全 文 ：茵陈粗多肤的提取分离及小鼠肝保护作用
南京大学 生物 系 (2 1 0 0 3 9 )
中国药科 大学
胡一桥 . 谭仁祥
褚明艳 欧文星
摘 要 茵 陈为菊科植物茵陈篙 A rt e m ist a c aP 汀la ri : T hu m b . 的地上部分 。具有清湿热 , 退黄疽等
多种药理作用 。 本 文的 目的为 :提取 及初步分离茵陈中的水溶性多肤 , 并对其部分肝脏生理活性进
行研究 。 文 中测定 了小 鼠注射茵陈多肤后 对药物肝损伤的保护作用 , 参与 鼠巨噬细胞对刚果红的
吞噬作用 。 结果表 明 :茵陈多肤在小鼠具有显著的肝保护作用 , 并可 以显著增强小鼠巨噬细胞的吞
噬能力 。
关键词 茵 陈篙 多 肤 肝保 护作用
茵陈为菊科植物 菌陈篙 A rt e m ls a ca P-
il ar is T h
u m b
. 的地上部分 。 具有清湿热 , 退
黄疽等多种药理作用川 。 近年来对茵陈的化
学成分及药理方面的研究很多 , 茵陈的一些
新的药理作用也不断被证实 , 如具有促进白
细胞分裂 , 增 加 白细胞数 目 , 提高 T 细胞 的
免疫活性 , 参与机体免疫调节和诱生干扰素
等作用 , 还具有抗肿瘤以及降压作用巨, 一司 。 但
大多数的研究集 中在脂溶性小分子方面 。 仅
1 9 8 5 年 日本 K it a s a t o 研究所报道茵陈篙多
肤有干扰素诱导功能川 。 因此 , 本文对茵陈的
水溶性多肤进行 了初步分离 、 提取 , 并对其肝
保护作用 , 以 及增 强巨 噬细胞吞噬作用进行
了初步研究 。
1 材料
1
.
1 动物 : 小 鼠(昆明种 ) 。
1
.
2 药品 : 丙酮酸标准液 、 SG P T 底物溶液 、
2
,
4
一二硝基苯麟 由铁医 生化教研室提供 。 肝
素由LI-J 东枣庄生化厂提供 。 S e p h a d e x G 一 5 0 、
G
一
7 5
、
D E A E
一
S e p h a e e l 购于中国科学院上海
脑研究所 。 其余试剂为市售分析纯 。
1
.
3 仪器 : H 6 6 0 0 5 超声机 (无锡超声电子设
备 厂 ) ;冷冻高速离心机 (Si g m a 公 司 ) ; 稳流
稳压 电泳仪 (江苏 省丹 阳市 无线 电一厂 ) ;
7 5 5 OU V
一
V IS 紫外分 光光度仪 (上海分析仪
器厂 ) 。
2 方法
2
.
1 茵陈粗多肤的提取与分离 :
提取 : 取新鲜茵陈 (采 自江苏句容 , 南京
大学生物系教授鉴定)地上部分 沮 ℃条件下
用水浸泡提取 12 h , 去渣取汁 。 15 ℃ 4 0 0 0
r / m in 离心 15 m in , 分 离出沉淀 , 留取上清
液 。 将上述上清液用硫 酸钱沉淀 , 静置 s h ,
3 o o o r / m in 离心 1 5 m in , 去上清液 , 取沉淀 ,
室温减压干燥 , 称重 。
分 离 : 离子交换树脂脱色 : 称取 D E A E -
Se p ha c el 若干克 , 先用蒸馏水浸泡 , 待充分膨
胀后进行酸碱处理 , 用系列浓度 N a+ 的洗脱
液进行洗脱 , 收集样 品 。 将上述粗品用 p H
4
.
5 的缓冲液溶解 , 用截 留分子量3 0 0 的中
空纤维超 滤 , 截去分子量 小于 3 0 0 的小分
子 , 所得的浓缩液冷冻干燥得到多肤粗品 。
2
.
2 高效 液相 色谱 法测定 茵陈多 肚分子
量 [ 6 ] : 色谱柱 : B IO 一R A D 凝胶柱 (3 0 0 m m X
7
.
8 m m )
, 流动 相 : 0 . 0 5 m o l/ L N a H ZPO 4 ,
0
.
