全 文 ：谢指 标— 血清 L D H 和 CP K 活性也呈下降趋势 ; 明显改善垂体后 叶素所致心肌缺血 、
缺氧小 鼠的生存 时间 。
综上所述 , 舒心胶囊明显缩小犬心梗范
围 , 明显保护大 鼠急性心肌缺血 , 证明该方抗
心肌缺血作用明显 , 为临床防治冠心病 、心绞
痛等疾病莫定了坚实基础 。
参 考 文 献
李连达 , 等 . 新医 学杂志 , 19 7 8 , (7 ) : 3 4 5
徐叔 云 , 等 . 药理 实验方法 学 (第二 版 ) . 北京 : 人 民卫
生 出版社 , 19 9 1 : 9 3 3
徐叔云 , 等 . 药理实验方法学 . 北京 : 人 民卫生出版社 ,
1 9 8 2
:
7 1 3
(1 9 9 9
一
0 5
一
1 9 收稿 )
大承气汤颗粒剂对大鼠肠平滑肌细胞内三磷酸肌醇的影响
武警医学 院药理教研室 (天津 3 0 0 1 62) 谢文利 ’ 林秀珍“ 齐 刚
摘 要 观察 了大 承气汤颗粒剂 对大鼠肠平滑肌细 胞内三磷 酸肌醇 (I P 3 )的影 响 。 体内外实验发
现 : 50 % , 10 % , 25 0 %大承 气汤可使肠梗阻大 鼠肠平滑肌细胞内 IP 3含量明显升高 (尸< 0 . 0 5 ) 。 IP 3
可介 导肠道 平滑肌 的收缩 , 大 承气汤 的通 里攻下 , 增强 胃肠道推 进功能 的作 用很可能是 通过激活
肌醇脂质 IP3信号转导 系统使胃肠平 滑肌细胞内 Ca ’+ 释放增加 , 再通过钙调蛋 白间接地激活一系
列 的蛋 白激酶而实 现的 。
关键词 大承气汤 IP 3 肠道 平滑肌
大承气汤是《伤寒论》中重要方剂之一 , 医 院制剂室提供 (实验所用 5 0 %大承气汤 由
由大黄 、积实 、厚朴 、芒硝 4 味中药组成 。功擅 10 0 %大承气汤颗粒剂加双蒸水稀释 1 倍 制
通 胃结 , 救 胃阴 , 承顺 胃气之下行 , 散结通便 。 成 , 2 50 %大承气汤 由 10 0 %大承气汤颗粒剂
大承气汤能增强 胃肠道推进功能 , 从 而产生 加 热 浓 缩 2 . 5 倍 制 成 ) 。 IP 3 测 定 试剂 盒 :
显著泻下作用川 , 近年来 , 人们发现肌醇脂质 A m er sha m 公司 出品 ;胶原酶 : Si g m a 公 司出
(肌醇磷脂和肌醇磷酸酷的总称 )在细胞跨膜 品 ; H E P E S : G ib co 公司出品 ; 谷氨酞胺 : 天象
信号传递 中起着重要作用 , 被称为新的信息 人公司出品 ; 牛血清白蛋白 : 中国医药公司北
通路—肌醇脂质信导系统 。 其中的三磷酸 京公司出品 ; PPO : Se rv a 公司出品 ; PO PO P :肌醇 (I P 3 )促 进肌 收 缩 的作 用 机制 也 已 阐 上海试剂厂 出品 ; T ri to n X 一1 0 : 上海试剂采
明图 。 由此可见 , IP 3是参与调节消化道平滑 购供应站出品 ; ME M : 日本制药株式会社出
肌活动的重要物质 。 笔者采 用了放免分析法 品 ; 其余化学试剂均系国产 、分析纯 。
测定 了 大承气 汤作 用下肠道平 滑肌细胞 内 1 . 2 仪 器 : Pac k ar d 2 0 0 0C A 液 闪 仪 ; G L -
IP
3的变化 , 以探讨大承气汤 的通里攻下作用 ZOG 一 I 型全 自动高速冷冻离心机 , 上海安亭
是否与肌醇脂 质信号系统的作用有关 , 从而 科学仪器厂 ; H Z S 一H 水浴振荡器 , 哈尔滨东
为进一步阐明大承气汤泻下作用的机制提供 联 电 子 技 术 开 发 有 限 公 司 ; 旋 涡 振 荡 器
理论依据 。 (U S A ) ;液闪瓶 (2 0 m L ) , 南通塑料制品厂
l 材料与方法 1 . 3 动 物 : W is tar 大 鼠 , 雌 雄 兼 用 , 体 重
1
.
