全 文 ：·药剂与工艺·
不同指标预测葛根注射液稳定性的研究
毛声俊 ,侯世祥 ,李超英 ,王新春 ,黄晓东 ,郭　勃
( 1. 四川大学 华西药学院 ,四川 成都　 610044;　 2. 四川宝光药业股份有限公司 ,四川 成都　 610031)
摘　要: 目的　比较不同指标预测葛根注射液稳定性的差异 ,为稳定性评价指标选择的必要性提供实验依据。方法
　采用经典恒温加速试验法预测稳定性 ,注射液中葛根总黄酮与葛根素的含量测定分别采用紫外分光光度法与
HPLC法。结果　注射液中有效部位总黄酮与有效成分葛根素的降解符合一级反应规律 ,分别以二者为指标的 t25℃0. 9
为 0. 63 a和 1. 82 a。结论　不同类型的稳定性评价指标对制剂的稳定性预测结果存在较大影响 ,提供充分的稳定
性评价指标选择依据是必要的。
关键词: 葛根注射液 ;稳定性 ;葛根总黄酮 ;葛根素 ;评价指标
中国分类号: R927. 11　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 07 0595 03
Studies on stability of PUERARIN INJECTION based on changes of
different active principles in preparation
M AO Sheng-jun, HOU Shi-x iang , L I Chao-ying , W ANG Xin-chun, HUAN G Xiao-dong , GUO Bo
　　 ( 1. Schoo l o f Pharmacy, West China Univ er sity o f Medica l Sciences, Ch engdu Sichuan 610044, China; 2. Sich uan
BAOGUAN G Pharmaceutica l CO. , L td. , Chengdu Sichuan 610031, China)
Abstract: Object　 To compa re the stabi li ty of PU ERARIN IN JECTION as predicted by the change of
to tal Puerarin f lav onoids and kakonein in the prepa ra tion during stabili ty test, to provide an example
showing the importance for the proper choice of stabi li ty index based upon dif ferent activ e principles pre-
sent in the preparation. Methods　 The stability o f the prepa ra tion under study w ere tested by the classical
accelerated iso thermal method and the change o f total Puerarin f lav onoids and kakonein w ere determined
by UV and HPLC. Results　 The deg rada tion of bo th active principles follow ed the fi rst order reaction.
The t
25℃
0. 9 were 0. 63 a and 1. 82 a respectiv ely. Conclusion　 The stabili ty o f PUERARIN IN JECTION will
show di fferent v alues w hen based upon ei ther single ing redient , suggesting the necessi ty to provide a logi-
cal basis fo r the determina tion o f stability index.
Key words: PUERARIN IN JECTION; stability test; total Puerarin f lav onoids; kakonein; criteria fo r
the determina tion o f stability
　　中药注射液的稳定性研究涉及多方面 ,评价指
标的选择是稳定性研究过程中的重要一环。合理选
择稳定性评价指标对客观、准确、全面地反映中药注
射液的内在质量具有十分重要的意义。目前 ,中药注
射液稳定性评价指标的选择较为混乱 ,缺乏可遵循
的标准与充分的选择依据。 文献报道丹参注射液在
分别选择不同单一有效成分为指标时 ,预测有效期
存在较大差异 [1 ] ,而对含复合组分的中药注射液同
时以有效部位与有效成分为指标的稳定性预测研究
目前尚未见报道。二者之间有无差异 ,选择何者更能
