全 文 ：氧化苦参碱对淋巴细胞增殖的影响
北京医科大学免疫学教研室( 1 0 0083 )王会贤 .章灵华二 杜守英 钱玉足
摘要 研究了氧化苦参碱对人扁桃体淋巴细胞和小鼠脾淋巴细胞在不同丝裂原存在时对增殖能力
的影响 。 结果表明: 根据人扁桃体淋巴细胞对 P HA , S A C反应能力的不同 , 氧化苦参碱可使低
反应性的人扁桃体淋巴细胞增殖能力提高 , 而对高反应性的人扁桃体淋巴细胞及正常小鼠脾细胞
增殖则表现为抑制作用 。 提示氧化苦参碱对淋巴细胞增殖的影响和细胞状态密切相关 。
关键词 氧化苦参碱 淋巴细胞 增殖
中药苦参 , 苦豆子的有效成分之一是氧化苦参碱 , 它具有抗过敏 , 抗肿瘤和调节心肌收
缩力等多种药理学作用 ( 本室资料 , 待发表 ) 。 其对免疫系统的研究虽有一些报道 , 但结果
并不一致 , 为了进一步分析问题 , 研究了氧化苦参碱对人扁桃体淋巴细胞和小鼠脾细胞增殖
能力 的影响 , 并对相关问题进行了探讨。
1 材料和方法
1
.
1 动物 : 6一 8周龄的 B A L B / C纯系小鼠 , 雌雄兼用 , 由本校实验医学动物部提供 。
1
.
2 氧化苦参碱 : 北京 医科大学药学院提供 , 经H P L C 分析其纯度达 96 %以上 。
1
.
3 主要试剂和仪器 : P H A : 广州医药工业研究所产品 。 应用浓度 5。卜g /m l 。 SA C : 一仁海
生物制品研究所生产 , 10 ℃煮沸 15 m in , 分装于一20 ℃待用 。 应用浓度 0 . 01 % 。 C o n A : 51 9 -
m a公司 。 应用浓度 4协g / m l 。 L P S : S i gm a公司 。 应用浓度 1 0卜g / m l 。 “ H一 d R : 中科 院上
海原子能研究所 。 日一液闪状 : F J一 107 , 西安二六二厂 。
1
.
4 扁桃体淋巴细胞的制备 : 取手术切除的扁桃体 , 剔除结缔组织后置含高浓度双抗 ( 青 、
链霉素各 1 0 0 0 u / m l) 的 R P M I 一 16 4。培养液中浸泡 60 m i n , 洗二遍后剪碎并滤除 组织块 , 经
淋巴细胞分层液离心分离 , 吸取淋 巴细胞 , 洗涤后调至所需浓度待用 。
1
.
5 巨噬细胞的去除 : 将上述分离好的人扁桃体淋巴细胞调至 1 x 1 0叮m l , 置塑料培养瓶中
37 ℃ , 5%C O : 作用 l h , 冲洗 吸 出未贴壁细胞 , 即为去除巨噬 细胞的细胞 , 洗涤后调至所需
浓度待用 。
1
.
6 小 鼠脾细胞的制备 : 常规制备小鼠脾细胞 ,并经 0 . 83 %的 T r i s一 N H 4 C I作 用 3m i n , P B S
洗涤后调 至所需浓度待用 。
1
.
7 细胞增殖能力的检测 : 将上述分离好的细胞每孔 1 0 时加入 96 孔培养板中 , 根据实验悄
况加入各种丝裂原及倍比稀释的各种浓度的氧化苦参碱 , 使每孔总体积为 2 0 卜 1 。 细胞终浓
度为 : 人扁桃体淋巴细胞 2 火 10 。 /m l , 小鼠脾细胞 2 . 5 x 10叮m l 。 每种浓度 3个复 孔 。 3了℃ ,
5 % C O
: 培养 5 6 h ,后每孔加入 2 0终C i / m l的3 H 一 T d R Z o 协l , 继 续 培养 z 6 h , 收获 细 胞 , 并测
C P m
。
每组实验至少重复 3 次 ,
2 结果
2
.