5 m o l/ L N a
Z
H PO
4 , 1 5 m o l/ L N a CI
,
0
.
1
m o l/ L p H 6
.
8 ; 流速 : 1 . 0 m L / m in ; 检侧波
长 : 28 0 n m ;进样量 : 2。拼L ; 柱温 : 室温 。 取标
准品 (B IO 一R A D 公 司随柱标准 品 )进样 , 确
定标准品的保 留时间 。 分子量的对数值对保
A d d r e s s
:
H u Y iq i
a o ,
De p
a r tm e n t o f B io lo g y
,
N a n jin g U n iv e r s it y
,
N a n jin g
·
8 9 4
.
留时间作图 , 得到标准曲线 。 样 品进样 , 由保
留时间在标准曲线上查得分子量 。结果表明 :
主要为两个色带 , 其分子量为 : 6 0 0 , 9 0 0 。
2
.
3 小 鼠肝保护作用 [7. 幻 : 取 18 一2 9 雄性
小鼠 , 随机分成 4 组 , 每组 10 只 。分别 为生理
盐水 组 , 茵 陈多肤组 (4 m g / m L ) , 茵 陈禽汤
组图 (茵陈 醇提取物 6 m g / m L , 桅 子醇提取
物 3 m g / m L , 大黄醇提取物 Z m g / m L ) , 正常
对照组 。 第一天上午 , 下午 ;次 日上午除正常
组外 , 各组给药 l 次 (1 0 m g / k g 体重 , im ) , 末
次 给 药后 0 . s h , 各 鼠均 ip 扑 热 息 痛 2 0 0
m g /k g
,
24 h 后取血清 , 根据标准曲线测定血
清谷氨酸 一丙酮酸转氨酶 。 同时剖取肝脏作病
理检查 , 根据病理切片观察组织学变化 。
2
.
4 小 鼠刚果红吞噬作用仁1 。〕: 小 鼠 30 只 ,
雌雄兼用 , 随机分成 3 组 , 分别 im 生理盐水
组 , 茵 陈多肤 组 (4 m g / m L ) , 茵 陈篙汤组闭
(茵 陈醇提取 物 6 m g / m L , 桅 子醇提取物 3
m g / m L
, 大黄醇提取物 Z m g / m L ) 。连续给药
s d (2 0 m g / kg 体重 ) ,每天 1 次 。 于末次给药
后 l h 分别用经肝素处理过的毛细管从眼后
静脉 丛取 血 50 拌L , 立 即放入 s m L 蒸馏 水
中 , 使之完全溶血 , 作为对照管 。 随即从尾静
脉定量注人 10 m g / m L 刚果红生理盐水溶液
1 0 m L / k g 体重 。 注射后 2 m in , 同法取血 5 0
拼L , 放人 s m L 蒸馏水 中溶血 , 作为试验管 ,
在 51 0 n m 波长下 比色 。
3 结果
3
.
1 小鼠肝保护作用 : 茵陈多肚对小鼠肝血
清谷氨酸 一丙酮酸转氨酶的作用 , 以及用生理
盐 水 为 对 照 组 的 统 计 结 果 见 表 1 (采 用
S ig m a Plo t 统计软件 ) 。
茵陈多肚与茵陈篙汤两组进行 t一 tes t 统
计 , 结 果表明 尸< 0 . 05 , 说明茵陈多肤的保肝
作用优于茵陈篙汤组 。
小鼠肝脏切片结果表 明 : 正常组包膜完
整 , 无 渗出 , 肝细胞排列整齐 , 无 明显疲血及
变性坏死现象 。 生理盐水组有大量肝细胞浆
疏松化 , 范 围超过肝小叶范围的 1 /2 , 肝脏癖
血明显 。 茵陈多肤组包膜完整 , 无渗出 , 肝细
《中草药 》1 9 9 9 年第 3 0 卷第 1 2 期
胞弥漫性胞浆疏松化广泛 , 个别细胞气球样
变 , 无明显痰血 、坏死现象 。茵陈篙汤组 : 包膜
完整 , 无渗出 , 肝 细胞浆疏松广泛 , 个别细胞
出现脂肪性变 , 无明显寮血 、坏死现象 。
衰 1 苗陈多肚对小吸肝血清谷氮酸转
氮醉(SG PT )的作用 (x 士 s )
组 别 鼠数 荆t
(m g / k g )
SG PT
(U / m L )
P 值 F 值
正常组 10 1 0 6 1 . 12士 16 . 1 1
生理盐水 10 1 0 128 . 50士4 7 . 33
茵陈多脸 10 10 4 2 . 56士 13 . 5 6 ( 0 . 00 1 1 8
茵陈荡汤 10 10 58 . 19士 18 . 82 ( 0 . 00 1 1 8
3
.