1 试剂和药品 : 大承气 汤颗粒剂 , 浓度为 19 0 一 2 5 0 9 , 天津药物研究院动物室提供 。
1 0 0 %
。
(相当于 1 9 生药 / m L ) , 天津市南开 2 方法与结果
A d d
r e s s : X ie W
e n li
.
De p
a r tm e n t o f P h a r m a e o lo g y
,
M e d ie a l C o lle g e o f C PA P F
,
T ia n jin
” 天津医科大 学药理教研室
《中草药 》1 9 9 9 年第 3 0 卷第 2 2 期 . 9 2 3 .
2
.
1 体内实验 : 取大 鼠随机分为 5 组 。 肠梗
阻模型组 : 取大鼠在乙 醚麻醉下 , 沿腹中线耻
骨联合上 2一 3 c m 处打开腹腔 , 以 回盲部为
界 , 在其向头端 Z c m 处穿线结扎 1/ 2 回肠 ,
造成不完全性肠梗阻模型 。 手术后立即用生
理盐水 19 , 剂量 1 m L / 1 0 0 9 , 肠管梗阻 24 h
后再用相同剂量生理盐水 馆 1 次 。 l h 后处
死动物 。手术对照组 : 手术方法同肠梗阻模型
组 , 只 是用粗线 穿过 1/ 2 回 肠 , 但不 结扎肠
管 , 没有造成 实 验性 肠梗 阻 。 5 0 % , 10 0 % ,
2 5 0 %大承气汤治疗组 : 分别用 50 % , 1 0 0 % ,
25 0 %大承气汤 代替 生理 盐水 19 , 剂 量为 1
m L / 10 0 9 (分 别相 当 于 5 , 1 0 , 2 5 9 生 药 /
k g )
, 其余步 骤同肠梗 阻模型组 。 按文献方
法川略加修改 : 将大 鼠断头处死 , 立即从原切
口处打开腹腔 , 自结扎部位 向上剪取梗阻肠
管 或 相 应 对 照 组 肠 管 一 段 , 用 H E P E S -
R in g e r 缓 冲液 (m m o l/ L , p H 7 . 4 ; H E P E S ,
24
.
5 ; N a C I
: 1 0 1 ; K C I
: 1 3 ; N a H
Z
PO
4 : 2
.
5 ; C a
-
C1
2 : 1
.
8 ; M g C 1
2 : 1
.
2 ; g lu t a m in e
: 5 ; g lu e o s e
:
1 1
.
5 ; 0
.
1 % w t / v o l a lb u m in )将肠 管 内粪便
冲洗干净 , 除掉大网膜 , 小心 剥去浆膜 、纵行
肌 , 刮掉粘膜后 , 将环行肌剪成 Z m m , 小块 ,
温育于 1 0 m L 含 0 . 0 5 % 胶原 酶的 消化液
中 , 在 3 O C 振 荡水 浴 中 , 通人 95 % 0 2 和
5% CO
Z消化 2 0 m in , 弃去消化液 。 同等条件
再消化一次 . 用无酶 的 H E P E S 一Ri n g er 液洗
3 次 , 每次 1 0 m L 。 最后重新悬浮于 H E PE S -
R in g er 液 中 , 5 0 拌m 尼 龙网过筛 , 收集 于充
0
2 的烧杯 中用 白血球计数板确定细胞浓度 。
调整细胞浓度为 s x 1 o “/ m L , 每管 Z m L 。 用
A m e r s ha m 公 司 Ip 3 (1 , 4 , 5 )’H 测定试剂盒
测定肠平滑肌细胞 内 IP 3含量 , 结果见表 1 。
模型组肠平滑肌细胞 内 IP 3含量 明显低于手
术对照组 (P < 0 . 0 5 ) , 5 0 % , 1 0 0 % , 2 5 0 %大
承气汤治疗组肠平滑肌细胞 内 IP 3含量明显
高于模型组 (尸< 0 . 0 5 ) 。表明 : 在肠梗阻模型
中 , 大承气汤可使肠 平滑肌细胞 内 IP 3 含量
升高 。
2
.
