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H P L C 法测定离体透皮接受液中丹参酮 1 、 的浓度△
第一军医大学 珠江 医院中医科 (广州 5 1 0 2 82) 钟 伟 奉 王 鹏 邹恒琴
摘 要 建立 了测定离体透皮接受液中丹参酮 n A 的 H P L C 测定法 。 流动相 : 甲醇 一水 ( 85 , 1 5 ) ;紫
外检测波长 2 5 4 n m , 流速 1 m L / m in 。 实验表明在 2 3 0~ 2 3 0 gn /m L 浓度 范围内 ,丹参 酮 l 人 的浓
度与峰高的线性关系 良好 , r 一 0 . 9 9 8 4 。 皮肤渗透液中的丹参 酮 I A 的平 均 回收率为 10 1 . 62 % , 日
内、 日间 R S D 分别为 4 . 45 %及 4 . 23 % 。 该法简便 ,分离完全 ,结果可靠 , 适用 于丹参酮 n A 的离体
透皮液浓度 的测定 。
关键词 丹参酮 I 人 渗透液浓度 H P L C
裕9价啥.6
丹参酮 l ^ ( t a n s h i n o n e I A , T a n I A )是
丹参 S a l v i a m i l t i o r r h i z a B u n g e 的脂溶性成
分之一 ,具有抗心肌缺血作用 。 近年来 , 有人
用 以丹参为主的活血化痕中药制成透皮制剂
治疗冠心病 ,取得 了较好 的疗效 。但 由于丹参
的化学成分结构复杂 、 成分较多 , 有关其透皮
特点的基 础研究 比较 困难 , 为此我们从单一
成分 人手 , 选择 T a n 亚 A 作 为定量研究其透
皮特点的有效成分 , 建立了检测离体透皮吸
收量 的 H P L C 法 。
1 仪器 、 样品与试剂
日本岛津 L C 一 6A 高效液相色谱仪 ; 紫外
可见 检测器 S P D 一 6 A V ; 柱恒温 箱 C T D 一 6A ;
C
一
R 4 A C h o r m
a t o p a e 数 据处 理仪 ; 色 谱柱 :
N u e l e o s i l T C 1 8 ( 2 5 0 m m 只 4 . 6 m m , 5 拼m ) ;
2 0 拌L 进样器 (澳大利亚 ) ; V a l i a 一C h i e n 双室
扩散池 (上海医科大学药剂教研室定做 ) 。
T a n 亚 A 对照品由广东药学 院提供 , T a n
I
A 样品 : 由广州市 医 药工业研 究所用 C 0 2
超临界流体萃取技术从 紫丹参 中萃取所得 。
所用试剂为分析纯 。
2 实验方法与结果
2
.
1 对 照品溶液 : 精密称取 T a n I A 对照品
.2 3 m g 放人 10 o m L 量瓶 中 ,用少量 乙醇溶
解后加 5% P E G 6 0 0 至刻度成为 2 3 拌g /m L
的 T a n I A 对照品溶液 。
2
.
2 分析测定方法
2
.
2
.
1 色谱条 件 : 流动相 为 甲醇 一水 (8 5 :
1 5 )
, 流速 : 1 . 0 0 m L / m i n , 检测波长 2 5 4 n m ,
灵敏度 0 . 0 1 A U F S , 纸速 2 m m /m i n 。
在上述色谱条件下测得 的 T a n I A 对照
品色谱图见图 1 。
2
.
2
.
2 标 准 曲线 的 制 备 : 取
1 0 m L 量瓶 1 0 支 , 分 别 加 人
T a n 亚 A 对 照品溶液 0 . 1一 1 . 0
m L
,然后加入 5% P E G 6 0 0 至
刻度 , 使其终浓度分别为 2 3 0 、
4 6 0
、
6 9 0
、
9 2 0
、
1 1 5 0
、
1 3 8 0
、
1 6 1 0
、
1 8 4 0
、
2 0 7 0
、
2 3 0 0 n g /
m L
。 各进样 15 拌L ,对照 品色
谱峰的峰高 ( H ) 与浓度 ( C ) 在
2 3 0 一 2 3 0 0 n g /m L 范围 内呈
良好 的线性关系 , 回 归方程 : C
= 7 2
.
1 7 3 9 十 0 . 4 7 8 8H , r =余为杂质峰图 1 T a n l ^ O ·
对照品色谱图 .2
9 9 8 4
,
P < 0
.
0 1
。
2
.