1 氧化苦参碱的细胞毒实验 : 为了区分氧化苦参碱的 毒性剂量 和实验效应剂量 , 首先用
不同浓度的氧化苦参碱研究了它的细胞毒作用 , 结果表明 : Zm g / m l以下的氧化 苦参碱在 d3
培养过程中没有明显的细胞毒作用 , 细胞存活率与对照无显著性差异 ( 资料未列出 ) 。 由此我
.
A d d r e
s s : W
a n g H
u ix i a n D e P a r t m
e , , t . f I m m u n o l o g y
,
B e i j i
n
g M e d i c a l U u i v c r s i ty
,
B e i j i
n g
今* 中国医学科学院药用植物资源开发研究所
3 6 2
们正式实验中所选最大药物浓度为 l m g / m l 。
2
.
2 氧化苦参碱单独对人扁桃体淋巴 细 胞
增殖能力的影响 : 由图 1可见 ,在没有任何刺
激剂的情况下 , 氧化苦参碱并不能影响人扁
桃体淋巴细胞的增殖能力 。 其对 照 c p m 值
仅 2 2 1 + 9 9 . 6 , 而 当加入 1 0 0 0卜g /m l的氧化
苦参碱后 , 其 e P m值也不过 2 8 6 + 10 0 . 5 。
2
.
3 氧化苦参碱对 P H A 、 S A C低反 应 性
沙 王T 双 一允厂 u g / m U
的人扁桃体淋巴细胞的促增殖效应 : 此类人 图 1 饭化苦参碱单独对人扁挑体淋巴细胞的作用
扁桃体淋 巴细胞在最适剂量 P H A 、 s A c 作用下 , 其cP m值分别为 9 3 0 0 . 7士 1 6 59 . 8 和 2 9 8 0 士
6 2 6
.
6
。 而 3 . 9 0 62 5协g / m l的氧化苦参碱即可使其增殖能力大大提高 , 氧化苦参碱的这种促增
殖作用在 1 5 . 3 1协g / m l时达峰值 。 以后随药物浓度增加而下降 。 并且这种增殖作用不因巨噬细
胞的去除而消失 。
2
.
4 氧化苦参碱对 P H A 、 s A C高反应性的人扁桃体淋巴细胞增殖的抑制作用 : 氧化苦参碱
对 P H A 、 S A C高反应的人扁桃体淋 巴细胞呈现明显的增殖抑制效应 。 药物有效 浓 度范围在
1 5
.
6 2 5一 10 0 0林g / m l 。 p H A对 照 e p m值 4 9 24 9 . 2士 5 4 6 7 . 4 。 氧化 苦参碱 1 0 0 0协g /m l时 c p m
值仅 4 0 0 5 . 5士 5 9 4 . 4 。 而 S ^ e 对照 e p m值为 1 7 5 9 5 . 7 士 1 9 3 1 . 6 , 氧化苦参碱为 1 0 0 0卜g / m l 时
“ p m仅为 18 4 8 . 5士 3 3 1 . 1 。 并且这种抑增殖作用不因巨噬细胞的去除而改变。
ǎ00ū\一ù日合
:…:户节愁抓” 。
}
一丫 ` - . … 乙 `一咋1 5. 6 3 1. 3 6 2 .几 ] 2 5
O M T 浓度 ( 仁几g了m l少
; 0 云 0 0
…几二泣
3
.
9 .7 8 1 5
一
6 3 1月 6 2一 5 上
浓度 ( 卜g / m l )
2 5 0 乙u o 1 0 0 0
润口10
图 2 氧化苦参碱对 P H A、 S A C低反应性的
人扁挑体淋巴细胞的促增殖效应
1
一
O M T
、
P H A ( x 5 0林g / m l )
2
一
O M T
、
S A C ( l / 1 0 0 0 0 )
2
.
5 氧化苦参碱对小 鼠脾细胞的增殖 抑 制
效应 : 氧化苦参碱对 C on A和 L P S活化的小 鼠
脾细胞的作用和对 P H A 、 S A C 高反 应性的
人扁桃体淋巴细胞的作用相同 。 C o n A 活化
小鼠脾细胞对照 e p m值为 1 8 7 9 6 . 7 士 1 8 1 0 . 6 ,
氧化苦参碱 2 0 0 0协g / m l时 e p m值为 2 一5 5 . 3士
2 7 9
.
