全 文 ：咬 t 咬卜d 卜 . . , 叫 性夕 .
. 乡勺介 U二刁~ ` 乙 J .
分光光度法检测蜂皇胎制品中游离赖氨酸含量
中山 医科大学天 然药物研 究室 (广州 5 10 0 8 9) 蔡丽玲 朱 张世忠 郑谋生 刘 捷
摘 要 蜂皇胎制品中游离赖氨酸用离子交换树脂分离后 , 先与铜离子络合 ,再与 1 一氟一 2 , 4一二硝
基苯 (F D N )B 反应 , 经后处理 , 用分光光度法测定 。
关健词 蜂皇胎 赖氨酸 1一氟 一 2 , 4一二硝基苯 分光光度法
蜂皇胎即蜂王幼虫 ,对人体具有很高的
营养价值及治病保健价值 〔 , 〕 , 已开发保健制
品 。 目前对蜂王幼虫的有效成分 尚不十分清
楚 ,但 已知所含游离赖氨酸的含量较高 ,可通
过检测游离赖氨酸含量来监测蜂皇胎制剂的
质量 。测定赖氨酸的方法有很多 ,但测定蜂皇
胎制品中游离赖氨酸含量的方法文献中未 见
报道 。本文以较简单的设备 ,用离子交换树脂
分离出游离赖氨酸 ,使用铜离子络合赖氨酸
的 a 一氨基和梭基 ,让 。一氨基与 1一氟 一 2 , 4一二硝
基苯 ( F D N B )反应 ,经酸化和用乙 醚提 弃副
反应物后〔 2〕 , 以分光光度法成功地测定了蜂
皇胎制品中的游离赖氨酸并用于生产质量监
控 。
1 材料与方法
岛津 U V 一 24 0 紫外可见光分光光度计 ,
蜂皇胎冻干粉和胶囊 (天一保健品有限公司
提供 ) 。
1
.
2 试剂与溶液的配制 : 所用试剂均为分析
纯试剂 ,其中磷酸铜悬浮液为 自制 , 即在不断
搅拌下 ,将 20 o m l 硫酸铜溶液 ( 3 . 39 无水硫
酸铜溶 于 l 0 0 0 m l 蒸馏水 )慢 慢加到 4 0 0 m l
磷 酸三 钠溶 液 ( 68 . 5 9 磷 酸 三 钠 溶解 于
I O0 0m l 蒸馏水 )中 ,离心分离 ,沉淀物悬浮于
硼酸盐缓冲液 ( 54 . 6 9 10 个结晶水的四硼酸
钠溶于 1 0 0 o m l 蒸馏水 )后再离心分离 , 反复
3 次 ,最后沉淀物悬浮于 l 0 0 0 m l 硼酸盐缓冲
液 ,摇匀待用 。
1
.
3 测定波长选择 :适量赖氨酸和其它氨基
酸溶液加入磷酸铜悬浮液 ,经 F D N B 衍生和
酸化醚提弃副产物 的水溶液 , 以空 白液作参
比绘制 25 0一 45 o n m 的吸收光谱图 。 除形成
的 。一 D N P 赖氨酸和 O 一D N P 酪氨酸有吸 收
外 ,其它氨基酸均无吸收 。 尽管 。一 D N P 赖氨
酸的最大吸收在 3 6 5 n m ,但在此波长 O 一 D N P
酪氨酸 尚有一 定吸收 , 而在肩峰 3 9 5n m 处
0
一
D N P 酪氨酸的吸收 已很小可忽略 ,故选用
3 9 5 n m 作测定波长 。
1
.
4 绘制标准直线 : 量取 Z om l 含赖氨酸盐
酸盐 ( 0 . 5 , z , 1 . 5 , 2 . 0 , 2 . 5 , 3 . om g )溶液 , 分
别加入 Z om l 磷酸铜悬浮液 , l m o l 1 0%甘氨
酸水溶液 ,不断振摇 z s m i n , 加入 0 . sm l 1 0%
F D N B 甲醇溶液 , 振摇 sm i n , 在沸水浴中加
热 1 5m i n 后取出 ,立即加入 2 5m l l m o l / L 盐
酸溶液 并 不 断 摇 动 , 待冷 至 室 温 后 装入
1 0 ml 容量瓶并加水到刻度 ,摇匀 , 离心 。 量
取 4 o m l 上清液用乙醚提取 3 次 ,每次 25 m l
乙 醚 , 弃 去 乙 醚 层 , 水 层 在 65 ℃水 浴 热
Z o m in
, 吹空气 Zm in 以除尽乙醚 。 冷却后 , 以
空 白液作参比 ,测定在 3 9 5n m 波长处的吸收
度 , 得出吸收度 A 与赖氨酸毫克数的回归方
程 为 A = 0 . 0 4 3 6 + 3 . 9 3m g , 相关系数 r =
0
.
9 9 9 ( n = 4 )
。
2 实验结果
`
A dd
r e s s : C a i L ili n g
,
D e p a r t m
e n t o f M
e d i e a l N a t u r a l
,
Z h o n g s h a n M
e d ie a l C o l le g e
,
G u a n g z h o u
《中草药 》 1 99 6年第 2 7 卷第 1 2 期 . 7 1 7 .
