全 文 ：广 西 植 物 Guihaia　Sept．２０１４,３４(５):７１４－７１８　　　　　　　　　　 http://journal．gxzw．gxib．cn　
DOI:１０．３９６９/j．issn．１０００Ｇ３１４２．２０１４．０５．０２４
李莉,殷中琼,贾仁勇,等．四川宜宾七种中药提取物体外抗菌活性研究[J]．广西植物,２０１４,３４(５):７１４－７１８
LiL,YinZQ,JiaRY,etal．AntimicrobialactivityinvitroofcrudeextractsfromsevenkindsoftraditionalChinesemedicinefromYibininSichuan[J]．
Guihaia,２０１４,３４(５):７１４－７１８
四川宜宾七种中药提取物体外抗菌活性研究
李　莉１,殷中琼１,２∗,贾仁勇１,２,代如意１,李　曼１,蔡　红１
(１．四川农业大学 动物医学院,四川 雅安６２５０１４;２．四川农业大学 动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川 雅安６２５０１４)
摘　要:用肉汤二倍稀释法和琼脂平板培养计数法,研究四川宜宾七种中药的提取物对大肠杆菌、沙门氏菌
和巴氏杆菌的体外抑制作用.结果表明:黄柏提取物的抗菌活性最强,最小抑菌浓度(Minimuminhibitory
concentration,MIC)为１５．６~１２５mg􀅰mLＧ１,最小杀菌浓度(Minimumbactericidalconcentration,MBC)为
３１．２５~２５０mg􀅰mLＧ１;栀子提取物抗菌活性次之,MIC为６２．５~１２５mg􀅰mLＧ１,MBC为１２５~＞２５０mg􀅰
mLＧ１;佛手提取物有较稳定的抗菌活性,MIC均为１２５mg􀅰mLＧ１,MBC为１２５mg􀅰mLＧ１和２５０mg􀅰mLＧ１;姜
黄、杜仲、何首乌、细毡毛忍冬的提取物抗菌活性相对较差,大部分 MIC≥２５０mg􀅰mLＧ１.说明四川宜宾的黄
柏和栀子的提取物抗菌活性较强,佛手提取物抗菌活性较稳定,有进一步研究的价值.
关键词:四川宜宾;中药提取物;抗菌活性;MIC;MBC
中图分类号:Q９４６;S８５３．７３　　文献标识码:A　　文章编号:１０００Ｇ３１４２(２０１４)０５Ｇ０７１４Ｇ０５
Antimicrobialactivityinvitroofcrudeextracts
fromsevenkindsoftraditionalChinese
medicinefromYibininSichuan
LILi１,YINZhongＧQiong１,２∗,JIARenＧYong１,２,DAIRuＧYi１,LIMan１,CAIHong１
(１．CollegeofVeterinaryMedicineSichuanAgriculturalUniversity,Ya’an６２５０１４,China;２．KeyLaboratoryof
AnimalDiseaseandHumanHealthofSichuanProvince,SichuanAgriculturalUniversity,Ya’an６２５０１４,China)
Abstract:TheantimicrobialactivitiesofcrudeextractsfromsevenkindsoftraditionalChinesemedicinefrom
YibininSichuanagainstE．coli,SalmonellaandPasteurellainvitrowereinvestigatedwithserialtwoＧfold
brothdilutionmethodandagarplatecountingmethod．TheresultsshowedthatthecrudeextractfromPhelloＧ
dendronamurensehadthestrongestantimicrobialactivity,itsMinimuminhibitoryconcentration(MIC)range
was１５．６－１２５mg􀅰mLＧ１,itsminimumbactericidalconcentration(MBC)was３１．２５－２５０mg􀅰mLＧ１．TheantiＧ
microbialactivityofcrudeextractfromGardeniajasminoideswasworsethanPhellodendronamurense,its
MICwas６２．５－２５０mg􀅰mLＧ１,andMBCwas１２５－＞２５０mg􀅰mLＧ１．ThecrudeextractfromCitrusmedica
var．sarcodactylishadstableantimicrobialactivity,itsMICalwas１２５mg􀅰mLＧ１,MBCwas１２５mg􀅰mLＧ１
and２５０mg􀅰mLＧ１．TheotherfourextractsfromEucommiaulmoides,Fallopiamultiflora、Curcumalonga,
Lonicerasimiliswereprovedthattheirantimicrobialactivitieswerenotasstrongasotherthreeextracts．
MostoftheirMICwere≥２５０mg􀅰mLＧ１．TheresultsindicatedthattheextractsofPhellodendronamurense
andGadeniajasminoideshadbetterbacteriostasiseffect,andextractofCitrusmedicavar．Sarcodactyliswas
收稿日期:２０１３Ｇ００Ｇ２０　　修回日期:２０１３Ｇ１１Ｇ２５
基金项目:国家“十二五”科技支撑计划项目(２０１１BAD３４B０３);四川省青年科技创新研究团队(２０１３TD００１５).