9
。
L P S活化小鼠脾细胞对照 c p m 值为
6 5 2 5
.
7士 3 3 9 . 8 ,氧化苦 参碱 1 0 0 0件g / m l 时
e P m值仅 80 . 1士 2 1 . 5。
图 3 氛化苦参碱对 P H A 、 S AC离反应性的人
扁挑体淋巴细胞的增殖抑制效应
1一 O M T P H A ( l s o p g / m l )
2 一 O M T S A C ( 1 / 1 0 0 0 0 )
它。ē、C日号
OM T 浓度 l铭 /琅幼
图 4 报化苦参碱对小鼠脾细胞的殖增抑制效应
1
一
O M T和 C o n A ( 连卜g / m l )
2 · O M T和 L P S ( 1 0卜g / m l )
( 下转 第3 8 9页 )
《 中草药 》 1 9 9`年第 25 卷第 7 期 , 3 6 3 .
告更为妥当 。
6
.
1动物种属性别 , 体重范围 , 4个剂量选用等比
或等差数的组别 , 每组只数 。
6
.
2 药品来源与配制方法 , 给药途径 , 禁食小时 ,
实验观察 日期和温室 。
达法
观察毒性症状与每鼠死亡 日期 , 毒性术 语 表
( 见表 2 ) 。
6
.
4 急性实验观察期指植物类粗 提 制 剂 类 , 7~
1 0 d , 除部分动物即刻死亡外 , 余存动物需再延 长
观察 Zd , 俗称稳定期观察日 。
6
.
5 B il s 氏等统计法处理和附实验记录 , 并署实
验者姓名。
以上几点 , 是我们多年实践经验的归纳 , 供药
理工作者参考 。
系 统
表 2 毒性术语表达法
中毒表现描述
神经系统
呼吸系统
胃肠系统
外观症状
外 感
运动失调 , 俯卧 , 抽搐 , 震颇 , 活动的让减 , 后肢无力和后肢反射 , 角弓
反张 , 共济失调 , 兴奋 , 强 直 , 行动姿势改变。
呼吸减少 , 呼吸困难 , 呼吸停止 , 呼吸抑制而死亡 。
粪便不成形 , 腹泻 , 粪便 出素 , 呕吐 、 不随意排尿和排使 , 恶心 , 流涎 。
竖毛 , 毛发松散 , 潮湿狗的颤动 , 消瘦 , 行动速度 。
疼痛感 , 翻正反射 , 角膜反射 , 触觉敏感性及叫声。
致谢 : 本文承 吴 良教授审阅
参 考 文
曲青山 , 等编 . 制定职业性有害因素标准的方法 .
北 京 : 人 民卫生出版社 , 1 9 8 0 . 54
D e i e h m
a n
W B
, e t a l
.
T o x i o o l o g y o f
D r u g a n d C h e m i
c a l s
.
N e w Y o r k . A c a
-
d e m i
c P r e s s
,
19 6 9
。
9
李 建华 . 中国药理通讯 , 1 99 2 , 9 ( 4 ) : 3 5
徐淑云 , 等主编 , 药理实验方法学 . 北京 : 人民
卫生出版社 , 19 8 5 . 4 0
( 1 9 9 3一 10 一2 5收稿 )
( 上接第3 6 3页 )
3 讨论
一般认为 , 苦参及其有效成分氧化苦参碱是一种双向免疫调节剂 1t, 幻 , 即其在低浓度时
可刺激淋 巴细胞增殖 , 高浓度时则抑制之 。 我室实验结果显示 , 氧化苦参碱对一小部分扁桃
体来源的淋 巴细胞表现为促进作用 , 而对大部分扁桃体来源的淋 巴细胞及小鼠脾细胞则只表
现为高浓度时的抑制作用 。 这小部分扁桃体淋巴细胞表现为 P H A 、 SA C低反应性 。 关于扁
桃体淋 巴细胞对 PH A 反应性上的差异已有发现〔 3〕。 正常人淋巴细胞不管其来源均可呈现 良
好的 P H A 反应性以〕。 由于扁桃体摘除术大多在炎症后 进 行 , 因此 , 我们可以设想 , 由于炎
症的影响 , 在手术摘除的扁桃体中 , 有一小部分扁桃体的细胞功能状态不同于正常而呈现出
P H A
、
S A C的低 反应性 。 这一点也可由氧化苦参碱对小 鼠脾细胞的作用呈现和对 P H A 、
s A c 高反应性的扁桃体淋巴细胞一致而得到进一步 地证实 。 另外 , 据报道〔 5〕 ,氧化苦参碱可
以影响细胞膜流动性 , 它可能以某种方式作用于细胞膜 , 从而影响细胞功能 。 本次报道则表
明 : 氧化苦参喊对人和小鼠 T 和 B 淋巴细胞均可发挥 作用 , 并且此作用不受巨噬细胞存在与
否的影响 。 说明氧化苦参碱可能以一种非特异的方式作用于细胞膜 , 并且根据细胞膜状态的不
