全 文 ：H PL C 法对不同来源红 曲中洛伐他汀的定量分析
沈阳军 医总医院药剂科 (1 1 0 0 1 5) 宋洪涛 每 实鹤鸣” 郭 涛 吴 伟 ” 储文功 ‘ ’
摘 要 采用硅胶柱预处理 一H P L C 对 自制红曲 H 一18 及市售红曲中 的洛伐他汀进行 了定量分析 ,
线性范围 0 . “~ 5 7 . 2 拌g / m L , r 一 0 . ”” , 加样 回收率为 96 . 4 纬 , R S D = 3 . 68 环 。 结果表明 , 各地产
红曲商品药材中有 7 种 洛伐他汀 未测出或 只有痕量 , 5 种含量甚微 (0 . 0 8 ~ 0. 5 51 拌g / g 生药 ) , 而
自制红曲 H 一 18 的洛伐他汀含量最高 , 达 5 拌g / g 生药 。
关链词 红曲 洛伐他汀 H PL C
红曲是一味传统 中药 , 具有活血化疲 、健
脾消食之功效 , 中医传统用于治疗食积饱胀 、
痕滞腹痛等症〔1“。 日本于 80 年代中期发现红
曲霉属真菌 中有些菌种可产生洛伐他汀类似
物 , 此类物质为 3 一经基 一 3一 甲基戊二酞辅酶 A
(HM G
一
C o A )还原酶的特异性抑制剂 , 被认为
是当前最有前途的血脂调节药物〔幻 。我国传统
中药红曲中该类成分的含量如何 , 至今还未见
有报道 , 为此我们 以洛伐他汀为标准对照 , 采
用硅胶柱预处理 一H PL C 法对不同产地的红曲
商品药材及我们诱变育种得到的红曲霉菌种
制备的新红 曲 H 一18 进行了定量分析 。
1 仪器与试药
W
a t e r s 6 高 效 液 相 色 谱 仪 , 5 1 0 泵 、
48 6U V 检测 器 ;试剂均 为分 析纯及色谱 纯 ;
硅胶 H (青 岛海洋化工厂 ) ; 洛伐他汀对照 品
(美国默莎东大药厂 ) 。 13 种红曲样品来源和
产地见表 1 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条 件 : 色谱 住 : N o v a 一p a k , C l : (4 . 6
m m X 2 5 0 m m
, 粒 径 6 拜m ) ; 流 动相 : 甲醇 -
0
.
1 %磷 酸溶 液 一 乙睛 (6 o : 3 0 , 1 0) ; 流 速 :
1
.
2 m L / m in ; 紫外检测波长 : 2 3 7 n m ;满量程
吸收度 : 0 . 0 1 A U F S 。
2
.
2 标准曲线的绘制 : 精密称取洛伐他汀对
照品 5 . 2 0 m g , 用流 动相溶解 并定容 至 10 0
m L
, 分别精密量取适量 , 用流动相逐级稀释
成 0 . 6 5 、 1 . 3 0 、 2 . 6 0 、 5 . 2 0 、 1 5 . 6 、 2 6 . 0 、 3 6 . 4 、
4 6. 8
、
5 7. 2 拼g / m L 的对照 品溶液 , 分别 吸取
25 陀 , 注人色谱仪 中测定 。 以洛伐他汀峰面
积 (Y )对浓度 (X , 拌g / m L )作图 , 得一直线 , 其
回归方程为 : Y = 2 4 5 5 + 7 0 3 6 1X , r 一 0 . 9 9 9 9 。
洛伐他汀在 0 . 65 ~ 57 . 2 拼g / m L 浓度范 围内
线性关很 良好 。
表 1 1 3 种红曲样品来源和产地
编号
H
一
0 1
H
一
0 2
H
一0 3
H
一0 4
H
一0 5
H
一 0 6
H
一 0 7
H
一 0 8
H
一0 9
H
一
1 0
H
一
11
H
一
12
H
一
1 8
来 源
淄博市药材公司
武汉市药材公 司
长沙市药材公 司
江阴市药材公司
永康市药材公司
福州市药材公司
广州市药材公司
上海市药材公司
石家庄市药材公 司
南京市长江南北货商店
镇江市药材公 司
古 田 县药 材公司
本实验室诱变育种所得菌株
经在梗米上发酵而成
产 地
山东周村
不详
不详
江苏 江阴
浙江永康
福建古田
广东蕉岭
广东五华
不详
不详
不详 ‘
福建古 田
本 实验室
2
.
