全 文 ：离子对反相 HPLC法测定 10个产地莲子心中莲心碱的含量
寿国香 ,刘　冰 ,周立红 ,周　军⒇
(天津市药品检验所 ,天津　 300070)
摘　要: 目的　建立用离子对反相 HPLC法测定莲子心药材中莲心碱含量的方法。 方法　选用 ODS色谱柱 ,流动
相为甲醇 -水 -冰醋酸 -辛烷磺酸钠 -乙酸钠 ( 55∶ 45∶ 0. 6∶ 10 mmol / L∶ 5 mmo l /L ) ,检测波长 282 nm,流速为
1. 0 m L /min,柱温为 40℃。结果　莲心碱在 0. 005～ 0. 146 mg /m L范围内 ,线性关系良好 (r= 0. 999 9) ;平均回收
率为 100. 6% , RSD为 1. 21% (n= 6)。结论　该法准确 ,快速 ,灵敏 ,重现性好 ,可用于莲子心药材中莲心碱的测定。
关键词: 离子对反相 HPLC法 ;莲心碱 ;莲子心
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 11 0989 02
Determination of liensinie in seed of Nelumbo nucifera by ion pair RP-HPLC
SHOU Guo-xiang , LIU Bing, ZHOU Li-hong , ZHO U Jun
　　 ( Tianjin Institute fo r Drug Cont rol, Tianjin 300070, China )
Key words: io n pair RP-HPLC; liensinine; seed of Nelumbo nuci fera Gaertn.
　　莲子心为睡莲科植物睡莲 Nelumbo nuci fera
Gaertn.的成熟种子中的干燥幼叶及胚根 ,具有清心
安神 ,通交心肾 ,涩精止血之功效 ,被历版中国药典
所收载。但各版药典中莲子心质量标准均不完善 ,即
使是 2000年版药典中 ,莲子心质量标准项下也只收
载了显微鉴别和一个生物碱的显色反应。 莲子心中
主要共有的有效成分为莲心碱 ,此外还含有异莲心
碱和甲基莲心碱。 关于对莲子心中莲心碱的含量测
定 ,已有薄层扫描法和正相 HPLC法 [1, 2 ] ,为了进一
步完善质量标准 ,同时也为 2005版药典增加含量测
定项作准备 ,我们采用最常用的 ODS柱 ,反复筛选
了流动相 ,使莲心碱及其同类成分获得满意的分离 ,
同时对 10个不同产地的莲子心样品 ,进行了莲心碱
的含量测定。
1　仪器及试剂
1. 1　仪器:日本 Shimadzu LC-10A高效液相色谱
仪 , SPD-10AV紫外可见检测器 , CR-7A plus积分
仪。
1. 2　试剂:甲醇 (优级纯 ) ,水为双蒸水 ,其余均为分
析纯。
1. 3　对照品: 莲心碱高氯酸盐 ,自制 ,熔点、 IR、
UV、元素分析均与文献报道一致 [3 ] ,经 HPLC归一
化法检测纯度达 99. 5%以上。
1. 4　样品:购自全国各地。
1. 5　色谱条件:色谱柱: 日本 TOSOH T SK-GEL-
ODS-80TM ( 10μm, 4. 6 mm× 250 mm) ;流动相:
甲醇 -水-冰醋酸 -辛烷磺酸钠 -乙酸钠 ( 55∶ 45∶
0. 6∶ 10 mmo l /L∶ 5 mmol /L) ;柱温: 40℃ ;流速:
1 mL /min;检测波长: 282 nm。
2　实验方法与结果
2. 1　溶剂的考察:分别精密称取同一份莲子心细粉
各 0. 3 g,分别精密加入溶剂 1: 氨水 -甲醇 ( 2∶ 98)
25 mL;溶剂 2:氨水-氯仿 ( 2∶ 98) 25 mL;溶剂 3: 盐
酸-甲醇 ( 2∶ 98) 25 mL,并称定重量。分别采用超声
处理 4 h,加热回流 4 h处理后 ,放冷 ,补足重量 ,滤
过 ,精密量取续滤液 5 mL,置 10 m L量瓶中 ,加流动
相稀释至刻度 ,摇匀 ,用 0. 45μm微孔滤膜滤过 ,精
密量取 20μL,注入液相色谱仪 ,测定 ;经比较 ,采用
溶剂 3,加热回流处理方法测得含量最高。
2. 2　提取时间的考查:分别精密称取同一份莲子心
细粉各 0. 3 g (共 3份 ) ,分别精密加入盐酸-甲醇
( 2∶ 98)溶液 25 mL,并称定重量 ,分别加热回流 1,
2, 4 h,补足重量 ;分别滤过 ,精密量取续滤液 5 mL,
置 10 m L量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,用
0. 45μm微孔滤膜滤过 ,精密量取 20μL,注入液相
色谱仪 ,测定。经比较 1, 2, 4 h, 3个时间所测得的含
量 ,基本一致 ,故采用加热回流 1 h。
2. 3　溶液的制备
2. 3. 1　对照品溶液的制备:精密称取莲心碱高氯酸
盐对照品适量 ,加流动相制成每 1 mL含 0. 75 mg莲
·989·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
⒇收稿日期: 2001-03-21
心碱高氯酸盐的溶液 ,作为对照品溶液 (每 1 mg莲
心碱高氯酸盐相当于 0. 736 5 mg的莲心碱 )。