同而对细胞起不同的效应 。 关于其和细胞膜的作用方式则可能是完全解释它作用机制的关键 。
参 考 文 献
1 卡如涤 . 抗炎 免疫药理学 一与临床应 用 . 北京 : 北 3 余 贺 . 医用微生物学 . 第二版 . 北京 : 人 民卫
京医科大学 / 中国协和医科大学联合 出 版 社 , 生出版社 , 1 9 8 3 . 2 17
1 9 9 2
.
31 了 4 张 琪 , 等 . 中华微生物和免疫学杂 志 , 1 9 9 2,
么 钱玉 L已, 等 . 中华微生物和免疫学杂志 , 10 5 5 , x Z ( z ) : J l
8 0 5 )
: : ; :
( 1 9 9 3
一 0 7一。吕收稿 )
( 中草药 》 1 , 9魂年第 2 5卷第 7 J夕} · 3 8 9 ·
Q ua nti ta ti
v e Oe tr e mia ntio o nf Ar ta e n n ui ni n Li p0 0 0爪es a nd Dx e 全ra ns
by T C L一 Sa c n ni ng Me th od
Ca i Mei mi ng
T LC
一s ca n ni ng me th odf o r th e qja , t i t a t i v e
d o x t
r a o s w a s d
e v e l o p e d
.
T h o m o t h
o
d 1 5 s im P l e
,
f
o u n
d t
o
b
e 9 8乃 % a n d 9 6
.
8%
.
d e t .
r
m i
o a t i l 住 o f a r t e a 几 n u i n i 几 l t P , s o m e s a n d
a c c : i r a t e a n d
s e ; 15负t i v e . T h e r o c o v . r i e s w e r e
( O r
一9 i n a l a r t i c l e o n p a g e 3 5 3 )
D e t e r m i n a t i o n o f P s o r a ! e n a n d Is o p s o r a l e n i n M a ! a y t e a S e u r f Pe a
( P
s o r a l e a c o r夕 t i f o l i a ) a n d C h i n e s e T r a d i t i o n a l P a t e n t M e d i e i n e b y HP L C
L i u S o n g q i n
,
M a W o
a x i u
,
T a n g X 一 a n z h e , e t a l
A H P L C m e t h o d w a s e s t a b l 1s b e d f o r t h e d e t e r tn i
·
: a t一o n o f P s o r a l e n a 几 d i s o P s o r a l o n i n P s `
r a l e a e o r y *i f o l i
a
L
.
a n d i t s p r o p a r a t i o n s
。
P s o r a l o
a 压 n d 1 5 。 p s 。 r 压 l e 。 。 a n b e s o p a r a t e d o n “ 一 B o n d a ·
P a k C , 。 c o l , 1位 n w i t h a m o b i l e P h a s e o f M . O H 一 H : O ( 6 . 4 ) a n d d . t e c t e d a t Z` s n m . T h e o P t im u m
c o n d i t i
o n s b扭 s o d o n e x p e r im e n t压 1 r o s u l t s 下 a s t o e x t r . o t t h e s . m p l . b y M o 0 H i 比 a n u l ` r a s o n ` t o r
f
o r 3 0 m i n
.
T h e m e t h o d 15 s i m P le a n d a c c u r a t e
.
