全 文 ：疲痕涂膜质量标准的研究
辽 宁中医学 院 (沈阳 1 1 0 0 3 2) 王 玉珍 . 陈再兴 孟宪生 王 东 龙沛霞
摘 要 采用 薄层色谱法对瘫 痕涂膜 中五倍子 、 苦参 、 冰片 、 甘草等成分 进行鉴 别 , 薄层扫描 法测
定丹参酮 I A 的含量 , 加样 回收率为 95 . 4 % , R S D 一 2 . 1% (n 一 6) 。
关键词 瘫痕 涂膜 丹参酮 n A 薄层扫描法
瘫痕涂膜系由丹参 、 川芍 、 五倍子 、 苦参 、
冰片等十二味中药经科学方法提取精制成新
型外用新药 , 用于预 防和辅助治疗增 生挛缩
性瘫痕 。 经药效学试验和临床观察 , 疗效显
著 。 为更好地控制本品的内在质量 , 保证疗
效 ,笔者采用薄层 色谱法对其 中五倍子等 4
味药进行化学成分鉴别 , 用薄层扫描法测定
其有效成分丹参酮 亚 A 的含量 , 为本 品建立
一个较完善的控制质量的标准 l[, ”〕。
1 仪器与试药
C S
一
9 3 0 薄层 扫描 仪 ( 日本 岛 津 ) , 硅 胶
G
、 硅胶 G F 25 ; (薄层 层析 用 , 青 岛海 洋化 工
厂 ) , 没食子酸 、 氧化苦参碱 、 槐定碱 、 冰片 、 甘
草酸铁 、 丹参 酮 I A 对照品 由中国药 品生物
制品检定所提供 , 瘫痕涂膜 由鞍钢华泰药业
公司提供 ,所用试剂均为分析纯 。
2 薄层鉴别
2
.
1 五倍子中没食子酸的鉴别
2
.
1
.
1 对照品溶液的制备 : 取没食子酸对照
品 , 加乙醇制成 0 . 5 m g /m L 的溶液 ,作 为对
照品溶液 。
2
.
1
.
2 阴性对照溶液的制备 : 按处方取除被
测药材外的各味药材 , 照供试 品溶液 的制备
方法制成阴性对照溶液 ( 以下各阴性 制照溶
液的制备方法相 同 ) 。
2
.
1
.
3 薄层层析 : 照薄 层色谱法 ( 中国药
典 》95 版一部附录 35 页 ) 试验 , 吸取含量测
定项 下的 供试 品溶 液 5 拌L , 对 照 品溶 液 3
拼L ,分别点于 同一用 2%氢氧化钠溶液制备
的梭 甲基纤维素钠为粘合剂 的硅胶 G 薄层
板 上 , 以氯仿 一甲醇 一甲酸 (1 5 : 5 : l) 为展开
剂 ,在 15 ℃ 以下展开 ,取 出 , 晾干 ,喷以 3写三
氯化铁 乙醇溶液 。供试品色谱 中 ,在与对照品
色谱相同的位置上 , 显相同的蓝黑色斑点 。
2
.
2 苦参 中氧化苦参碱和槐定碱的鉴别
2
.
2
.
1 供试品溶液 的制备 : 取本 品 2 0 9 置
玻板上 , 铺成薄膜 , 晾干后剪碎 ,加人 0 . 2 %
盐酸溶液 10 0 m L ,超声 处理 l h , 倾出上清
液 , 加浓氨试液 ,调 p H S~ 1 0 , 用氛仿提取 3
次 ,每次 20 m L , 合并氯仿提取液 ,蒸干 , 残渣
加氯仿 0 . 5 m L 使溶解 , 作为供试品溶液 。
2
.
2
.
2 对照品溶液的制备 : 取氧化苦参碱和
槐定碱对照品 , 加乙醇制成各含 0 , 2 m g /m L
混合溶液 ,作为对照品溶液 。
2
.
2
.