2 体外 实验 : 取大 鼠 , 按文献方法川略加
·
9 2 4
.
改动制备肠平滑肌细胞悬液 : 断头处死大鼠 ,
以回盲部为界 。 在其向头端 Z c m 以上取出
一段回肠 。 用 H E PE S 一R in g er 液将肠管冲洗
干净 , 除去大网膜 , 小心剥去浆膜和粘膜 , 纵
行肌 , 将环行肌剪成小块 。 放人 M E M 培养
液中 (p H 7 . 4) , 加人 0 . 1 %胶原酶 , 在振荡
式水浴 中温育 1 5 m in , 2 5 o x g 离心 5 m in 。
同法再温育 巧 m in 。分散的平滑肌细胞用 50
拼m 尼龙网过筛 , 重新悬浮于 M EM 液中 。 取
4 支试管 , 加人肠平 滑肌细胞悬液 , 使细胞浓
度为 S X IO”/ m L , 总体积 Z m L 。 前 3 管分别
加人 5 0 % , 1 0 0 % , 2 5 0 %大承气汤各 1 0 0 拜L
(分别相 当于 生 药 0 . 0 5 , 0 . 1 , 0 . 2 5 9 ) , 第 4
管加人双蒸水 10 。 拌L 作为空白对照 。 摇匀
各管 , 在 p H 7 . 4 , 3 7 ℃ 水浴温育 1 5 m in , 迅
速液氮冷冻终止反应 。 25 O X g 离心 5 m in , 弃
去上层液 。 用 H E PE S 一R in g e r 液洗 2 次 , 重
新悬浮试管 内沉淀的细胞 , 测定 IP 3含量 。 IP 3
的提取和测定方法同体 内实验 。 表 2 结果显
示 : 10 0 % , 2 5 0肠大 承气 汤组 IP 3 含量 升 高
(尸< 0 . 0 5 ) , 5 0 % 大承气汤组与对照组相 比
统 计学分 析差 异虽 不显著 (尸 > 0 . 0 5 ) , 但
IP
3含量也有所提高 , 提示在本实验条件下大
承气汤可使肠平滑肌细胞 内 IP 3含量增高 。
衰 1 大承气汤体内对 IP ,含 , 的影晌‘士s)
组别 剂 l
(g 生药 / k g ) 例数
IP 3含量
(Pm o l/ 管 )
手术对照
模型对照
大承气汤
l0
艺6
8
.
9 3士 3 . 6 9 ,
4
.
2 5士 2 . 2 1
7
.
9 7 士 2 . 1 6 份
9
.
5 8 士 3 . 5 3 .
17
.
6 7 士 4 . 8 8 ’
与模型组 比较 : ’ 尸< 0 . 05
裹 2 大承气汤体外对 IP 3含 , 的影晌任士 : )
组别 剂 t
(g )
例数
IP3 含量
(p m o l/ 管 )
正常对照组 一 7 9 . 35 士 4 . 31
大承气汤 0 . 0 5 7 13 . 0 7 士 5 . 5 0
0
.
1 7 1 7
.
4 6 士 6 . 4 7 件
0
.
2 5 7 22
.