作者简介:李莉(１９８７Ｇ),女,四川内江人,在读硕士,主要从事天然产物的研究,(EＧmail)lilijc２０１１０９＠１６３．com.
∗通讯作者:殷中琼,教授,主要从事天然产物化学的研究,(EＧmail)yinzhongq＠１６３．com.
stable．Theymightbepotentialagentsagainstbacterialdisease,sotheyareworthoffurtherstudy．
Keywords:YibininSichuan;extractsfromtraditionalChinesemedicine;antimicrobialactivity;MIC;MBC
　　随着集约化养殖业的发展,细菌性疾病已成为
影响我国畜牧养殖业发展的主要原因之一.当前对
细菌性疾病的防控主要采取疫苗预防和抗生素治
疗.但是细菌自身血清型多、致病差异性大等造成
疫苗保护不理想(田真等,２０１２).使用抗生素是主
要治疗措施,同时又由于抗生素的长期、广泛和不合
理使用,使细菌耐药性、药物毒副作用、药物残留所
致畜产品安全等问题日益突出(李振等,２００９;黄春
玲等,２０１１).中药是兼有营养和药用双重作用的自
然资源,具备直接杀灭或抑制细菌和增强免疫能力
的功能,与抗生素相比,具有来源广、成本低、低毒副
作用的“绿色”药物.因此,研究和开发出能替代抗
生素的中药具有积极的现实意义.四川宜宾得天独
厚的地理条件使其盛产丰富的药用植物,多年前宜
宾的大宗药材金银花、佛手、桅子、姜黄等已在全国
各地发挥了重要的医用价值(陈永昌,１９８６).
本研究选用四川宜宾产的栀子、姜黄、黄柏、佛
手、杜仲、何首乌、细毡毛忍冬七种中药作为试验药
材,提取其有效成分,对大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆
菌进行体外抗菌活性研究,初步筛选出抗菌活性较
强的中药,为四川宜宾中药材在畜牧业上的临床应
用提供理论基础.
１　材料与方法
１．１材料
１．１．１主要试剂　 营养琼脂、营养肉汤均购自北京
奥博星生物技术有限公司;小牛血清购自兰州民海
生物工程有限公司.
１．１．２中药材　栀子(Gardeniajasminoides)、姜黄
(Curcumalonga)、黄 柏 (Phellodendron amuＧ
rense)、佛手(Citrusmedicavar．sarcodactylis)、杜
仲(Eucommiaulmoides)、何首乌(FallopiamultiＧ
flora)、细毡毛忍冬(Lonicerasimilis)均采自四川
宜宾,由四川农业大学药学系范巧佳副教授鉴定.
１．１．３菌株　标准大肠杆菌E．coli(ATCC２５９２２)、
标准沙门氏菌Salmonella(CMCC(B)５００４１)购于
中国兽医药品监察所,临床大肠杆菌E．coli、临床巴
氏杆菌Pasteurella由本校兽医微生物实验室惠赠.