2 小鼠刚果红吞噬作用 : 各组小鼠定量注
射刚果红后 , 30 5 时每毫升血中刚果红浓度 ,
以 及与 生理盐水对 照组 的统 计结果见 表 2
(采用 S ig m a Plo t 统计软件 ) 。
表 2 苗陈多肚对小 暇刚果红吞哇作用任士 s)
组 别 鼠数 剂量
m g / kg )
刚果红水平
(滩 / m L )
7
.
0 4士 1 . 2 7
3
.
7 3士 1 . 9 5
4
.
0 0士 1 . 3 7
尸值 F 值
生理盐水
茵陈多肚
茵陈蓄汤
l 0
l 0
l0
l0
l0
l0
< 0
.
0 0 1
< 0
.
0 01 }:
茵陈多肤与茵陈篙汤两组间进行 t一 t est
统计 , 结果表明 尸> 0 . 05 , 说明茵陈多肤与茵
陈禽汤两组间 , 增强巨 噬细胞吞噬作用无显
著性差异 。
4 讨论
扑热息痛致小鼠肝损伤的中毒剂量和观
察指标较明确 , 且其代谢途径又与四氯化碳 、
乙硫氨酸 、 D 一半乳糖等有所不 同 , 是一种常
用的研究药物代谢 、药物相互 作用 和筛选抗
肝炎药的急性肝损伤模型 。 小鼠肝保护实验
统计学分析表明 : 与生理盐水对照组相比 , 茵
陈多肤组和茵陈篙汤组均有显著的抗药物肝
损伤作用 (尸< 0 . 0 0 1 ) , 而且茵陈多肚 比茵陈
篙汤具有更强的抗肝损伤作用 (尸< 0 . 0 0 1 ) 。
以往的文献报道抗肝损伤的主要成分为一些
小分子物质如抓原酸等 [l ‘ , 但通过实验我们
发现茵陈中的大分子同样对肝损伤有保护作
用 , 甚至更强 。
吞噬作用是巨噬细胞的主要生物学特征 ,
它在机体的非特异性和特殊性异性免疫反应
一
8 9 5
·
中 , 在第 W 类变态反应的炎症过程中 , 以及在
肿瘤免疫中都具有重要的作用 , 因而 日益受到
人们的重视 。 根据实验及统计结果可以看出 ,
茵陈多肚 , 茵陈篙汤都可以显著增强巨噬细胞
的吞噬能力 , 提高机体免疫力 。 作用与对照组
相比在统计学上有显著差异 。茵陈多肤与茵陈
篙汤的作用在统计学上无显著差异 。
参 考 文 献
1 阴 健 , 等 . 中药现代研究与临床应用 . 北京 : 中医古
籍出版社 , 1 9 9 5 : 4 8 4
2 褚明艳 , 等 . 中草药 , 1 9 9 8 2 9 : 5 1 6
{:
洪振 丰 , 等 . 福建中医药 , 19 91 , 2 2 (2) : 5。
W u T S
, e t a l
.
Phy t o e h e m is t r y
,
1 9 9 8
, 4 7 (8 )
: 1 64 5
K it a s a to In s t it u t e
,
Jp n
.
K o k a i T o k k yo K o h o JP 8 2
1 8
,
6 2 2
师治贤 , 等 . 生物大分子 的液相色谱分离 和制备 . 北
京 : 科 学出版社 , 1 9 9 6 : 2 6 2
徐 秀兰 , 等 . 生物化学实验指导 . 北京 : 中国医药科技
出版社 , 1 9 9 4 : 2 4
陈重 阳 , 等 . 中国药理学通报 , 1 9 88 , 4 (2 ) : 12 4
赵新先 . 中药注射剂 . 北 京 : 人民卫生 出版社 , 1 9 98 :
3 6 5
严宜左 , 等 . 北京 中医学院学报 , 19 8 0 , (1 ) : 4 0
胡润生 , 等 . 药学学报 , 1 9 6 5 , 1 2 (5 ) : 2 8 9
(1 9 9 9
一
0 7
一
2 0 收稿)
nj.任尸匀
竹叶胡椒挥发油成分研究
南京 军区 福州总院分院 (3 5 0 0 0 3)
福 州医学高等专科学校
浙 江桐庐县人 民医院
李金 兰 .
