谱
图 。
参 考 文 献
江苏省植物研究所 , 等 新华本草纲要 第 册 上
海 上海科技出版社 ,
江苏新医学院 中药大辞典 上册 上海 上海科技
出版社 ,
,
,
, ,
, ,
, 创 ,
一 , 尸 ,
, ,
, ,
, ! ∀ # ∃ ∃ % & ∋ ∀ ( ! , 1 9 8 0 ; 1 9 : 2 6 8 5
A
s
a
k
a
Y
, e t a l
. 丁’ e t r a h e d r o n , 1 9 6 2 ; 1 8 : 1 0 4 6
K
n i g h
t s
B A
.
J G
a s
C h
r o n l a t o g r
,
1 9 6 7
; 5
:
2 7 3
H
e s s e
M
, e t a
l
.
H
e
l
v
C h i m A
e t a ,
1 9 6 5
;
4 8
:
6 7 4
B i
s s e t
N G
, e t a
l
.
T
e t r a
h
e
d
r o n , 1 9 7 3 ; 2 9
:
4 1 3 7
( 1 9 9 7
一
0 7
一
0 2 收稿 )
C hem ieal C on stituen ts from M aq ian zi (S try eh nos nu x一 v o m i e a )
l 才i u X i k u i a n d L i W
e i ( L
a b o r a t o r y o f p h y t
o e h e m i
s t r y
,
K
u n
m i
n
g I
n 乒titu te of B ota ny , C h i n e s e A e a d e m y o f
S
e
i
e n e e s
,
K
u
m i
n g 6 5 0 2 0 4 )
A b s t
r a e t B y m
e a n s o
f
s
i l i
e a
g
e
l
a n
d
a
l
u
m i
n u
m
o x i d
e
C C
, s
i x
e o
m p
o u n
d
s
w
e r e
i
s o
l
a t e d f
r o
m S
t 即chnos
nux 一 v o m i c a L 二 A e e o r d in g to s p e e tr a l a n d p h y s ieo 一e h e m i e a l d a t a , t h e y w e r e i d e n t i f i e d a s s t r y e h n i n e ( I ) , v o m -
i
e
i
n e
( 亚) , l o g a n i n ( 皿 ) , u r s o l i e a e i d ( IV ) , s t i g m a s t e r o l g l y e o s i d e ( V ) a n d s i m i a r e n o l ( VI ) . A m o n g t h e m , V w a s
。 n e w C o m p o u n d , w a n d vl w e r e o b t a i n e d f此m 5 .、 u 二 一v o m , e a f o : t h e f i r s t t i m e ,
K
e
y w
o
r
d
s
5
2 卿chnos nu艾一 v o n Z i c a s t i g m a s t e r o l g l y e o s i d e s i m i a r e n o l l o g a n i n
大黄愈伤组织化学成分的研究
北京医科大学药学院 (100083) 普宽科 米 俘文 勇 胡 蓉 果德安 郑俊华 王 夔
摘 要 从大黄的愈伤组织中分到 7 种成分 , 经化学和光谱方法鉴定它们的结构为 :大黄酚 ( I ) 、
大黄素甲醚 ( 亚 ) 、俘一谷街醇 (l ) 、芦荟大黄素(w )、大黄素(v ) 、 d 一儿茶素( u )和 3‘ , 4 , , 5 ‘一三轻 甲基
苯甲酞葡萄糖(VI ) 。
关键词 大黄 愈伤组织 化学成分
大黄是我国临床最常用 的中药之一 , 素
有 “将军 ”之称 , 在中药复方中应用相当广泛 ,
有 “泻热通 肠 、凉血解毒 、逐癖通经 、攻积导
