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Studies on the Chemical Constituents of Rheum‘s Callus

大黄愈伤组织化学成分的研究



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   。       压片   一 ‘      宽峰  , 
   ,     ,     ,     ,     ,     , 
   。 ‘ 一  见表  。
化合物   羊齿烯醇 , 分子式       , 
一    。 无色针晶 氯仿和甲醇混合液  。  
         ’ ,    ,    基峰  ,    ,    ,
   ,    ,    ,   ,    ,    ,    ,   ,   ,   。
致谢  承 蒙本所仅器分析 中心各位 同仁
帮助汉定   、    、   及  、  一  谱
图 。
参 考 文 献
 江苏省植物研究所 , 等  新华本草纲要  第  册  上
海  上海科技出版社 ,      
江苏新医学院  中药大辞典  上册  上海  上海科技
出版社 ,        
        ,                        
                 
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4 1 3 7
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0 7

0 2 收稿 )
C hem ieal C on stituen ts from M aq ian zi (S try eh nos nu x一 v o m i e a )
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。 n e w C o m p o u n d , w a n d vl w e r e o b t a i n e d f此m 5 .、 u 二 一v o m , e a f o : t h e f i r s t t i m e ,
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大黄愈伤组织化学成分的研究
北京医科大学药学院 (100083) 普宽科 米 俘文 勇 胡 蓉 果德安 郑俊华 王 夔
摘 要 从大黄的愈伤组织中分到 7 种成分 , 经化学和光谱方法鉴定它们的结构为 :大黄酚 ( I ) 、
大黄素甲醚 ( 亚 ) 、俘一谷街醇 (l ) 、芦荟大黄素(w )、大黄素(v ) 、 d 一儿茶素( u )和 3‘ , 4 , , 5 ‘一三轻 甲基
苯甲酞葡萄糖(VI ) 。
关键词 大黄 愈伤组织 化学成分
大黄是我国临床最常用 的中药之一 , 素
有 “将军 ”之称 , 在中药复方中应用相当广泛 ,
有 “泻热通 肠 、凉血解毒 、逐癖通经 、攻积导
滞 、利胆退黄 ”之功 效〔‘〕 , 《神农本 草经》称大
黄 “主下疲血 、血闭 、寒热 、破症瘦积聚 、留饮 、
宿食 、荡涤肠 胃 、通利水谷 、调中化食 、安和五
藏 ” 。对大黄 的化学成分研究 已有一百多年历
史〔2〕 , 研究工 作者 已从其同属植物中分离到
葱醒类 、苗类 、苯丁酮 昔类 、棘质类 、色 原酮
类 、蔡类 、有机酸 、糖 、蛋 白质 、 幽醇等 15 。多
种成分 , 然而 , 由于其在中药中的重要性 , 对
其化学成分的研究仍在继续 。
组织培养相对于 自然界条件来说 , 具有
生长周期短 , 生长条件和 自然相差较远 , 次生
Address:Lu K uanke , C o l l e g e o f P h a r m a e y , B e i j i n g U n i v e r s i t y o f M e d z e a l S e i e n e e s , B e i j i n g
4 3 8
·
代谢途径 、步骤 和代谢产物可能和 自然界不
相同的特点 , 因此 , 利用组织培养也就成为一
个寻找新的药用成分的方法 。
对大黄的组织培养方面的研究不多 , 且
大都集中于各种因素 (培养基成分 、激素 、光