( o r i g i n a l a r t i c l e o n P a g e 3 5 5 )
O x y m a t r i n e , 5 E f f e c t s o n L y m P h o e y t e
产 5 P r o l i f e r a t i o n
W
a n g H
u
i x i a
n , Z h a
, ,
9 L i n g h u a
,
D u S h o u y i
n g
, 。 t a l
o x y m a t r i
l l e 1 5 a n a l k a l
o i d f r o m T r a d i t l 。 n a l C h i n e s e M e d i c i n e , S o P h o r a j l a 口 e s e e ” 5 A i t
.
w h i c h
h a s m a n y P h a r m a c o l o g i c a l e f f o e t s
.
W
e s t u d i e d t h e o f f e c t s o f o x y m a t r i n o o n t h e P r o l i f e r a t i o n o f
h u m
a n t o n s i l l a r c e l l s a n d m
o u s e s P l e n o c y t . s w i t h o r , i t h o u t m i t o g e n s
.
T h e r e s u l t s s h o w t h a t 卜
o x y m a t r i
n e c a n a u g m o n t t h e P r o l i f o r a t i o n o f t h e h u m a n t o n s i l l a r c e l l s w h i c h s h o w l o w P H A &
t S A C
r e s P ,
; 、 s e e a P a e i t y
.
0
1 r h e o t h e r h a n d
, o x y m a t
r i n e c a o i n h i b i t t h e P
r o l i f e r a t i o n o f t h e
h u m a n t o n s i l l a r e e l l s w h i c h s h o w h i g h 尸H A & S A C r e s p 〕 n s e s c a p a c i t y . T h e e f f e e t . o f o x y m a -
r i n o o n m
〕 u s e s P l e z 〕 c y t e s a r e t h e s a 皿。 w i t h t h e l a t t o r .
( o r i g i n a l a r t ic l e o n P a g e 5 6 2 )
Ae u t e M y o c a rd i a l In f a
r c t io n a n d
C o n s c lo u s Ra t s
Onin
P r o t e c t i v e E f f e e t s o f S o P h o r a m i n e
R e P e r f u : io n In j u r y
J i n Y i
n g
,
W a
n g X i
a o
d
o n g
, e t a l
T h e e f f
e e t s o f
s o P h o r a m i
n e ( S A ) o n m y
o c a r d i a l i
n
f a r c t i
o n s i z e a n d i s c h e m i
a 一 i n d u c e d a n d r e P
·
e r
f
u s i o n
一
i n d
。 c e d a r r h y t h m i a w e r e s t u d i e d i n c o n s c i o u s r a t s
.
I t w a s f
o u n
d t h a t P
r e t r e a t m e n t w i t h
S A 1 3
.
5 a n d x s m g / k g
i v r e d u c e d s i g n i f i
c a n t l y i n f
a r c t s i z e a n d c a
r
d i a c L D H
r e l e a s e a t 6 h a f t e
l e f t d e s e e n d i n g c o r o n a r y a r t e r y l i g a t i
, t、 a s e o m P a r o d w i t h t h e e o n t r o l
.
S A 1 0
.
6
, 一3 . 3 a n d 1 5 m g /
k g i v d
e c r e a s e
d m
a r k e d l y t h e e
a r l y i s c h e m i c a r r h y t h m i
a i n c o n s c i o u s r a t s
.
A m i
o
d
a r o n e 7
.
s m g
·
k g
一 , h a d t h
e s a
m
e e
f f
e e t s o n t h e P r e v e o t i
o n o f i s e h e m i c a r r h y t h m i
a
.
1 0 r e P e r f u s i o n e x P e r i m e n t
-
i t d e e r e a s e d t h e i 飞e i d e : e e o f v e
ll t r i c l a r f l b r i l l 扭 r i o n a n d s i g n i f i c 压 n t l y s h o r t e n e d t h e d t, r a t i o n o f
a r r h y t h 爪 i a s . T h e s e r e s u l t s s u g g e s t t h a t S A h a s P r o t e e t i v e o f f e e t s o n m y o e a r d i a l i s c h e m i a a n d
r e P e r f
u s i o n i
, ,
j
t: r y
( o
r i g i
` . a l a r t i e l e o n P a g e 3 6 4 )
《 中草药 》 19 9 4年第 25 卷第 7 期
·
3 9 1
·