真实反映制剂质量值得研究。葛根主要成分是以葛
根素为代表的异黄酮类化合物 ,葛根素及葛根总黄
酮能增加脑及冠状血管的血流量 ,降低血管阻力 ,对
垂体后叶素引起的急性心肌缺血有保护作用 [2, 3 ]。本
文分别以有效部位葛根总黄酮和有效成分葛根素为
指标 ,对葛根注射液的稳定性预测进行了比较研究。
1　仪器与试药
UV-2201紫外分光光度计 (日本岛津 ) ; DLC-
20高效液相色谱仪 (美国 D-Star ) ; DVW-10紫外
检测器 ; CS-8501超级恒温水浴箱 ; TGL-16G高速
台式离心机。
葛根注射液 (自制 ,批号 990601,规格 2 mL /
支 ) ;葛根素对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;超
纯水 ;甲醇、醋酸为分析纯。
·595·中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2001年第 32卷第 7期
收稿日期:　 2000-11-08作者简介:毛声俊 ( 1977-7) ,男 ,现为华西医科大学博士生。 2000年 7月毕业于华西医科大学药学院 ,获理学学士、硕士学位。 2000年 9月起攻读药剂学专业博士学位 ,研究方向为中药新型给药系统。 Tel: 028-5501376
* 四川大学华西药学院 2000届本科毕业生。
2　方法与结果
2. 1　注射液有效部位与有效成分的含量测定: 葛根
中主要含异黄酮类化合物 ,种类多达 18种 ,含量达
12%以上。由于其具有相同母核 ,紫外光谱相似 ,主
要吸收峰在 248～ 255 nm。 本文参考文献 [ 4]采用紫
外分光光度法测定葛根总黄酮含量 (以葛根素计 )。
得标准曲线回归方程为 A= 0. 010 14+ 0. 063 46C ,
r= 0. 999 9;日内和日间 RSD分别为 0. 62% 和
1. 24% ,加样回收率为 102. 53% ,RSD为 1. 12%。
葛根素的含量测定方法有 TLSC法、比色测定
法和 HPLC法 [5 ]。本文用 HPLC法测定葛根素的含
量 ,具有样品处理简单 ,分辨率高 ,重现性好等优点。
以甲醇 -36%醋-水 ( 25∶ 3∶ 72) 为流动相 , 247 nm
下检测。测得的葛根素标准曲线方程为 A= - 1 011
+ 1. 59× 107C ( mg /mL) , r= 0. 999 9(n= 3) ;进样量
在 0. 027～ 0. 043μg线性关系良好 ;日内与日间
RSD分别为 0. 19% 和 0. 42% ;平均加样回收率为
100. 18% , RSD为 1. 65% 。
2. 2　恒温加速试验: 取葛根注射液适量 ,分别置于
80℃、 85℃、 90℃和 95℃的恒温水浴 (温差± 1℃ )中
加热 ,按表 1, 2的温度及加速时间安排试验 ,按时取
出 ,迅速以冰水浴冷却 ,按前述含量测定方法分别测
定其中葛根总黄酮与葛根素的含量 ,结果见表 1, 2。
2. 3　数据处理与有效期预测 :分别将表 1、表 2中
表 1　葛根注射液 (以总黄酮为指标 )加速试验含量测定结果 (n= 3)
温度
℃
加速时间
h
含量
( mg /m L)
含量
(% )
lgC
温度
℃
加速时间
h
含量
( mg /mL)
含量
(% )
lgC
80 0 53. 97 100. 00 2. 000 0 90 0 53. 97 100. 00 2. 000 0
5 53. 82 99. 73 1. 998 8 2 53. 80 99. 69 1. 998 6
10 53. 40 98. 95 1. 995 4 4 53. 58 99. 28 1. 996 8
22 52. 72 97. 68 1. 989 8 8 52. 92 98. 05 1. 991 4
35 52. 09 96. 52 1. 984 6 13 52. 25 96. 82 1. 986 0
50 50. 93 94. 37 1. 974 8 25 50. 87 95. 07 1. 978 0
85 0 53. 97 100. 00 2. 000 0 95 0 53. 97 100. 00 2. 000 0
4 53. 76 99. 61 1. 998 3 1 53. 74 99. 58 1. 998 2
8 53. 30 98. 76 1. 994 6 3 53. 44 99. 02 1. 995 7
13 52. 78 97. 80 1. 990 3 6 52. 75 97. 74 1. 990 1
21 52620 96. 73 1. 985 5 11 52. 03 96. 41 1. 984 1
38 50. 83 94. 19 1. 974 0 22 50. 65 93. 85 1. 972 4
表 2　葛根注射液 (以葛根素为指标 )加速试验含量测定结果 (n= 3)
温度
℃
加速时间
h
含量
( mg /m L)
含量
(% )
lgC
温度
℃
加速时间
h
含量