3 薄 层层析 : 照薄层色谱法 ( 中 国药
典 》95 版一部附 录 35 页 ) 试验 , 吸取供试 品
溶液 25 拜L , 对照品溶液 5 拼L ,分别点于同一
用 2%氢氧化钠溶 液制备 的硅 胶 G 薄 层 板
上 , 以环 己烷 一氛仿 一甲醇 一浓氨试液 (3 : 5 :
1
.
5 ` O
,
5) 的下层溶液 为展开剂 , 展开 , 展距
约 1 5 c m , 取出 ,晾干 ,喷 以碘化秘钾试液 。 供
试 品色谱中在与对照品色谱相应的位置 上 ,
显相同的两个红橙色斑点 。
2
.
3 冰片的鉴别
2
.
3
.
1 供试 品溶液的制备 : 取本品 4 9 ,置于
玻板上 , 铺成薄膜 , 晾干后剪碎 , 置于具塞锥
A d d r e s s
:
W a n g Y u
王玉珍 女 ,副教授 ,
多h e n , L i a o n in g C o ll e g e o f T r a d i t i o n a l C h in e s e M e d i e in e , S h e n y a n g
毕业于沈 阳药科大学 药学系 。 从事分析化学教学与 中药分析的研究 , 近年 来参加多项 中药新药与保健品的研制与开发 ,完成省级科研课题 l 项 , 发表论文近 20 篇 。 现任辽宁中医学院分析化学教研室主任 。
《中草药 》 1 99 9 年第 30 卷第 6 期 . 4 3 1 .
形瓶中 , 加 乙醚 1 0 m L , 密 塞 , 振 摇 , 放 置过
夜 ,倾出上清液 , 作为供试品溶液 。
2
.
3
.
2 对照品溶液 的制备 : 取 冰片对 照品 ,
加甲醇一氯仿 ( 1 , 1) 混合液制成 s m g /m L 溶
液 , 作为对照品溶液 。
2
.
3
.
3 薄层层析 : 照薄层色谱 法 ( 中国药
典 》 1 9 9 5 年版一部附录 35 页 ) 试验 , 吸取供
试品溶液和 对照品溶液各 4 拌L , 分别点于 同
一 以梭甲基纤维基 纳为粘合剂 的硅 胶 G 薄
层板上 , 以 石油醚 ( 3 0℃ 一 6 0℃ ) 一醋 酸 乙醋 -
氯仿 ( 2 2 : 2 : 6) 为展开剂 ,展开 , 取出 , 晾干 ,
喷以 1%香 草醛硫 酸溶 液 , 在 n o ℃烘数分
钟 。供试品色谱中 ,在于对照品色谱相应的位
置上 ,显两个相同的紫红色斑点 。
2
.
4 甘草酸按的鉴别
2
.
.4 1 供试品溶液 的制备 : 取本品 4 0 9 慢
慢滴加水 4 0 m L ,边加边搅拌 , 滤过 , 滤液用
正 丁醇提取 3 次 , 每 次 20 m L , 合并 正丁醇
液 , 用水洗涤 3 次 , 每次 10 m L , 正丁醇提取
液置水浴上蒸干 ,残渣加 甲醇 s m L 使溶解 ,
作为供试品溶液 。
2
.
4
.
2 对照品溶液的制备 : 取甘草酸钱对照
品 ,加 甲醇 制成 Z m g /m L 溶液 , 作为对 照品
溶液 。
2
.
4
.
3 薄层 层析 : 照薄层 色谱法 ( 中国药
典 》 1 9 9 5 年版一部附录 35 页 )试 验 , 吸取供
试品溶液和对照品溶液各 5 拌L , 分别点于同
一以 梭甲基纤维素钠为粘合剂 的硅胶 G F 254
薄层板上 , 以正丁醇 一浓氨试液 一乙醇 ( 2 : 6 :
7 ) 为展 开剂 展 开 , 取 出 , 晾干 , 置紫 外光 灯
( 2 5 4 m m )下检视 。 供试品色谱 中 ,在对照品
色谱相应的位置上 ,显相 同的蓝褐色斑点 。见
图 1 。
3 丹参酮 I A 的含 t 测定
3
.