滞 、利胆退黄 ”之功 效〔‘〕 , 《神农本 草经》称大
黄 “主下疲血 、血闭 、寒热 、破症瘦积聚 、留饮 、
宿食 、荡涤肠 胃 、通利水谷 、调中化食 、安和五
藏 ” 。对大黄 的化学成分研究 已有一百多年历
史〔2〕 , 研究工 作者 已从其同属植物中分离到
葱醒类 、苗类 、苯丁酮 昔类 、棘质类 、色 原酮
类 、蔡类 、有机酸 、糖 、蛋 白质 、 幽醇等 15 。多
种成分 , 然而 , 由于其在中药中的重要性 , 对
其化学成分的研究仍在继续 。
组织培养相对于 自然界条件来说 , 具有
生长周期短 , 生长条件和 自然相差较远 , 次生
Address:Lu K uanke , C o l l e g e o f P h a r m a e y , B e i j i n g U n i v e r s i t y o f M e d z e a l S e i e n e e s , B e i j i n g
4 3 8
·
代谢途径 、步骤 和代谢产物可能和 自然界不
相同的特点 , 因此 , 利用组织培养也就成为一
个寻找新的药用成分的方法 。
对大黄的组织培养方面的研究不多 , 且
大都集中于各种因素 (培养基成分 、激素 、光
照等)对大黄愈伤组织中葱醒类化合物含量
的影响 〔3 一 5〕 。 只见到 T sut o m u 等 〔4〕人从大黄
愈伤组织中分离得到大黄酚 。 我们对大黄的
愈伤组织的化学成分进行了深入的研究 , 从
中分离到 12 个化合物 , 鉴定了其中 7个化合
物 。 它们是大黄酚 ( I ) 、大黄素甲醚 ( l )、日-
谷街醇 ( l )、芦荟大黄素 ( W ) 、大黄素( V ) 、
d
一 儿茶素 (VI ) 、 3’ , 4’ , 5’一三轻 甲基苯 甲酞葡
萄糖 (呱 ) 。 另 5 个化合物正在鉴定中 。
l 材料和仪器
大黄种子 1995 年购于陕西 陇县 , 原植物
由我校药学院天然药物 系生物技术室郑俊华
教授鉴定为掌叶大黄 R heu m pal 从at u m l洲 . ,
琼脂粉为北京原平生物技术有 限公司产品
(进 口分装 ) , 柱 层析 用 硅胶 (200 目 ~ 30
目) 、薄层层析用硅胶 G 、 H 均为青岛海洋化
工厂产品 , 柱层析用聚酞胺为江苏无锡生化
制品厂产品 , 聚酞胺薄膜为浙江黄岩四青生
化 材 料 厂 产 品 , S 叩had ex 一 L H 一 20 是 德 国
Ph arm aeia 公司产品 。 培养基为 M S 培养基
中附加蔗糖 3 % 、琼脂粉 0.7% 、 B A P I . 0 m g /
L
、
N A A 1
.
0 m g /l
、
2
,
4
一
D 1
.
0 m g 江矛 以 及
E u :飞 1 · O n l g
/
L
, 灭菌 (一2 0 一( _ ‘ , 2 5 m i n ) 前将培
养基的 pH 调到 5. 8 :所有有机溶剂均为国产
分析纯 。
熔点仪 为 X 一 4 型 (北京 电光科学仪 器厂
生 产 , 温 度未 校 正 ) ;核磁共振仪 为 Br uk er
A R X 400 型 , T M S 内标;质谱仪 为 V 6一 m m -
7 o H 型 ;红外光谱仪为 Perlkin 一 E l m e r 9 8 型 ;
高 效 液 相 色 谱 仪 为 LK B 公 司 生 产 的
L K B 250 型 , 反相色谱柱是北 京潮声技术开
发公 司生 产 的 C S 一 1 0 0 0 型 (4. 6 m m 又 2 5 0
rn tn ) ;U V 监测器波长为 290 nm 。
2 大黄无菌苗的培养
掌叶大黄种子经 自来水漂洗一夜后 , 用
《中草药 门 9 98 年第 29 卷第 7期
0 . 1 % H g C1 2溶液表面灭菌 10 m in , 用无菌水
洗涤 5 次一6 次 , 放置过夜 , 再用 0. 1 % H gC1 2
溶液表面灭菌 10 mi n , 无菌水洗涤 5 次~ 6
次后 ,接种于不含任何激素的 M S 培养基上 ,
室温下培养成幼苗以备用 。
3 大黄愈伤组织的诱导及培养
将上述无菌条件下培养的大黄幼苗 , 在
无菌条件下切成 。. 5 cm 长的段或片 , 接种于
M S 培养基上 , 在室温 (20 ℃ ~ 30 ‘C ) 下培养