( mg /mL)
含量
(% )
lg C
80 0 26. 05 100. 00 2. 000 0 90 0 26. 05 100. 00 2. 000 0
5 25. 92 99. 52 1. 997 9 2 25. 93 99. 53 1. 997 9
10 25. 81 99. 07 1. 995 9 4 25. 78 98. 96 1. 995 4
22 25. 56 98. 13 1. 991 8 8 25. 58 98. 21 1. 992 1
35 25. 33 97. 25 1. 987 9 13 25. 31 97. 16 1. 987 5
50 24. 97 95. 86 1. 981 6 25 24. 91 95. 63 1. 980 6
85 0 26. 05 100. 00 2. 000 0 95 0 26. 05 100. 00 2. 000 0
4 25. 89 99. 38 1. 997 3 1 25. 96 99. 65 1. 998 5
8 25. 75 98. 84 1. 994 9 3 25. 74 98. 83 1. 994 9
13 25. 57 98. 15 1. 991 9 6 25. 54 98. 04 1. 991 4
21 25. 38 97. 42 1. 988 6 11 25. 18 96. 67 1. 985 3
38 24. 99 95. 93 1. 981 9 22 24. 71 94. 86 1. 977 1
lgC对时间 t进行线性回归 ,得回归方程及分解速度
常数 k ,根据 Arrhenius定理 ,以 lgk对 1 /T进行线
性回归 ,由回归方程计算室温 ( 25℃ )下的 k298及其
置信区间 ,并由公式 t 25℃0. 9 = 0. 105 4 /k298计算室温有
效期。
以总黄酮为指标 ,回归方程为 logk= 6. 742 7-
3 417. 11× 1 /T , r= - 0. 999 5, S= 0. 006 43, r>
r1- 0. 01, 2= 0. 990, logk与 1 /T相关性极显著。
T= 298K时 , t 25℃0. 9 = 0. 105 4 /k298= 0. 63年。
以葛根素为指标 ,回归方程为 lo gk= 8. 673 3-
4 155. 40× 1 /T , r = - 0. 9920, S= 0. 032 12, r>
r1- 0. 01, 2= 0. 990, logk与 1 /T相关性极显著。
T= 298K时 , t25℃0. 9 = 0. 105 4 /k298= 1. 82年。
将葛根素与总黄酮的 logk- 1 /T 回归直线进
行比较 ,检验其相互之间是否有显著性差异。
检验 H0: σ2总黄酮 = σ2葛根素
F= S
2葛根素 /S2总黄酮 = 1. 031 7× 10- 3 /4. 134 5×
10
- 5
= 24. 95
·596· 中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2001年第 32卷第 7期
取置信系数 T= 0. 05,得临界值 F1- 0. 05 ( 2, 2)=
19. 0,
因为 F> F1- 0. 05 ( 2, 2) ,所以e2总黄酮与 e2葛根素之间
有显著性差异。
综上所述 ,葛根注射液分别以总黄酮和葛根素
为评价指标时 ,其室温稳定性预测结果与所得回归
直线均存在较大差异。
3　讨论
3. 1　关于采用不同指标预测稳定性:中药注射液因
所含成分复杂 ,选择合理的稳定性评价指标对准确
预测其稳定性至关重要。本文中葛根注射液分别以
总黄酮和葛根素为指标的室温有效期相差近 2倍。
结果提示 ,稳定性评价指标选择的不同对中药注射
液稳定性预测结果有很大程度上的影响。笔者认为 ,
当不同的评价指标应用于中药注射液的稳定性预测
时 ,其有效期宜以较短的为准。 因此 ,在选择中药注
射液稳定性评价指标时 ,提供充分的选择依据是必
要的。
3. 2　关于中药有效部位的稳定性指示法:目前 ,中
药有效部位的稳定性指标多采用紫外 -可见分光光
度法。实际上 ,由于该法本身不具分离-分析功能 ,专
属性较差 ,往往不能排除化学结构与反应物相似的
降解产物对反应物测定的干扰 ,采用此法能否准确
指示有效部位的稳定性变化值得商榷。笔者认为 ,采
用液相色谱法测定特定波长处的若干特征色谱峰总
面积的变化 ,以此指示有效部位的稳定性变化 ,可能
是较好的解决办法。
3. 3　关于总黄酮与葛根素稳定性的差异:葛根所含
成分复杂 ,有各类化合物 50余个 ,有效成分为葛根
素、 4-甲氧基葛根素、大豆苷 -4, 7-二葡萄糖苷、大豆
苷和大豆苷元等异黄酮类化合物 ,以葛根素含量最
高。 葛根中除葛根素外的黄酮类化合物的稳定性研
究未见报道 ,葛根注射液中总黄酮较葛根素不稳定
的原因是否由于其它异黄酮类化合物的不稳定引
起 ,尚有待进一步研究。
参考文献:
[ 1 ]　范姝姿 ,赵仁泰 ,吕方军 ,等 . 丹参注射液贮存期的预测 [ J ].