1 薄层层 析及 扫描条件 : 薄层板 : 含 3 %
毅甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 薄层板 ,
厚 0 . 3 m m , 1 0 5℃ ~ 1 1 0℃活化 3 0 m in ; 展开
剂 : 石油醚 ( 60 C一 g o C 卜苯 一醋酸乙醋 ( 1 5 :
5 : 1 )
, 饱和 1 0 m i n , 展距 8 e m ; 反 射法锯齿
扫描泣 s = 4 8 0 n m 八R一 7 0 0 n m ; S x = 3 。
3
.
2 丹参 酮 E A 提 取方 法 的选择 : 丹参 酮
I A 为丹参中脂溶性成分 , 溶于乙醇 、 醋酸乙
醋 、 乙醚等溶剂 。本品所用成膜材料聚乙烯醇
缩 丁醛也溶于乙 醇和醋酸 乙醋 , 但不溶于 乙
醚 ,故选用 乙醚做提取溶剂 。 提取方法 : 将样
品铺成薄膜 , 挥散溶 剂 , 分别 用 乙 醚①冷浸
2 4 h ;②超声提取 3 0 m in ; ③索氏提取器提取
至无色 ; 第④种方法是取样后 , 直接往样 品中
0
OO
0
八口00
OC
< )
O
o
O O
A 1 2
0
B O O
…1 2
八Un甘
O
D 1 2 E 1 2
A
一没食子 酸 B一氧化苦参碱 C一槐 定碱 D 一冰片 E 一甘草酸铰 1一供试 品 2一阴性 对照
图 1 薄层色谱图
加乙醚至基质析出 , 放置 ,取上清液进行测定 。 3 . 3 供试品溶液的制备 : 取本品 20 9 ,精密称
用上述 4 种方法提取后 , 测定丹参酮 I A 的含 定 , 逐步滴加 乙醚 50 m L ,边加边搅拌 ,定量转
量 , 试验结果表明 , 用第④种方法提取丹参酮 移至 10 0 m L 棕 色量 瓶 中 , 加 乙 醚稀释 至刻
I
A 效率高 。 度 , 充分振摇 ,放置过夜 。 精密量取上清液 50
.
4 3 2
.
mL
,挥散溶剂至 3 m l 矛 ,滴加乙醚 2 0 m L ,边加
边搅 , 定量转移至 50 m L 棕色量瓶 中 , 用 乙醚
稀释至刻度 ,摇匀 , 放置 4 h 。 精密量取上清液
2 5 m L
, 用水 15 m I J 洗涤 , 取 乙醚层 , 蒸干 , 残
渣用氯仿 一无水 乙醇 (4 : l) 混合液溶 解 , 定量
转移至 Z m L 棕色量瓶中 , 用上述混合 液稀释
至刻度 ,摇匀 ,作为供试品溶液 。
3
,
4 对照品溶液的制备 : 取丹参酮 I A 对照
品 , 加乙醇溶解并制成 0 . 5 m g /m L 溶液 , 作为
对照品溶液 。
3
.
5 线性关系的考查 : 吸取对照 品溶液 1 . 0 、
2
.
0
、
3
.
0
、
4
. 。 、 5 . 0 产L , 点于薄层板上 , 按上述
薄层色谱条件展开 , 扫描 , 以丹 参酮 亚 A 点样
量为横坐标 , 以 吸收度积分值为纵坐标作图 ,
得一直线 , 回归方程 为 : Y 一 3 46 . 7 + 1 6 0 53 . 2
X
, r 一 0 . 9 9 8 8 。 测定结果表 明 , 丹参 酮 亚 A 在
。 . 5 0 一 2 , 5 0 拜g 范 围 内 , 具 有 良好 的线性 关
系 。 由于标准 曲线不通过原点 , 定量时应采用
外标二点法 。
3
.