3 灵敏 度 实验 : 当洛 伐他订 浓度 为 Q. 2
拼g / m L 、进样量为 25 拌L 时 , 色谱图上信噪比
大于 4 , 故其最低检测量为 s n g 。
2
.
4 精密度实验 : 测定已知浓度的对照品溶
液多份 , 计算所测浓度的相对标准差 , 结果见
表 2 。
奉
A d d r e s s
:
So
n g H o n g t a o
,
D ep a r tm e n t o f Pha r m a ey
,
Sh e n y a n g M ilit
宋洪涛 男 , 硕 士 , 主管药师 。 1 9 8 9 年 毕业于上海第 二军 医大学药学从事于 “中药复方 的速释及缓释制剂研究 ’、已发表论 文 20 余篇 , 参编著作
默疑翼霜髯奕鳃豁病舞骂位 , 主要
2 部 , 获军 队科 技进步奖 2 项 , 辽宁省科技进步 奖
项 。
~ 上海第二军 医大学药学院
·
1 0 0
.
表 2 洛伐他汀的日内 、 日间盆现性 (n = 3)
益捕慕减凌 - 一 天亏刀(叱)一 - -—(仁g / m L ) 日 内 日间
2
.
6 2
.
5 4 2
.
9 3
2 6
.
0 1
.
3 5 1
.
4 8
5 7 2 1
.
2 9 1
.
3 7
2
.
5 加样 回收率实验 : 精密称取洛伐他汀对
照 品 o · 5 2 m g 与红 曲 H 一 18 10 9 混合均匀 ,
按样品测定法测定 , 计算加样 回收率 , 测得 5
次平均 回收率为 96 . 4 % , R S D 为 3 . 68 % 。
2
.
6 样品测定 : 样品于 6 0 ℃烘干 2 4 h , 粉碎
过 60 目筛 , 取 10 9 , 精密称定 , 置索氏提取器
中用无水 乙 醇 回流提取 6 h , 提取液浓缩成
浸膏样 , 用硅胶 H Z g 拌样 , 60 ℃烘干 12 h ,
上 硅胶 H 层析柱 , 以石油 醚 一乙酸 乙醋 (2 :
l) 低压洗脱 , 收集含有 洛伐他汀 区段的洗脱
液 , 浓缩近干 , 用适量无水乙醇溶解 , 过滤 , 滤
液置于 l m L 容量瓶 内 , 加无水 乙醇至刻度 ,
摇匀即得供试品溶液 。 精密吸取供试 品溶液
25 拜L , 注人色谱仪中测试 , 记录峰面积 , 结果
见表 3 和图 1 。
表 3 样品中洛伐他汀含 t 测定结 果 (n 一 3)
样品编号 平均含 量印g / g ) R S D (写)
H
一0 1
H
一 0 2
H
一0 3
H
一0 4
H
一
0 5
H
一0 6
H
一 0 7
H
一 0 8
H
一 0 9
H
一
1 0
H
一
1 1
H
一
1 2
H
一1 8
痕量
0
.
1 4 5
0
.
2 1 3
0
.
5 5 1
0
0
痕量
0
.
0 8 8
痕量
0
.
3 8 2
痕量
0
4
.
9 9 7
4
.
5 1
4
.
1 5
3
.
3 4
4
.
2 7
时间 r(而n )
A
一洛伐他 汀 B 一红曲
图 1 洛伐他汀和红 曲供试品 H P LC 图
3 讨论
3
.