5 7士 5 . 9 0 ‘
与正常对照组 比较 : . 尸< 0 . 05
3 讨论
大承气汤具有通里攻下 , 泻热 除满等作
用 , 为治疗阳明腑实证的主方 。动物实验证明
大承气汤有明显的胃肠推进及增加肠容积的
效应 。 用正交设计 L , (3 今) 方法对本方进行小
鼠还纳 、泻下 、肠容积 、肠容物移行速度实验 ,
认为此 4 项 指标与中医 “通里攻下 ”相符阁 。
同时 , 人体研究也证明 , 本药可兴奋小肠肠管
的运 动功能 , 导泻 的成功与否常是大承气汤
取得疗效的关键 [6] 。 因此其临床应用绝大数
都与它的泄下作用有关 。 可见在大承气汤的
作用中 , 增强 胃肠道推进功能是最基本 、最主
要的作用 , 在其临床治疗 中也主要是利用它
的这一通里攻下作用 。
以往研究已 证明 : 消化道平滑肌活动主
要由两个信号转导系统调节 。 其 中环核昔酸
系统 (c AM P 、 。G MP ) 介导舒张 、肌醇脂质信
号系统介导收缩的机制已经阐明 。 在肌醇脂
质信 导系统 中 , IP3是 介导 肌收 缩的 主要物
质 。 它和 c A MP 一样 , 也是一种细胞信号传
递的第二信使 , 可广泛地参与各种细胞活动 ,
如 : 肌 肉收缩 , 分 泌 , 细胞分裂 , 膜运输 , 电生
理现象 , 膜融合和受精等过程川 。 三磷酸肌醇
受体 (IP 3R ) 至少有 4 个成员 : IP3 R 一 ( I , I ,
l , W )
。 它广泛分布于各组织细胞 。 但各型
受体在不 同组织的分布和多寡不尽相 同 , 在
肠道平滑肌中 IP 3R 一 l 最丰富 。
细胞对外 界刺激 , 诸如激素 、神经递质 、
细胞因子等应答对 。 通过细胞膜上的 G 蛋 白
偶联或酪氨酸偶联受体接受刺激信号 。 激活
磷醋酶 C (P LC ) 水解 PIP Z产生 IP 3 。 目前已
知 IP 3R 主要位于内质网 (E R ) 膜上 , 而内质
网 又是 IP 3 敏 感钙 池 [8j 。 这样 水解 产 生 的
IP
3
R 就可与内质网膜上的 IP3R 结合 。 完整
的 IP 3 R 是 由相 同亚单位 构成 的 同质 四 聚
体 。 四 聚体 IP 3 的每个亚单位均含有一个独
立 的 IP 3结合位点 , 并能结合一分子 IP 3各 r亚
单位与 IP 3 分子相互作用 , 引起 四聚体 IP 3R
构象改变 , 使 C a Z十通道开放 , 将 C a Z + 从 内质
网中释放出来 , 使细胞内 C a 2+ 浓度升高 。 直
接或通过钙调蛋 白 (C a M ) 间接地激 活一些
蛋白激酶 , 调节蛋 白的磷酸化 , 对细胞外信号
作 出应答反应—平滑肌收缩 [9, ‘0]参 考 文 献
l 吴咸中 , 等 . 急腹 症研究 . 上海 : 上海科 学技术 出版
社 , 1 9 8 8 : 1 8 6
2 Be
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.
B ioc h em J
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2 2 0
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3 4 5
3 方福德 , 等 . 现 代医学 实验技巧全 书 . 下册 . 北京 : 北
京 医科 大学 中国协 和医科大学联合 出版社 , 19 96 : 15 7
4 A g n ie s z k a L
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C o m p B ioc he m Phy s io l
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1 0 Z o r z a to F
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J B io Ch e m
, 19 9 0 , 2 65 : 22 4 4
(1 9 9 9
一
0 5
一
1 9 收稿)
全国老年病防治经验学术交流会征稿
资料显 示 , 我 国老龄人 口 的 比重 已接近 10 % , 社会老龄化 问题 已迫 在眉睫 , 对老年病的研究成果急需整
理和提高 。 受中国中医药学会委 托 , 安徽中医临床杂志社拟 于 2 0 0 0 年 7 ~ 8 月举办全国老年病防治经验学术
交流会 , 本次会议 已 列人中国 中医药学会学术部 2 0 0 0 年学术计划 。现 面向全国中医中西医结合临床工作者广
泛征稿 。
1 征稿主要内容
1) 老年病现代研究进展及 研究发展思路探讨 ; 2) 有 关老年生理 、病理 的基础 研究 、临床研 究及实验研究 ;
3) 临床各科老年病诊治经验总结及名 医经验介绍 ; 4) 老 年养 生保健 及老 年病防治护理 经验介绍 ; 5) 其他相 关
内容 ,
2 征稿注愈事项
l) 来稿体裁不 限 , 资料 必须真实 , 并请附 2 0 0 字左右作者简介 。 截稿 : 2 0 0 0 年 5 月 30 日 ; 2) 来稿由会议专
家组集体评审 , 人选论文 汇编论文专辑 , 在具 C N 刊号杂志上公开发表 , 参会代表由中国 中医药学会颁 发征 文
证书 , 并授中医 1 类继续教育学分 ; 3) 来稿请寄中医临床杂志社 , 地址 : 合肥市大通 路明光小区 5 检 邮编 :
2 3 0 0 1 1 联系人 : 汪新安 电话 : 0 5 5 1 一 4 4 7 5 7 7 5
(中草药 》1 9 9 9 年第 3 0 卷第 1 2 期 9 2 5