全 文 ：灵芝多糖的含量测定研究
北京医科大学药学院 李晓晖 李书平” 何云庆 李荣芷 崔书民” ‘
摘 耍 以苯酚一硫酸法对灵芝多糖含量进行测定 , 并用正交试验设计选择最佳显色条件 ,该法灵
敏度高 ,重现性好 , 平均回收率为 纬 , 一 写 一 。
关扭词 灵芝多糖 苯酚一硫酸法 正交设计 含量测定
近年来研究发现 , 多糖具有多方面的生
物活性 , 并从药用植物和真菌中发掘出许
多有生物活性的多糖 , 用于治疗免疫系统严
重损伤的癌症以及免疫缺损的慢性疾病 , 〕。
灵芝多糖为灵芝属药用真菌灵芝 ,
“ 提取所得多糖 , 药理研究发现它具
有免疫增强作用 , 是灵芝扶正 固本有效成
分’ 。为了比较 、评价以多糖为有效成分的药
材和药品质量 , 多糖含量测定方法研究具有
重要意义 。 目前应用较多的多糖含量测定方
法是苯酚 一硫酸法 , 但影响该法显色的因素较
多 ,难以选择最佳实验条件 。本实验以正交设
计 , 优化显色条件 , 研究苯酚一硫酸法
对灵芝多糖含量测定的方法 , 为多糖含量测
定方法的条件优选提供了有意义的参考 。
试药与仪器
硫酸 、 乙醇 、 无水葡萄糖均为分析
纯 , 笨酚为 ℃馏分 , 所用水为蒸馏水 灵
芝粗 多糖 由本室提 供 分光光 度计 ,
旋涡混合器 , 旋转薄膜蒸发器 。
余件与方法
实验条件
最大 吸收 波 长的选择 精密 吸取
阳 无水葡萄糖溶液 置
容量瓶中 , 加入 写苯酚 , 混匀 ,
加入 , 浓硫酸并计时 , 加水至刻度 , 旋
涡混合 , 放置 , 加 水至刻 度 , 混
匀 , 室温下放置 , 加水至刻度 , 混匀 ,
备用 。以蒸馏水替代糖溶液如上法配制空白 ,
用 分光光度计在 测定吸收
度 , 确定最大吸收波长 士 。
显色条件的选择 以显色剂苯酚用
量 、硫酸用量及反应时间为考察因素 , 采用正
交设计优选最佳显色条件 , 因素与水平见表
。 实验结果见表 , 结果表明 , 硫酸用量是影
响显色条件最 主要因素 。 最佳显色条件为
即苯酚 , 浓硫酸 , 放
置时间为 。
裹 , 正交设计表
因素
水平 笨酚 浓硫酸 吸 反应时’ ! 二
。 。
方法与步骤
样品的预处理 称取灵芝粗多糖适
量 , 用 乙醇洗涤至用裴林试剂检测单糖
呈阴性 , 自然干燥 , 即得待测灵芝多糖
供试液的配制 精密称取干燥恒重的
灵芝多糖 置 容量瓶中 , 加水
热溶解 , 冷至室温 , 定容 , 摇匀 取 至
容量瓶中 , 定容 , 摇匀 , 即得供试品溶
液 。
标准曲线的制备 精密称取无水葡萄
糖对照品适量制成 。 的对照品
溶液 , 分别稀释 至 、 、 · 、 · 、
拌 的 个不同浓度的对照品系列
· , , 犷,
’ 价 现在中国航空工业中心医院
“ 烟台市生物研究所
溶液 。 精密吸取系列溶液 置
容量瓶中 , 按 “最大吸收波长的选择 ”项下方
法测定吸收度 , 求得标准曲线回归方程为
一 ’ 一 , , 。 在
拌 范围内符合 定律 。
表 正交试验结果
入约 无水葡萄糖对照 品 , 按 “供试
液的配制 ”和“标准曲线的制备 ”项下操作 , 测
定吸收度 , 平均回收率为 , 一
。
表 宜现性及多枪含 测定
苯如 浓硫酸 反应时间严收度
。 ! ,
!