1 红曲置索氏提取器 中依 次用石油醚 、氯
仿 、 乙醇回流提取 6 h , 结果发现 : 红曲的石油
醚 、 乙醇提取液中均含有少量 洛伐他汀 , 可见
在石油醚 中 , 红 曲中其它物质对 洛伐他 汀有
助溶作用〔3〕 ;红 曲中可能由于含有大量多糖 、
蛋 白质等物质 , 加之氯仿对药材组织 的渗透
润湿作用低 , 致使用氯仿不能提取完全 ; 又取
红 曲适量置索氏提 取器 中用 乙醇 回流提取 6
h
, 残渣烘干 12 h , 再用氯仿提取 6 h , 未发现
氯仿提取液 中含有 洛伐他汀 , 可见 单用 乙醇
提取是 比较完全的 。
3
.
2 红 曲的氯仿 、 乙醇提取液均含有大量杂
质 , 又因其洛伐他汀含量甚微 , 提取液难 以浓
《中草药 》1 9 9 9 年第 3 0 卷第 2 期
缩至适宜浓度 , 故我们采用 乙醇提取
物浓缩成浸膏样上硅胶 H 柱再洗脱
的办法 , 以去除大量的极性极弱及强
极杂质 。 加样 回收率实验证 明 , 此方
法是可行的 。
3
.
3 我们 曾用薄层 层离 一紫外 光谱
法和薄 层扫描法对红 曲中洛伐他汀
进行定量分 析 , 误差大 , 而 H PLC 法
灵敏 、 重现性较好 , 可适用于红 曲中
洛伐他汀的定量分析 。
3
.
4 本研究采用 H PL C 法测定不同
产地红曲中的洛伐他汀含量 。 结果表明 , 各地
红曲虽然均为紫红曲霉菌接种于大米上发酵
而成 , 但其洛伐他汀的含量差异颇大 。 这 一可能
与菌株不同及发酵条件不同有关 。 我们通过
诱 变 育 种 得 到 的 紫 红 曲 霉 变 异 菌 株
。了d n a s c u s P u rP u re u s M S 1 8 )制备 的新 红 曲
H
一 1 8 中洛伐他 汀含 量 (4 . 9 7 拌g / g 生药 )远
高于各地产红曲商品药材 。
参 考 文 献
1 江苏新 医学 院编 . 中药大辞典 . 第一 版 . 上海 : 上海 人
民出版社 , 1 9 9 7 : 9 9 1
2 S hig e n o r i N
, e t a l
.
J A n t ib io t ie s
, 1 98 6
, 6 4 (6 )
: 50 9
3 E n d o A
.
J A n t ib io t ie
s , 1 9 7 9 , 3 2
:
8 5 2
(1 9 9 8
一
0 5一 0 4 收稿 )
1 0 1
D e te rm in a tio n o f L o v a s ta tin in H o n g q u fr o m V a r io u s S o u r c e s by H PL C
S o n g H o n g t a o
,
M i H
e m in g
,
G u o T a o
, et a l
.
(P ha rm a e e u t ie a l D e p a r t m e n t o f S h e n y a n g M ilit
a ry R e g io n
G e n e r a l H o s p it a l
,
S h e n ya n g 1 1 0 0 1 5 )
A bs tr a c t H o n g q u
, a w e ll k n o w n T CM p
r e p a r e d b y fe rm e n tin g rie e w ith 材o n a s c u s Pu rP u r e u s W e n t
(五了。n a sc a c ea e ) , u se d fo r th e Pr o m o tio n o f b lo o d e ir eu la tio n a n d t o r e s o lv e b lo o d s ta s is , w a s sP e e u la t e d t o
e o n ta in s o m e
“ s ta t in s ”
.
P r e t r e a tm e n t
一
H PL C 15 a p Plie d to d et e rm in e lo v a s t a tin in H o n g q u H
一
1 8 m a d e in o u r
o w n la bo r a t o ry a n d s o m e o th e r eo m m e r e ia lly a v a ila b le H o n g q u s a m p le s
.
T h e s ta n d a r d e u rv e 15 lin e a r in th e
e o n e e n t r a t io n r a n g e o f o
·
6 5~ 5 7
·
2 拌g / m L , th e e o r r e la tio n eo e ffie ie n t 15 0
·
9 9 9 9
·
T h e a v e r a g e r e eo v er y r a te 15
9 6
,
4 %
a n d r e la tiv e s ta n d a r d d e v ia t io n 3
.
6 8 % (
n = 5 )
.
