全 文 ：· 药剂与工艺 ·
高效毛细管电泳分离测定颠茄制剂中蓖营类生物碱
中国药科大学药物分析室 南京
上海长海医院临床药理室
林 梅 带
范国荣
张正行 安登魁
胡晋红
摘 要 选择毛细管区带电泳分离模式 , 以麻黄素为 内标建立了适合蓖若类生物碱阿托品 、东蓑
若碱 、山蓑若碱 、樟柳碱优化分离与颠茄配剂及片剂定量分析的高效毛细管电泳方法 。 电泳分离条
件 毛细管 拜 ,运行缓冲液 磷酸盐溶液一四氢吠喃 , 电迁移
进样 ,运行电压 一 , 柱上检测 , , 毛细管柱温
℃ 。 本法简便 、快速 、重现性好 ,可用于含蓑若类生物碱中药制剂的质量控制 。
关键词 高效毛细管电泳 阿托品 东蓑若碱 山蓖若碱 樟柳碱 颠茄
蓑若类生物碱种类繁多 , 广泛存在于茄
科植物蓑若 场夕。 种子 天仙
子 、 东蓑若 吵 冲 · 根 、
颠茄 口 叶 、 白花曼陀 罗
‘。 花 洋金 花 及唐古特山蓑
若 八 根 、种子中 ,
阿托品 一蓑蓉碱 、东蓑若碱 、 山蓖若碱及
樟柳碱是其中 种主要 的蓑若类生物碱 , 具
有重要的医疗用途 〔‘ , 〕 。 目前其分析的方法有
薄层 扫描法 、 气相色谱法和高效液相色谱
法〔, 一 〕 , 高效毛细管电泳 在一些中药
有效成分分离分析方 面获得 了成 功的应
用〔, , 。我们将高效毛细管电泳应用于蓑若类
生物碱阿托品 、东蓑若碱 、 山蓑若碱 、樟柳碱
的系统分离及颠茄配剂及片剂的定量分析 。
仪器与试药
高效毛细管 电泳仪
, 一 型 酸度计 上海雷磁仪
器厂 。标准对照品阿托品 、东蓖若碱 、山蓑若
碱由中国药品生物制品检定所提供 , 樟柳碱
由解放军总医院制剂室提供 。 颠茄配剂为上
海美优制药厂产 品 , 颠茄片剂为上海黄河制
药厂产 品 。
方法与结果
电泳分离条件 毛细管 又 拌 ,
缓冲液 磷酸盐溶液 一四
氢吠喃 , 电迁移进样 , 运行
电压 一 一 , 柱 上检测
, , 毛细管柱温 ℃ 。
麻黄素为内标 , 在优选的电泳分离条件
下 , 阿托品 、东蓑若碱 、山蓑若碱 、樟柳碱系统
分离 的电泳谱 图 见 图 , 其 中麻黄素
, 阿托品 。 , 东蓑蓉碱 。
, 山蓑若碱 , , 樟柳碱 ,
。
标准曲线制备 精密称取阿托品、东蓑
若碱 、 山蓑若碱及 内标麻黄素适量 一
, 用 重蒸水溶解定容至 量瓶
中 , 作为标准对照品贮备液和 内标贮备液 。精
密吸取各贮备液一 定量 , 置于 同一 量
瓶中 ,配制成含阿托品 拜 、山蓑若碱
拌 、东蓑若碱 拼 的混合标准
‘ , , ! , 林 梅 女 , 讲师 。 年毕业于中国药科大学获药物分析学硕士学位 , 留校从事药物分析的教学与科研工作 。 现在职攻读中国药科大学博士学位 , 开展中药质量控制与体内动态分析的毛细管电泳研究 。 近年来在药物代谢动力学与中药毛细管电泳分离分析方面做了一些工作 , 发表论文十余篇 。
· ·
液 。 用重蒸水稀释内标贮备液 , 配制成
拜 的麻黄素内标溶液 。 分别准确吸取混
合标准液 、 、 、 、 拼 , 加 内标
液 拜 , 用重蒸水稀释 定容至 , 混
匀 。取 拼 以 离心 后 , 置
电泳仪中进样分析 。 以蓑若类生物碱峰面积
与内标峰面积比 对相应的浓度 进行
线性 回归 , 计算回归方程 , 即阿托品 一蓑
若碱 , , · ,
定量线性范围 拼 一 拌 山蓑
若碱 , ,
定量线性范围 拌 一 拼 东蓑
若碱 ! ∀ # ∃ # % & , r = 0 . 9 9 9 9 ,
定量线性范围 4.5 拜g / m IJ一2 · 5 拜g / m L 。
2
.