范尚坦
陈彩珍
竹 叶胡椒 P IPe r b a m b a sa 嫂fbliu m T s e n g 主 要分
布在四 川 、江西 、湖北等地 , 模式 产地四 川城 口 。 作者
在进行海风藤原植物 考察中发 现浙江西部亦有大量
竹叶胡椒分布 。 民间广泛 用于风湿腰腿痛 。 国内外尚
未 见竹 叶胡椒挥发 油成分的研究报道 。 我们 以 G C -
M S 对其挥发油进行 了研究 , 共分离 出 60 个色谱峰 ,
鉴定 出其中 34 个成分 。
1 材料和样品制备
实验 材料 采 自浙江 省建德童 家 乡 , 标本与江苏
植物研究所馆藏标本核对符合 。 腊 叶标本存于福州
医学高等专科学校 标本室 。
粗粉 10 0 9 , 经水蒸气蒸馏 获 0 . 2 m L 桔黄 色挥
发油 。
2 仪器和条件
JM S
一
D 30 0 色 一质 联用 仪 , S E 一 52 玻璃 毛细管色
谱 柱 1 8 m X 0 . 2 5 m m , 载气 H e , 起始柱 温 6 0 ℃ , 3
m in 给以 6 ℃ / m in , 升至 1 8 0 ℃ , 直到分析结束 。 柱
前压为 1 . 1 8 X 1 0 5 P a , 进样 口 温度为 2 3 0 ℃ , 尾 吹压
6
.
8 X 10 ‘ Pa
, 电 子能量 7 0 e V , 离化 电流 3 0 0 拌A , 离
子源温度 2 0 0 ℃ , 电离方式 E l , 倍增 电压 1 . 3 k V 。
3 方法与结果
共分离 出 6 0 个色 谱峰 , 将 E l 质谱图与标准 图
对 照检素 , 初步 鉴定 出其中 34 个成分 , 主 要是枯烯
及其 含氧化合物 , 具体成分如 下 : a 一侧扣烯 , a 一旅烯 ,
茨烯 , 卜藻烯 , 月桂烯 , a 一水芹烯 , a 一枯 品烯 , 甲基异丙
基 , 卜水芹烯 , 不枯品烯 , 水化香桧烯 , Q 一掂 品油 , 芳樟
醇 , 枯 品烯醇一 4 , Q 一枯 品醇 , 香桃木烯醉 , 马鞭草烯酮 ,
乙 酸冰 片醋 , 2 一十 一烷 酮 , 俘愈创木 烯 ,姑肥烯 , 卜榄
香烯 , 顺式石 竹烯 , 反式石 竹烯 , a 一佛手烯 , 节 基辛基
醚 , 顺式 一卜庸 子油烯 , a 一榄香烯 , a 一姜黄烯 , 卜甜药烯 ,
榄 香 醇 , 反式 一卜庸 子油烯 , 卜马阿 里烯 , 4 ( 1 4卜按 叶
烯醉 一 1 1 。
参 考 文 献
1 范尚坦 , 等 . 中药材 , 19 87 , (4) : 4 0
2 S t e n h a g e n E
, 亡t a l
.
R e g is t r y o f M a s s sp e e t ra l Da t
a
.
N ew Y o r k
;
Jo h n W iley a n d So
n s , 1 9 7 4
3 H e lle r S R
,
et a l
.
E PA / N IH M a s s SPe e t r a l D a t a Ba
s e
.
W a sh in g t o n
:
U
.
5
.
G o v e r n m e n t P r in t in g o ffie e
,
1 9 7 8
(1 9 9 9
一
0 1
一
2 1 收稿 )
李金兰 女 , 19 8 0 年 毕业于 上海医科大学药学 院 , 现 任南京军 区福州总院分 院医技科主任 , 主要从事医 院药学工作 。
.
8 9 6
-