2
.
1 样品含量测定 : 精确称适量峰皇胎制品
s o m l
, 置 l o o m l 容量瓶中 , 超声波 l om i n , 加
水到刻度 , 摇匀 ,滤过 ,弃去初滤液 ,取续滤液
Z o m l 以每分钟 l一 Zm l 速 度流过 装有 l o m l
7 3 2 氢型阳离子交换树脂小柱 , 以 2 0 m l 水洗
柱 ,弃去洗脱液 , 以 Zm ol / L 氨水 4 o m l 洗脱 ,
弃去前 l o m l 洗脱液 , 再用水洗脱 , 收集 50 m l
洗脱液 , 洗脱液煮沸直至溶液 p H 值小于 9 ,
冷却至室温 ,按绘制标准直线方法操作 ,将所
测的吸收度值由标准直线计算出样品所含游
离赖氨酸量 (表 1 ) 。 同一样 品测定偏差均在
6%以内 。
2
.
2 样品添加赖氨酸回收率 : 称取适量已测
定含量的样品 , 添加相当其所含量的赖氨酸
盐酸盐 ,测定游离赖氨酸总量 , 计算添加回收
率 ,对于冻干粉的回收率在 95 % ~ 10 5% (n
一 6 ) , 对于胶囊 回收率在 95 %一 1 10 % (n -
4 )
。
2
.
3 蜂皇胎稳定性试验 : 应用本法考查了蜂
皇胎胶囊在加温初步稳定性试验和常温稳定
性试验时的游离赖氨酸含量变化 ,结果列于
表 2 。
表 l 蜂皇胎制品的游离抽氮酸
(以盐酸盐计 )含量 ( m g / g )
冻干粉 胶囊
表 2 稳定性试验游离毅氮酸含 t ( m g / g )变化
加温初步稳定性试验
1 月 2 月 3 月
常温稳定性试验试验前 半年 一年
3 2 2
3
.
4 0
样品
1 5
。
2 0 5
.
1 1 3
.
7 4 2
.
8 0
7 3
。
5 7 3
.
2 5 3
.
6 6 2
.
7 4 ;: : }
批号 次数 含量 (万士 s) 批号 次数 含量 (二士 s)
0 7 1 2 1 0 4 7
.
8士 2 . 2 7 30 1 1 1 3 4 . 2 9士 0 . 17
0 7 1 0 1 1 4 5
.
8士 3 . 0 9 1 2 16 4 4 . 0 9士 0 . 2 1
0 8 1 5 1 0 5 2
.
5士 2 . 0 8 1 12 3 4 3 . 8 7士 0 . 19
3 讨论
3
.
1 定量测定游离氨基酸大都用高效液相
色谱 ,花费较高 。 本文采用分光光度法所需设
备简单 ,而且测定的重现性和回收率良好 ,能
满足 日常生产质量控制需要 。
3
.
2 蜂皇胎含大量蛋白质 ,也可用定氮法来
估计其含量 。 尽管实验发现蜂皇胎制品含氮
量与游离赖氨酸含量有一定的相关性 ( r 一
0
.
73 0
, 。 一 6 ) , 但游离赖氨酸更能反应产 品
质量和稳定性的波动情况 。
3
.
3 蜂皇胎制品除游离赖氨酸外含大量蛋
白质和糖类等会干扰测定 , 使用阳离子交换
树脂柱处理能很好排除干扰 ,但操作时需注
意控制流速 。
3
.
4 衍生后酸化和醚处理 ,可破坏会干扰测
定 的过 量 F D N B 的产 物 并 除去 所 有 其它
D N P
一氨基 酸 , 只留下 干扰物 0 一 D N P 一酪 氨
酸 , 后者在 3 9 5 n m 测定时并不干扰 。
.3 5 久置 F D N B 甲醇试剂会产生白色沉淀
物并使吸收度值偏低 , 最好使用新鲜配制的
试剂 。 实验发现 ,使用久置磷酸铜悬浮液 ( >
1 0d )所测定的吸收度值偏低 。 欲得较好结果
最好与测定样品同时绘制标准直线 。
参 考 文 献
1 周瑞华 , 等 . 食品科学 , 19 91 (6 ) : 12
2 黄伟坤 , 等 . 食品检验与分析 . 北京 : 轻工业出版社 ,
19 9 1
.
6 7
( 1 9 9 6
一
0 8
一
1 2 收稿 )
D e t e r m i n a t i o n o f F r e e L y s i n e i n Q u e e n B e e
` 5 E m b r y o P r e P a r a t i o n b y S eP
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F r e e ly s in e in a p r e p a r a t io n o f q u e e n b e e
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.
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b
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r o u p o f l y
s in e w a s e o m p le x e d w i t h e u p r i e i o n a n d t h e 。一 a m i n o g r o u p r e a e t e d w i t h F D N B ( F lu o -
r o 一 d i n i t r o b e n z e n e )
.
A f t e r a e记 t r e a t m e n t a n d e x t r a e t io n w i t h e t h e r , t h e a b s o r b a n e e o f t h e s o l u t io n a t 3 9 5 n m
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s i n e w a s 9 5% 一 1 1 0% .
.
7 1 8
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