3 颠茄配含量测定 :准确吸取颠茄配 40
拜L , 加 50 m m ol/L 磷酸盐缓冲液 (pH s.o )
100 拌L , 加内标液 10 川J , 用重蒸水定容至 1
m L , 混匀 , 以 2 000 r/m in 离心 5 m in 。 准确吸
取上清液 50 拜L , 置于电泳仪中进样分析 。 图
IB 为颠茄配 H P C E 电泳谱图 , 其中 t, 4 . 6 5
m i
n 为内标 电泳峰 , t , 4 . 9 0 m i n 为 阿托品
(D L 一蓑若碱)电泳峰 , t 。 5 . 16 m in 为山蓑若
碱电泳峰 , t , 5 . 56 m in 为东食若碱电泳峰 ,
颠茄配中未检出樟柳碱电泳峰 。 以标准曲线
法计算颠茄配中阿托品 (D L 一蓑若碱)浓度为
301 .5 拜g / m L , 山食若碱的浓度为 14 .32 拼g /
m L , 东食若碱的浓度为 12 .94 拜g /m L 。 3 种
蓑若碱总浓度 为 32 8.8 拼g /m L , 即颠茄配总
生物碱含量为 。. 0 3 2 8 8 % (g /m L ) , 基本接近
药典 规 定 总 生物碱 含量 应 为 :0.028 % ~
0. 03 2 % (g /m L )的上限值 。
2
.
4 颠茄片含量测定 :随机取颠茄片 10 片 ,
称量 , 求出平均片重 , 研细后称取相当于 1 片
重粉末 , 加 乙醇 5 m L , 涡旋振荡 2 m in , 超声
提取 5 m in , 4 0 0 o r / m i n 离心 5 m in , 取上清
液转移至具塞刻度试管中备用 。 准确吸取颠
茄片 乙醇提取液 40 0 拌L , 加 50 m m ol /L 磷酸
盐缓冲液 (pH s.o) 10 0 拜L , 加麻黄素内标液
100 拌L , 用重蒸水稀释定容至 1 m L , 混 匀 ,
Z 0 0 0
r
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n 离心 5 m in 。 准确吸取 50 拌L 上
《中草药》1 9 9 8 年第 29 卷第 8 期
清液 , 置电泳仪样品盘中进样分析 。 图 IC 为
颠茄片 H PC E 电泳谱图 , 其中 ‘ 4. 68 m in 为
麻黄素内标峰 , t , 4 . 97 m in 为阿托品 (D L 一蓑
若碱)峰 , t 。 5 . 1 6 m i n 为微量山蓑若碱峰 。 颠
茄片中阿托品 (D L 一蓑若碱 )含 量 73 .98 拼g ,
检出的山蓑若碱含量约为 8.63 拌g (峰面积
比较估算 ) , 即每片颠茄片中含 总生物碱为
0.08261 m g , 与颠茄片标示量每片 0.08 m g
基本一致 。
犷丽 叫一- - ~一叫获了一一一—气瓜3时间 t(m in)A 一标准对 照品 B 一颠茄配样品 C 一颠茄片样 品
图 1 蓖若类生物碱毛细管电泳分离谱图
2.5 精密度试验 :标准对照 品混合液 , 在上
述 电泳分离条件下 , 按 “标准曲线制备 ”项下
配制进样溶液 ,连续进样 6 次 ,结果求得阿托
品浓度 R S D 2.4% , 迁移时间 R SD 1.1% ;
山蓑若碱浓度 R S D 1.8 % , 迁移时间 R SD
1.5% , 东夏若碱浓度 R SD 2.6% , 迁移时间
R SD 0.97 % 。
2
.