中成药 , 1988, ( 12): 10～ 11.
[ 2 ]　王晓青 ,傅　静 .葛根的药理作用研究进展 [ J] . 北京中医药
大学学报 , 1994, 17( 3): 39～ 41.
[3 ]　郭建平 ,孙其荣 ,周　全 . 葛根药理作用研究进展 [ J ] . 中草
药 , 1995, 26( 3): 163～ 165.
[ 4 ]　郭建平 ,孙其荣 ,周　全 ,等 . 葛根总黄酮不同提取工艺探讨
[ J ]. 中草药 , 1995, 26( 10): 522-523.
[5 ]　章育中 ,杨　凡 . 高效液相色谱法测定葛根及其片剂中异黄酮
的含量 [ J] .药物分析杂志 , 1984, 4( 2): 67-70.
壳聚糖澄清剂的脱乙酰度及残留量研究
张　彤 ,徐莲英 ,蔡贞贞
(上海中医药大学 中药学院 ,上海　 200032)
摘　要: 目的　对壳聚糖澄清剂的脱乙酰度及精制后的中药水提液中壳聚糖的残留量进行了探讨。 方法　用线性
滴定测定壳聚糖 (游离胺基 )的含量。 结果　壳聚糖澄清剂的脱乙酰度约 80% ,在澄清液中壳聚糖残留量小于
0. 010%。 结论　壳聚糖作为精制中药水提液的澄清剂是可行的。
关键词: 壳聚糖 ;絮凝澄清剂 ;脱乙酰度 ;残留量 ;线性滴定法
中图分类号: R927. 11　　　文献标识码: A　　　文献编号: 0253 2670( 2001) 07 0597 04
Studies on degree of deacetylation of chitosan and its residual amount left over in
clarified products when used as a clarif icant
ZHANG Tong , XU Lian-ying , CA I Zhen-zhen
　　 ( Co lleg e o f Chinese Materia Medica, Shanghai Univ ersity of TCM , Shanghai 200032, China)
Abstract: Object　 To study the deg ree of deacety lation of chi to san and its residual amount left ov er in
the clari fied products when chi tosan w as used as a cla ri ficant. Methods　 The free amino g roup in the
deacety lated chitosan w as determined by linear tit ration. Results　 The deg ree of deacetyla tion o f chi to san
w as found to be about 80% . The residual amounts lef t ov er in the clari fied products w ere low er than 10
- 4 .
Conclusion　 The results suggested tha t i t i s feasible to use chi tosan as a clari ficant for refining w ater ex-
·597·中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2001年第 32卷第 7期
收稿日期: 2000-10-18基金项目:上海市教委青年基金资助项目 ( No. 98QN67)作者简介:张　彤 ( 1972-)男 ,浙江杭州人 ,讲师 ,硕士 ,多年来从事中药制药研究。 Tel: 021-54232074