,
!
班 , 9 0 0 0 . 9 2 2 Q . 9 0 6
且 j 0 . 9 6 5 1 . 0 2 6 0 9 0 7
I j ~ l j / 3 0 . 2 9 6 0 . 2 7 1 0 . 3 1 3
且 j二 I J/ 3 《). 3 0 0 0 . 3 0 7 0 . 3 0 2
I j = l j / 3 0 . 3 2 2 0 . 3 4 2 0 . 3 0 2
R O , 0 2 6 0 . 0 7 1 0 . 0 1 1
样品号 1 2 3 4 5
灵芝多精(g) 0.0, 6 0 0 . 1 0 7 6 0 . 1 0 0 3 0 , 0 9 4 6 0 · 1 0 4 3
吸收度 A 0.207 0.230 0.217 0.205 0.224
多梢含盘(纬) 55.7 85· 0 8 6 · 0 8 6 · 1 8 5 · 4
结论 :最佳显色条件为 A 3B 3C Z。
2
.
2
.
4 精密度试验 :精密吸取 1.0 m L 供试
液按 “标准曲线的制备 ”项下操作 , 分别测定
吸收度 , 求得 R SD = 1.00 % (n = 5 ) 。
2
.
2
.
5 重现性及多糖含量测定 :精密称取灵
芝多糖约 0. 1000 9 , 按 “供试液的配制 ”和 “标
准曲线的制备 ”项下操作 , 分别测定 吸收度 ,
求得多糖平均含量为 85 .6% , R s D 一 0. 53 %
(, 一 5 ) , 结果见表 3 。
2
.
2
.
6 显 色 稳 定性 :样 品显 色 后 , 每隔 5
m in 或 10 m in 测定一次吸收度 , 共测 10 次 ,
结果表明在显色 20 m in 内吸收度稳定 。
2. 2. 7 回收率试验 :采用加样回收法 。 精密
称取干燥恒重的灵芝 多糖 0.0500 9 , 精密加
3 结果与讨论
3.1 影响苯酚一硫酸法显色 的因素较多 , 目
前所见文献报道均为固定其他条件进行单因
素考察 , 不仅实验次数多 , 且所选择的条件并
不一定为最佳显色条件. 本实验以正交设计
L , ( 3s ) 考察了苯酚用量 、浓硫酸用量及反应
时间三因素三水平 , 对苯酚一硫酸法测定多搪
含量的最佳 显色条件进行了探索 , 取得了较
满意结果 。实验表明 , 硫酸用量是影响显色的
主要因素 , 显色最佳条件为:5% 苯酚 6 m L 、
浓硫酸 7.5 m L 、反应时间 26 m in , 为多糖含
量测定方法的条件选择提供了一种有意义的
参考 。
3
.
2 苯酚一硫酸法显色稳定 , 灵敏度高 , 重现
性好 , 不受蛋白质干扰 , 可用于混有糖肤的粗
多糖含量测定 。
参 考 文 献
1 顾学裘 , 等.抗衰老 · 抗癌中药的研究及展望.北京 :中
国医药科技出版 , 1 9 89 . 2
2 方积年 .国外医学一药学分册 , 1 9 81 , (4 ) : 2 2
3 方积年 . 国外医学一抗生素分册 , 1 9 82 , 3 (2 ) : 10 7
4 李荣芷 , 等 .北京医科大学学报 , 2 9 5 7 , 1 9 ( 6 ) : 4 3 1
5 正交试验设计法编写组 . 正交试验设计法 . 上海 :上海
科技出版社 , 1 9 7 9 . 1 5
( 1 9 9 6
一 1 0 一 0 4 收稿 )
o n the D eterm in ation o f P olysaceharides in L in gzhi(Ga node rm a lucidu m )IJi X iaohui, I J i S h u p i n g , H e Y u n q i n g , e t a l
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《中草药》1997年第 28 卷第 9 期 5 3 1