T h e r e s u lts s h o w e d th a t H o n g q u fr o m diffe re n t e o m
-
m e r e ia l s o u r e e s e o n t a in n o o r o n ly a s m a ll a m o u n t o f lo v a s ta t in (0
.
0 8 8~ o
·
5 5 1 拼g / g ) , bu t a m o u n te d to a lm o s t
5 拜g / 9 in H o n g q u H 一 1 8
K e y w o r d s H o n g q u lo v a s ta t in H PL C
H P L C 法比较不同工艺制备的黄连解毒汤及
日本汉方黄连解毒汤中黄等昔含量
沈 阳药科大学 中药系 (l 1 0 0 15 ) 沈 嘉 , 吴秋媚 ”
摘 要 用 H PL C 方法 测定 4 种 不同工艺制备 的黄连解毒汤提取物粉末及 2 种 日本 汉方制剂黄
连解毒汤 中的黄琴昔含量 。 结果表明方法 简便 、快速 、精密度及 回收率好 , 适合 于制剂生产中多批
量产 品的质 量控制 。 采用 此法 比较了不 同工艺 制备 的黄连解毒汤及 日本汉 方制剂 东洋黄连 解毒
汤 、 津村黄连解毒汤的黄琴昔的含量 。
关键词 黄荃昔 黄连解毒汤 汉方制剂 HP L C 测定
黄连解毒汤原载于唐 · 《外 台秘要 》, 由
黄连 、黄荃 、 黄柏和桅子组成 , 为清热解毒的
代表方 。 经现代实验药理学研究发现该方具
有抗菌 、解热 、抗炎 、降压和调节免疫功能等
作 用 。 近 年 报 道 , 黄 连 解 毒 汤 (以 下 简 称
H L JD T ) 尚有改善脑血流 作用 , 用于 治疗脑
卒中后遗症 , 改善脑血管性痴呆症状等 , 该方
亦有 明显的益智 、抗衰老作 用〔‘, 2 , 。
在 日本 H L JD T 的药理研究及临床应用
范围同样较广 , 并有不 同汉方药公 司生产的
几种 H L JD T 颗粒剂 , 如东洋黄连解毒汤 、津
村黄连解毒汤 , 是临床上治疗高血压的两大
代 表方 (H L JD T 和钩藤散 ) 中应用率较高的
一个 , 还较多的应用于治疗脑血管病如 :脑梗
死 、脑 出血后 陈旧 性半 身不遂 , 阿耳 茨海默
病 , 帕金森氏症 ;还用于湿疹 、带状疙疹等症 ,
可见其临床应用范围之广 〔3 , 4〕。
黄连味苦 , 传统水煎剂及 日本汉方颗粒
剂都不便 口 服 , 故 以 新工艺制备 H LJD T 提
取物 , 减少服用剂量以利制成固体制剂 。现将
不 同工艺制备的 H LJD T 提取物与 日本汉方
制剂的主要有效成分含量进行 比较研究 。 本
文报道黄荃昔测定结果 。
l 仪器与色谱条件
A d d r e s s
:
S h e n Jia
,
D e p a r tm e n t o f C hin e s e M a t e r ia M e d ie a
,
S h e n y a n g 尸h a r rn a e e u tie a lU n iv e r sy ty , She n y a n g沈 嘉 女 , 1 9 8 2 年毕业 于沈 阳药学院 , 学士 , 高级工程 师 。 从事药用植物 及复方 中药 有效 成分富集提取及活性 测定 工
作 。 1 9 9 1 年一 1 9 9 3 年在瑞典 U p p sa la 大学 生物医学 中心进行药用植物 中血小板活化 因子 (PA F )拮抗剂 、 5 一脂氧合酶 、 环氧
合酶抑 制剂的体外筛选工作 , 参 加银杏标准提取物研究工 作 。 1 99 6 年 8 月 ~ 1 9 9 7 年 3 月 应 日本岛根医科大学邀请 , 参 加文
部省课 题 , 进行复方 中药 中抗 炎及免疫调节成分研究等 。在 国内外刊物上发表论文 10 余篇 。 “无糖富集有效成分提取及其制品 ”获 国家发明专利 。
“ ‘ 本校 61 期毕业实 习 生
.
1 0 2
-