6 稳定性试验 : 取供试 品溶液 10 拜L , 点于
薄层板上 , 按上述色谱条件展开 ,取出 , 晾干后
立即扫描 , 每隔 l h 测定 1 次 , 试验结果表明 ,
丹参酮 I A 斑点吸收度积分值在 Z h 处明显减
小 。 若将薄层板从层析缸 中取出晾干后 ,立 即
覆盖一玻璃板 , 重复上述试验 , 测定结果表 明
丹参酮 I A 斑点在 s h 内稳定 。
供试品溶液稳定性试验 : 将供试品溶液按
0
、
2
、
4
、
6
、
8
、
2 4 h 时间隔测定丹参酮 l ^ 的含
量 ,结果表明 , 在 2 4 h 内供试品溶液中丹参酮
I A 的含量基本无变化 ( R S D ~ 1 . 6% ) 。
3
.
7 精密度试验 : 在同一薄层板上和不 同薄
层板上各点 6 个同样量 (4 爪 J )对照 品溶液 ,按
上述条件展开 、 扫描测定 ,计算 吸收度积分值
的 尺 S D , 同板 为 1 . 2写 ,异板为 2 . 9% 。
3
.
8 样品含量测定 : 照薄层色谱法 ( 中国药
典 》 1 9 9 5 年版一部附录 35 页 )试验 , 吸取供试
品溶液 6 川一 ,对照品溶液 1 与 2 拜L ,分别交叉
点于同一 薄层板上 ,按上述条件展开 , 取出 , 晾
干 , 扫描 , 测定斑点吸收度积分值并计算其含
量 ,结果见表 1 。
3
.
9 回收率测定 : 取 已知含量 的样品约 10 9 ,
精密称定 , 分别精密加入丹参酮 亚 A 对照品溶
液 ( 0 . 91 0 m g / m L ) 1 . 0 m L ,按含量测定项下
方法称定 ,计算平均 回收率为 95 . 4 % , R S D -
2
.
1% ( n = 6 )
。
表 1 样品丹参 酮 I A 含 , 斑点测定 结果
批 号
9 50 70 4
9 50 70 5
95 0 8 0 1
9 50 80 2
含量 (% ) R S D (写 )
0
.
0 0 5 7
0
.
0 0 5 0
0
.
0 0 4 6
0
.
0 0 4 2
4 讨论
4
.
1 由于本品粘度大 ,基质对测定干扰严重 。
在 薄层鉴别 和含量测定时 ,供 试 品溶 液的提
取 、 分 离 、 纯化是经反复试验 、 筛选确定的 , 可
以排除基质干扰 , 测定结果可靠 。
4
.
2 为全面控制本品质量 , 对其相对体积质
量 、 p H 值 、 乙 醇量和水溶性 浸出物进行 了测
定 。
参 考 文 献
1 王宝琴 ,等 . 中成 药质量 标准与标 准物质研究 . 北
京 : 中国医药科技 出版社 , 1 9 9 4 : 2 4 2
2 刘 燕 ,等 . 中国中药杂志 , 19 9 0 , 15( 3) : 31
( 1 9 9 8
一
0 7
一
0 6 收稿 )
丹参 口服液制备工艺研究
河南省中药研究所 (郑州 4 5。。0 4) 蔡中琴 杨亚胜 郑红琴 刘桂 霞
丹参 系 唇 形科 植 物丹 参 S a lo i a m i l t i o ir z a
B ge
. 的干澡根及根茎 ,具有祛央止痛 , 活血通经 ,清
心除烦的功效 。 主治月经不调 ,胸腹刺痛 , 心纹痛等
《中草药 》 1 9 9 9 年第 30 卷第 6 期
病症 。 基于其活血化癖和 抗菌消炎两大功效 , 近年
来 ,丹参的各种制剂广泛用 于临床多种疾病 ,但尤以
冠心病疗效更 为显著 。 为 了完善现有的丹参剂 型 ,我
.
4 3 3
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