6 重现性试验 :按样 品测 定方法 , 对颠茄
制剂进行 5 次平行试验 , 结果颠茄配中阿托
品 浓 度 R SD I.8% , 山 蓑若 碱 浓度 R sD
2.4 % , 东蓑若碱浓度 R SD 2.1% ;颠茄片中
阿托品浓 度 R SD 2.2% , 山莫若浓度 R SD
3.6% 。
一
5 1 9
-
乞 · 加样回收率试验 ;准确吸取已知含量的
颠茄酌 20 0 拜L. , 加入一定量的标准对照品阿
托品溶液 100 拼L ( 6 0 0 拌g / m L ) 、山蓑若碱溶
液 100 拌L (一0 0 拜g / m L ) 、东蓑若碱溶液 100
林L ( 90 拌g / m L ) , 按颠茄配含量测定方法处
理 , 计算颠茄配的加样 回收率 , 结果阿托品为
98.78% (n = 3 ) , R S D 2 . 1 % ; 山蓑 若碱 为
101.4% (n = 3) , R S D 1 . 6 % ; 东 蓑 若碱 为
98· 6 1
% (
n 一 3 ) , R S D 1 . 9 % 。 精密称取相当
于 1 片重量的已知含量的颠茄片粉 , 加入一
定量的标准对照 品阿托品溶液 l m L (600
拌g / m L ) , 按颠茄片含量测定方法处理 , 计算
颠茄片加样 回收率 , 结果阿托品为 97 .25 %
(n = 3) , R S D 2 . 5 % 。
3 讨论
3.1 考察了 H P C E 各种操作参数如缓冲液
pH 、运行电压及有机溶剂添加剂对蓑若类生
物碱电泳分离的影响 , 其中 10 写四氢吠喃的
加入 , 明显地改善了较难分离的东蓑若碱与
樟柳碱的分离度 。 在兼顾分离效率和分析速
度的前提下 , 优选电泳分离条件为:运行电压
11 k V (+ )~ (一 ) , 缓冲液 50 m m ol/IJ磷酸
盐(pH S.0卜四氢吠喃(9 : 1) 。
3
.
2 颠茄配样品分析 , 仅为缓冲液稀释 , 简
便快速 。 颠茄片样品处理 , 以乙醇直接提取 ,
回收率高 , 重现性好 。实验还考察了涡旋振荡
5 m in 、超声提取 5 m in 和涡旋振荡 2 m in 后
再超声提取 5 m in , 测定结果后者提取颠茄
片中阿托品 (D L 一食若碱)峰面积最高 , 且 3
次重现性较好 。
3. 3 H P C E 在食若类生物碱系统分离和颠
茄制剂含量测定方面 的成功应用 , 为中药质
量控制提供了一种新型的检测工具 。
参 考 文 献
1 国家医药管理局中草药情报中心站编 . 植物药有效成
分手册 · 北京:人民卫生出版社 , 1 9 8 6 : 5 9 、 6 0 、 1 0 1 、 9 4 1
2 王 朴 , 等 . 药学通报 , 2 9 5 8 ; 2 3 ( 9 ) : 5 1 5
3 沙世炎 , 等 . 中草药有效成分分析法 (上册 ). 北京 :人
民卫生出版社 , 1 9 8 2 : 1 1 、 2 2 0 、 2 4 5
4 李海生 , 等 . 药物分析杂志 , 1 9 9 0 ; 10 (6 ) : 3 24
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1 9 9 0
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6 2
:
4 0 3 R
6 靳朝东 ,等 . 国外医药 · 植物药分册 , 1 9 95 ; 10 (5 ) : 2 01
7 宗玉英 , 等 . 药学学报 , 一9 9 5 ; 30 (8 ) :5 9 4
( 1 9 9 7 一 0 9 一 1 8 收稿)
System atie S eP aration an d Q uan titative A n alysis o f T roPan e A lk aloid s in B elladon n a
P reP aration by H ig h P erform an ee C aPillary E lectroP h oresis
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