照等)对大黄愈伤组织中葱醒类化合物含量
的影响 〔3 一 5〕 。 只见到 T sut o m u 等 〔4〕人从大黄
愈伤组织中分离得到大黄酚 。 我们对大黄的
愈伤组织的化学成分进行了深入的研究 , 从
中分离到 12 个化合物 , 鉴定了其中 7个化合
物 。 它们是大黄酚 ( I ) 、大黄素甲醚 ( l )、日-
谷街醇 ( l )、芦荟大黄素 ( W ) 、大黄素( V ) 、
d
一 儿茶素 (VI ) 、 3’ , 4’ , 5’一三轻 甲基苯 甲酞葡
萄糖 (呱 ) 。 另 5 个化合物正在鉴定中 。
l 材料和仪器
大黄种子 1995 年购于陕西 陇县 , 原植物
由我校药学院天然药物 系生物技术室郑俊华
教授鉴定为掌叶大黄 R heu m pal 从at u m l洲 . ,
琼脂粉为北京原平生物技术有 限公司产品
(进 口分装 ) , 柱 层析 用 硅胶 (200 目 ~ 30
目) 、薄层层析用硅胶 G 、 H 均为青岛海洋化
工厂产品 , 柱层析用聚酞胺为江苏无锡生化
制品厂产品 , 聚酞胺薄膜为浙江黄岩四青生
化 材 料 厂 产 品 , S 叩had ex 一 L H 一 20 是 德 国
Ph arm aeia 公司产品 。 培养基为 M S 培养基
中附加蔗糖 3 % 、琼脂粉 0.7% 、 B A P I . 0 m g /
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, 灭菌 (一2 0 一( _ ‘ , 2 5 m i n ) 前将培
养基的 pH 调到 5. 8 :所有有机溶剂均为国产
分析纯 。
熔点仪 为 X 一 4 型 (北京 电光科学仪 器厂
生 产 , 温 度未 校 正 ) ;核磁共振仪 为 Br uk er
A R X 400 型 , T M S 内标;质谱仪 为 V 6一 m m -
7 o H 型 ;红外光谱仪为 Perlkin 一 E l m e r 9 8 型 ;
高 效 液 相 色 谱 仪 为 LK B 公 司 生 产 的
L K B 250 型 , 反相色谱柱是北 京潮声技术开
发公 司生 产 的 C S 一 1 0 0 0 型 (4. 6 m m 又 2 5 0
rn tn ) ;U V 监测器波长为 290 nm 。
2 大黄无菌苗的培养
掌叶大黄种子经 自来水漂洗一夜后 , 用
《中草药 门 9 98 年第 29 卷第 7期
0 . 1 % H g C1 2溶液表面灭菌 10 m in , 用无菌水
洗涤 5 次一6 次 , 放置过夜 , 再用 0. 1 % H gC1 2
溶液表面灭菌 10 mi n , 无菌水洗涤 5 次~ 6
次后 ,接种于不含任何激素的 M S 培养基上 ,
室温下培养成幼苗以备用 。
3 大黄愈伤组织的诱导及培养
将上述无菌条件下培养的大黄幼苗 , 在
无菌条件下切成 。. 5 cm 长的段或片 , 接种于
M S 培养基上 , 在室温 (20 ℃ ~ 30 ‘C ) 下培养
Zo d , 得到大黄的愈伤组织 , 选择那些色白、
长势 良好大黄愈伤组织 , 转移到新的 M S 培
养基上 , 再继代培养 2 个月 ,大部分大黄愈伤
组织生长基本停止 , 外观颜色 已经变成褐色
时 收 获 , 在 室 温 下 风 吹 晾 干 , 共 得 干 重
32 3.85 9 愈伤组织 。
4 提取和分离
大黄愈伤组织粉碎后 , 用 甲醇热 回流提
取至提取液近无色 为止 。 蒸去甲醇得 甲醇浸
膏 10 7.8 9 , 将浸膏悬浮 于 90 m L 的热水
中 , 依次 用石油醚 (60 C ~ 90 C )、 乙 醚 、 乙
酸 乙醋和正丁醇萃取 。 蒸去萃取溶剂得到石
油醚萃取物 6.4 9 , 乙醚萃取物 2. 6 9 , 乙酸乙
醋萃取物 3.7 9 和正丁醇萃取物 10 .2 9 。 经
T L C 分析 , 石 油醚萃取 物 、 乙醚萃 取物的化
学成分相近 , 将其二者合并 , 在 20 目~ 30
目的硅胶柱上梯度洗脱 (石 油醚 一乙酸 乙酷
25 : 1一1 : 1 ) , 得到化合物 I 一 v , 再分别进
行重结晶得 到纯 品 I (25 m g ) , l ( 1 7 m g ) ,
l ( 3 0 m g )
,
W
( 8 m g )
,
V ( 2 0 m g )