Zo d , 得到大黄的愈伤组织 , 选择那些色白、
长势 良好大黄愈伤组织 , 转移到新的 M S 培
养基上 , 再继代培养 2 个月 ,大部分大黄愈伤
组织生长基本停止 , 外观颜色 已经变成褐色
时 收 获 , 在 室 温 下 风 吹 晾 干 , 共 得 干 重
32 3.85 9 愈伤组织 。
4 提取和分离
大黄愈伤组织粉碎后 , 用 甲醇热 回流提
取至提取液近无色 为止 。 蒸去甲醇得 甲醇浸
膏 10 7.8 9 , 将浸膏悬浮 于 90 m L 的热水
中 , 依次 用石油醚 (60 C ~ 90 C )、 乙 醚 、 乙
酸 乙醋和正丁醇萃取 。 蒸去萃取溶剂得到石
油醚萃取物 6.4 9 , 乙醚萃取物 2. 6 9 , 乙酸乙
醋萃取物 3.7 9 和正丁醇萃取物 10 .2 9 。 经
T L C 分析 , 石 油醚萃取 物 、 乙醚萃 取物的化
学成分相近 , 将其二者合并 , 在 20 目~ 30
目的硅胶柱上梯度洗脱 (石 油醚 一乙酸 乙酷
25 : 1一1 : 1 ) , 得到化合物 I 一 v , 再分别进
行重结晶得 到纯 品 I (25 m g ) , l ( 1 7 m g ) ,
l ( 3 0 m g )
,
W
( 8 m g )
,
V ( 2 0 m g )
。
乙酸乙 醋部分 、 正丁醇部分经硅胶柱层
析 (C H C1 3一 C H 3 0 H 梯度洗脱 )、 聚酞胺柱 层
分离(纯 甲醇洗脱 )、再经 S即hdex 一 L H 一 20 柱
(纯 甲醇 洗脱 )和 H PI 无 分离 , 分别得 到 vI
(15 m g ) , 珊 ( 1 2 m g ) 。
5 鉴定
化合物 I :黄 色针 晶 (乙 酸 乙醋 ) , m p
1
97 C
, 硅胶 T L C 的 R f值与大黄酚标准品
一致 , 与标 准 品大黄 酚混 合 , 熔 点 不下 降 。
且‘H N M R 与文献如报道一致 , 因此确定 I
为大黄酚 。
·
4 3 9
·
化合物 l :黄色针 晶 (乙 酸 乙醋 ) , m p
20
6 ℃一 20 8 ℃ , 硅胶 T L C 的 R f 值与大黄
素甲醚标准品一致 , 与标准品大黄素甲醚混
合 , 熔点不下降 。 ‘H N M R 与文献〔7〕一致 , 故
确定 亚为大黄素甲醚 。
化合物 l :无色针晶 , m p 13 6 ℃ ~ 13 8
℃ , 硅胶 T L C 与 件谷街醇标准品 R f值一致 ,
与标准品 p一谷 街醇混合 , 熔点不下降 。 经
H PL C 分析 ,保留时间与 p一谷街醇一致 , 因此
确定 l 为 月一谷街醇 。
化合物 W :橙黄色针晶 (乙酸 乙酷) , m p
2
4 ℃一2 5 C , 硅胶 T L C 与标准品芦荟大
黄素的 R f值一致 , 与标准品 芦荟大黄素混
合 ,熔点不下降 。 E I M S 给出分子离子峰为
270 。 经 H P LC 分析 , 保留时间和标准品芦荟
大黄素一致 , 故确定 W 为芦荟大黄素 。
化合物 V :黄色针晶 (乙酸 乙醋 )。 m p
25
5 ℃ ~ 25 6 ℃ , 硅胶 T LC 与标准品大黄素
的 R f值一致 , H P L c 分析 , 保留时间和标准
品大黄素一致 。与标准大黄素混合 , 熔点不下
降 ,故确定 V 为大黄素 。
化合物 VI :无定形粉末 , 与标准品 d 一儿
茶素对照 R f值一致 。 ‘H N M R 数据与文献 〔的
完全一致 , 故确定为 d一儿茶素 。
化合物 vI :FeC1 3反应为深蓝色 , 示 为酚
类化合物 , I R ( K B r ) 。m 一 ‘ : 3 4 3 4 , 1 7 1 2 , 1
6 2 1
,
1 5 4 7
,
1 4 4 7
。 ‘H N M R ( C D
3O D ) P P m :
7
.
1 1 ( Z H
,
s
,
C
Z
, ,
6
, 一
H )
,
5
·
6 5 ( I H
,
d d
,
J
l
=
2
.
4 8 H
z
,
J
:
= 5
.
5 6 H
z
,
C
l 一
H )
,
4
.
6 0 ( 3 H
,
s
,
C
3
, ,
4
, ,
5
, 一
O H )
,
3
.