3 回 收 率 试 验 : 在 5%
P E G 6 0。 的皮 肤渗 透 接受 液样 品 (浓 度 为
5 7 5
、
1 2 6 5
、
1 9 5 5 n g /m L ) 中精密加人一定量
A d d r e s s
:
Zh o n g W
e i
,
Z h u ji a n g H o s p i t a l o f F i r s t M i li t a r y M e d i e a l U n i v e r s i t y
,
G u a n g z h o u
钟 伟 女 ,第一军 医大学珠江医院中医科副主任 医师 、 副教授 。 1 9 84 年 7 月毕业 于第一军医大学军医系并 留校任教 ,
1 9 8 8 年 9 月考人上海 中医学 院攻读硕士学位研究生 , 1 9 9 1 年 7 月毕业获医学硕士学位 ,其后 一直在珠江 医院中医科从事中
西医结合 内科 的医 、 教 、 研工作 , 主要从事 中西 医结合心 血管的临床与实验研究工作 。△ 国家 自然科学基 金资助课题 批准号 3 9 4 0 0 1 8。
。
9 6
`
的 T a n IA对 照品 , 按上述方法测定 T a n I A
浓度 ,结果 回收率为 1 01 . 6 2% (n 一 3) 。
2
.
2
.
4 精密度试验 : 将上述 3 种浓度的 T a n
l 人 对照品皮肤渗液样 品按标准曲线项下方
法测定对照品峰高 , 同 日内测定 日内误差 , 连
续 3 d 测 定 日 间误 差 , 结 果 日 内 R S D -
4
.
4 5%旧 间 R S D = 4 . 2 3 % ( n = 3 ) 。
2
.
2
.
5 样 品测 定 : 脱 毛并去 除皮 下脂肪 的
S D 大 鼠腹 部皮肤 置于 V al i a 一 C hi e n 双室扩
散池中 , 以 5写P E G 6 0 为 T a n 亚 A 经皮渗透
的接受液 , 在预定时间内从接受液 中取样 15
拜L , 按上述方法测定 T an I A 峰高 , 见图 2 。
3 讨论
本 文参 考 了 以 往 用 H P L C法 测 定丹 参
’ 为 T a n I A , 余为杂质峰
图 2 渗透接受液中 T a n I A 样品色谱图
药材 中 T a n I A 含量 的做 法 〔3 〕 , 但在流 动相
中所用甲醇浓度有所不同 , 当流动相为 85 %
的甲醇时 , 在 T a n I A 对照品色谱 图中 ,其保
留时间为 g m in , 在 T a n l A 经皮渗透液样品
的色谱 图中其 保留时 间同样为 g m in , 与在
此之前出现的杂质峰得到了基线分离 。 整个
操作过程简单 , 保 留时间短 , 分离完全 ,结 果
可靠 。 目前用于中药离体透皮实验的方法 已
有许多 , 高玉 升等 用 U V 三 阶导数和 H P L C
法 测 定 了丹参 酮 I 的透 皮 吸 收率 〔 4〕 , 但 用
H P L C 法测定 T a n I A 的离体透皮量尚未见
报道 。 本文用该法进行 T a n I A 的离体透皮
研究初获成功 ,值得进一步加以推广应用 。
参 考 文 献
1 贝 自强 ,等 , 中医杂 志 , 1 9 8 5 , 2 6 ( 8 ) : 3 2
2 蔡文元 江 苏中医杂志 , 1 9 8 if , 7 ( 1 2 ) : 7
3 王慕 邹 , 等 . 药物分 析杂志 , 1 9 8 5 , 5 ( 6 ) : 3 4 8
4 高玉升 , 等 . 中草药 , 1 9 9 2 , 2 3 ( 9 ) : 4 6 5
( 1 9 9 8
一 0 3
一
0 8 收稿 )
D e t e r m i n a t i o n o f T a n s h i n o n e 1
A i n v i t or P e r m e a b i l i t y C o n e e n t r a t i o n b y H P L C
Z h o n g W
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i
,
W
a n g P
e n g a n d Z o u H e n g q i n ( Z h u j i
a n g H o s p it a l o f t h e F i r s t M il it
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,
G
u a n g z h o u
,
A b s t r a e t
5 1 0 2 8 2 )
H P L C m e t h o d w a s e s t a b li s h e d f o r t h e d e t e r m in a t i o n o f T a n s h in o n e l ^ ( T a n 兀 ^ ) e o n e e n -
t r a t i
o n in t h
e V a li a
一
Ch i e n d i ff u s i o n e e ll
.
T h e m o b i l e Ph a s e e o n s is t e d o f m e t h a n o l
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T h e a s s a y li ne
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·
K e y w o dr s T
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n o n e 互A 艺n v i t 7℃ P e r me
a b il it y e o n e e n t r a t io n H P L C
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《中草药 》 1 9 9 9 年第 3 0 卷第 2 期 9 7