乙酸乙 醋部分 、 正丁醇部分经硅胶柱层
析 (C H C1 3一 C H 3 0 H 梯度洗脱 )、 聚酞胺柱 层
分离(纯 甲醇洗脱 )、再经 S即hdex 一 L H 一 20 柱
(纯 甲醇 洗脱 )和 H PI 无 分离 , 分别得 到 vI
(15 m g ) , 珊 ( 1 2 m g ) 。
5 鉴定
化合物 I :黄 色针 晶 (乙 酸 乙醋 ) , m p
1
97 C
, 硅胶 T L C 的 R f值与大黄酚标准品
一致 , 与标 准 品大黄 酚混 合 , 熔 点 不下 降 。
且‘H N M R 与文献如报道一致 , 因此确定 I
为大黄酚 。
·
4 3 9
·
化合物 l :黄色针 晶 (乙 酸 乙醋 ) , m p
20
6 ℃一 20 8 ℃ , 硅胶 T L C 的 R f 值与大黄
素甲醚标准品一致 , 与标准品大黄素甲醚混
合 , 熔点不下降 。 ‘H N M R 与文献〔7〕一致 , 故
确定 亚为大黄素甲醚 。
化合物 l :无色针晶 , m p 13 6 ℃ ~ 13 8
℃ , 硅胶 T L C 与 件谷街醇标准品 R f值一致 ,
与标准品 p一谷 街醇混合 , 熔点不下降 。 经
H PL C 分析 ,保留时间与 p一谷街醇一致 , 因此
确定 l 为 月一谷街醇 。
化合物 W :橙黄色针晶 (乙酸 乙酷) , m p
2
4 ℃一2 5 C , 硅胶 T L C 与标准品芦荟大
黄素的 R f值一致 , 与标准品 芦荟大黄素混
合 ,熔点不下降 。 E I M S 给出分子离子峰为
270 。 经 H P LC 分析 , 保留时间和标准品芦荟
大黄素一致 , 故确定 W 为芦荟大黄素 。
化合物 V :黄色针晶 (乙酸 乙醋 )。 m p
25
5 ℃ ~ 25 6 ℃ , 硅胶 T LC 与标准品大黄素
的 R f值一致 , H P L c 分析 , 保留时间和标准
品大黄素一致 。与标准大黄素混合 , 熔点不下
降 ,故确定 V 为大黄素 。
化合物 VI :无定形粉末 , 与标准品 d 一儿
茶素对照 R f值一致 。 ‘H N M R 数据与文献 〔的
完全一致 , 故确定为 d一儿茶素 。
化合物 vI :FeC1 3反应为深蓝色 , 示 为酚
类化合物 , I R ( K B r ) 。m 一 ‘ : 3 4 3 4 , 1 7 1 2 , 1
6 2 1
,
1 5 4 7
,
1 4 4 7
。 ‘H N M R ( C D
3O D ) P P m :
7
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4
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,
3
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8 6
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4 2 ( 6 H
,
C
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3
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4
,
5
,
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H )
。 ‘3 C N M R 及 D E P T 135“ ( C D 3 O D ) P P m :
1 6 6
.
9 0 ( 碳基 ) , 1 4 6 . 3 2 ( 季碳) , 1 4 0 . 1 8 ( C 3 ,
C
S ,
)
,
1 2 0
.
5 5 ( 季碳) , 1 1 0 . 3 8 ( C H , C Z , , C 6 , ) ,
9 5
.
7 7 ( C H
,
C
l
)
,
7 8
.
6 2 ( C H
,
C
:
)
,
7 8
.
0 0 ( C H
,
C
3
)
,
7 3
.
9 3 ( C H
,
C
Z
)
,
7 0
.
9 1 ( C H
,
C
4
)
,
6 2
.
1 5
( C H
: ,
C
6
)
。 ‘H N M R 和‘3 C N M R 数据与文献
报道一致〔9〕 , 故确定为 6一 0 一 3 ‘ , 4 ‘ , 5 ‘一三经基
苯酞基葡萄糖(6一 O 一 g a l l o y l g l u e o s e ) 。
致谢 :北京大 学波谱室代测核磁共振谱
和质谱 , 本校药学院教学中心代浏红外光谱 。
参 考 文 献
1 王箔默 , 等主编 . 中药研究与文献检索 . 上海 :远东出
版社 , 1 9 9 4 : 1 2 3
2 高晓山 , 等 . 大黄 .北京 :中国医药科技出版社 , 1 9 8 8
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1 9 9 2
;
3 ( 1 8 )
:
2 7 3 5
6 王振月 , 等 . 中医药学报 , 1 9 9 6 ; 2 : 54
7 徐任生 .天然产物化学 . 北京 :科学出版社 , 19 93 : 6 27
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