8 6
~
3
.
4 2 ( 6 H
,
C
Z
,
3
,
4
,
5
,
6
-
H )
。 ‘3 C N M R 及 D E P T 135“ ( C D 3 O D ) P P m :
1 6 6
.
9 0 ( 碳基 ) , 1 4 6 . 3 2 ( 季碳) , 1 4 0 . 1 8 ( C 3 ,
C
S ,
)
,
1 2 0
.
5 5 ( 季碳) , 1 1 0 . 3 8 ( C H , C Z , , C 6 , ) ,
9 5
.
7 7 ( C H
,
C
l
)
,
7 8
.
6 2 ( C H
,
C
:
)
,
7 8
.
0 0 ( C H
,
C
3
)
,
7 3
.
9 3 ( C H
,
C
Z
)
,
7 0
.
9 1 ( C H
,
C
4
)
,
6 2
.
1 5
( C H
: ,
C
6
)
。 ‘H N M R 和‘3 C N M R 数据与文献
报道一致〔9〕 , 故确定为 6一 0 一 3 ‘ , 4 ‘ , 5 ‘一三经基
苯酞基葡萄糖(6一 O 一 g a l l o y l g l u e o s e ) 。
致谢 :北京大 学波谱室代测核磁共振谱
和质谱 , 本校药学院教学中心代浏红外光谱 。
参 考 文 献
1 王箔默 , 等主编 . 中药研究与文献检索 . 上海 :远东出
版社 , 1 9 9 4 : 1 2 3
2 高晓山 , 等 . 大黄 .北京 :中国医药科技出版社 , 1 9 8 8
3 O h
s
h i m
a
Y
.
P l
a n t a
M
e
d
,
1 9 8 8
;
5 4 ( 1 )
:
2 0
4 T
s u t o m
u
F
, e t a
l
.
P h y
t o e
h
e
m i
s
t r y
,
1 9 7 5
; 1 4
:
1 4 5 7
5 F
u
m i y
a
K
, e t a l
·
P h y t
o e
h
e
m i
s t r y
,
1 9 9 2
;
3 ( 1 8 )
:
2 7 3 5
6 王振月 , 等 . 中医药学报 , 1 9 9 6 ; 2 : 54
7 徐任生 .天然产物化学 . 北京 :科学出版社 , 19 93 : 6 27
8 G
e n
i
e
h i
r o
N
, e t a
l
.
C h
e
m P h
a r
m B
u
l l
,
1 9 7 3
;
2 5 ( 9 )
:
2 3 0 0
9 G
e n
i
e
h i
r o
N
,
et
a l
.
C h
e
m P h
a r
m B
u
l l
,
1 9 8 3
; 3 工(5) :1652
( 1 9 9 7 一 1 1 一 0 4 收稿 )
S tud ies on th e C h em ieal C on stitu en ts of R h eum , 5 C a l l u s
L
u
K
u a n
k
e ,
T
o n g
W
e n y
o n g
,
H
u
R
o n
g
, e t a l
·
( S
e
h
o o
l
o
f P h
a r
m
a e e u t i
e a
l S
e
i
e n e e s ,
B
e
i
j
i n g
M
e
d i
e a
l U
n
i
v e r -
s
i t y
,
B
e
i j i
n g 1 0 0 0 8 3 )
A b
s
t
r a e t 7
e o
m p
o u n d
s
w
e r e s e
p
a r a t e
d f
r o
m 3 2 3
.
8 5 9
e a
l l
u s o
f R h
e u
m
.
T h
e y w
e r e e
h
r y s o p h
a n o
l
,
p h y
s e
i
o n
, 件sitosterol , a l o e 一 e m o d i n , e m o d i n , d 一 e a t e e h i n , a n d 6 一O 一g a l l o y g l u e o s e ·
K
e y w o
r
d
s
R h
e u
m
e a
l l
u s
安徽高校联合培训部
兽医函授及中医函授大专班常年招生
经省教委批准 , 第七期兽医函授大专班及第十二期中医函授大专班继续向全国常年招生 。 使用全国高等
院校统编教材 , 由专家教授辅导 ,详情见招生简章 。 凡初中以上文化程度者 ,可免试入学 。 报名费 5 元 , 邮至安
徽合肥市五里墩邮政 9一901 信箱邱瑛收 , 款到寄给招生简章和入学登记表 。
邮编 :230032 电话 :(0551)5112949
. 44 0 -