2. 3. 2　供试品溶液的制备: 取莲子心细粉 0. 3 g,精
密称定 ,精密加入盐酸-甲醇 ( 2∶ 98) 25 mL并称定
重量 ,加热回流 1 h,放冷 ,补足重量。滤过 ,精密量取
续滤液 5 mL,置 10 mL量瓶中 ,加流动相稀释至刻
度 ,摇匀 ,用 0. 45μm微孔滤膜滤过 ,即得。
2. 4　线性关系:精密称取莲心碱高氯酸盐对照品
29. 2 mg ,置 200 mL量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 ,
摇匀 ,作为储备液。 精密量取储备液 1, 5, 9, 13, 17,
21, 25 m L分别置 25 mL量瓶中 ,加流动相稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得。分别精密量取上述溶液 20μL,注入
液相色谱仪 ,测定峰面积 ,以浓度为横坐标 ,以峰面
积为纵坐标 ,作标准曲线 , 得回归方 程 Y =
6 698 659. 95X - 2 634. 76, r = 0. 999 9。表明样品
在 0. 005～ 0. 146 mg /mL范围内 ,线性关系良好。
2. 5　重现性试验: 取同一产地的样品 (湖北洪湖 ) ,
按拟定的方法制备 6份供试品溶液 ,分别测定莲心
碱含量 ,测得结果平均含量为 1. 98% , RSD 为
1. 71%。
2. 6　精密度试验:取同一样品溶液 ,重复进样 5次 ,
测定峰面积值 , RSD为 0. 67% 。
2. 7　稳定性试验:取同一供试品 ,分别于 0, 1, 2, 4,
6, 8, 24 h进样 ,测定含量。 结果表明 ,样品在 24 h内
稳定。
2. 8　加样回收率:取同一产地的样品 (湖北洪湖 ,含
量为 1. 98% ) , 6份供试品各约 0. 15 g ,精密称定 ,分
别精密加入 0. 507 4 mg /mL的莲心碱高氯酸盐的盐
酸 -甲醇 ( 2∶ 98)溶液 5 mL,再精密加入盐酸 -甲醇
( 2∶ 98) 20 mL,按供试品溶液的制备法制备溶液并
测定 , 测得 平均回 收率 为 100. 60% , RSD 为
1. 21%。
2. 9　样品测定:分别取 10个产地的样品 ,按上述拟
定的方法进行试验 ,测得的结果见表 1。
表 1　各地样品测定结果
产地 1. 湖北洪湖 2. 湖北蕲春 3. 四川乐至 4. 浙江建德 5. 福建古田
含量 (% ) 1. 98 0. 36( 1. 45) 0. 31( 1. 64) 1. 39( 1. 70) 1. 27( 1. 69)
产地 6. 河北白洋淀 7. 江苏南京 8. 山东郢城 9. 湖南 (购自广州 ) 10. 湖南 (购自成都 )
含量 (% ) 1. 02( 1. 53) 1. 66 0. 26( 1. 50) 1. 70 0. 36( 1. 66)
　　 ( )内的数字为莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱 3种成分峰面积以莲心碱高氯酸盐计所得的结果。 具有代表性的 HPLC图谱见图 1。
图 1　 HPLC图
3　讨论
①莲子心中主要共有的有效成分莲心碱的含量
相差甚大 ( 0. 26% ～ 1. 98% )。②即使是相同产地的
莲子心中主要共有的有效成分莲心碱的含量也相差
甚大 ,似乎可以看出 ,莲心碱的含量的高低与产地无
关。是否与栽培品种有关 ,有待进一步研究。③莲子
心中除主要共有的有效成分为莲心碱 ,此外还含有
异莲心碱和甲基莲心碱。 通过 HPLC图谱可以看
出 ,如果莲心碱含量高则其他两种成分含量就低 ,反
之则其他两种成分含量就高 ,而三者的峰面积总和
以莲心碱计基本上在 1. 5% ～ 1. 7%左右。④据文献
报道莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱均为双苄基异
喹啉类生物碱 ,均有降压和抗心率失常的作用 [4 ] ,因
此单以莲心碱评价莲子心的质量似乎欠妥 ,笔者认
为应以三者总和来评价莲子心的质量才比较恰当。
⑤莲心碱单体不太稳定 ,而莲心碱高氯酸盐非常稳
定 ,为了便于今后对照品的发放和保存 ,建议以其作
为对照品。⑥本文所列出的数据均以莲心碱高氯酸
盐计 ,如以莲心碱计则应乘以系数 0. 736 5。
参考文献:
[1 ]　胡学民 ,周本宏 ,罗顺德 ,等 . 薄层扫描法测定莲子心中莲心碱
的含量 [ J] .中草药 , 1992, 23( 11): 575-576.
[2 ]　张先洲 ,胡学民 ,罗顺德 ,等 .高效液相色谱法测定莲子心中 3
种生物碱的含量 [ J] .药物分析杂志 , 1997, 17( 2): 110-111.
[3 ]　郭毛娣 ,陈兰费 . 中国大陆产莲子心中生物碱成分的研究 [ J ].
中草药 , 1984, 15( 7): 291.
[4 ]　吕武清 ,郑海华 ,葛　新 . 莲子心研究概况 [ J] . 中草药 , 1996,
27( 7): 438-440.
·990· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期