１．２方法
１．２．１七种中药有效成分的提取　用乙醚和不同浓
度乙醇分别对佛手和其他６种中药有效成分进行提
取.栀子粗粉用５倍量７０％乙醇回流提取３次,每
次１h(胡震等,２００６);姜黄粗粉用６倍量８０％乙醇
浸提３次,每次２h(陈雁虹等,２００８);黄柏粗粉用７
倍量７０％乙醇回流提取２次,每次提取２h(邢俊波
等,２００３);杜仲粗粉用１２倍量６０％的乙醇回流提
取３次,每次２h(刘辉琳等,２００２);佛手粗粉用乙醚
浸没水浴回流提取２次,每次２h(赵兴杰等,２００７);
何首乌粗粉２０倍量６０％乙醇超声提取３次,每次
１５min(徐燕等,２０１１);细毡毛忍冬粗粉分别用１０、
８、６倍７５％乙醇回流提取３次,每次０．５h(王艳秋
等,２００９).合并滤液,真空浓缩,干燥得中药提取物
浸膏,计算浸膏得率.
１．２．２七种中药提取物的溶液制备　根据各中药浸
膏率称取适量浸膏,用少量二甲亚砜DMSO溶解,
再加蒸馏水定容,配成生药浓度为１g􀅰mLＧ１的原
液,流通蒸汽灭菌后,置４℃冰箱保存备用.临用前
用灭菌营养肉汤稀释至５００mg􀅰mLＧ１.
１．２．３菌悬液制备　将保种的菌液划线接种于营养
琼脂培养基中,３７℃培养２４h后,取单个典型菌落
接种于营养肉汤培养基中,３７℃恒温水浴振荡培养
２４h后备用(巴氏杆菌培养基中加入５％血清).取
８个灭菌试管,每试管中加入４．５mL生理盐水,自
第１管加入０．５mL活化菌液开始依次１０倍稀释至
第８管.用微量移液器取１０５~１０７稀释梯度的稀释
液于琼脂平板上,用L棒均匀涂布,每个稀释度涂３
个平板,３７℃恒温培养２４h后,对细菌数在３０~
３００个的平板计数,求平均值,以cFu􀅰mLＧ１为单
位.最后将其稀释至１０６cFu􀅰mLＧ１细菌数.
１．２．４最小抑菌浓度(MIC)的测定　采用试管二倍
稀释法,无菌操作取１６支加塞试管,分为２组,每组
８支,一组为实验组,一组为对照组.每支试管内分
别加入１mL肉汤培养基,每组第１管再加入１mL
中药提取液,混合均匀后取１mL到第２管,同理依
次混合稀释直至第７管(药物浓度依次为２５０、１２５、
６２．５、３１．２５、１５．６３、７．８１、３．９５mg􀅰mLＧ１),实验组每
支试管分别加入１００μL细菌稀释液.实验组和对
照组第８管分别为加菌不加药的阳性对照和不加药
不加菌的空白对照.３７℃培养２４h后取出,观察
细菌生长情况.重复３次实验,取平均值.在实验
５１７５期　　　　　　　　　李莉等:四川宜宾七种中药提取物体外抗菌活性研究
表１　七种中药提取物对４株细菌的 MIC和 MBC值 (单位:mg􀅰mLＧ１)
Table１　MICandMBCofcrudeextractsfromsevenkindsoftraditionalChinesemedicineagainstfourbacteria
提取物Extract
标准沙门氏菌
Salmonella
MIC MBC
标准大肠杆菌
E．coli
MIC MBC
临床大肠杆菌
E．coli
MIC MBC
临床巴氏杆菌
Pasteurella
MIC MBC
黄柏Phellodendronamurense １２５ ２５０ １５．６ ３１．２５ ３１．２５ ３１．２５ ３１．２５ ６２．５
杜仲Eucommiaulmoides ６２．５ １２５ １２５ １２５ ＞２５０ ＞２５０ ２５０ ２５０
佛手Citrusmedicavar．sarcodactylis １２５ ２５０ １２５ １２５ １２５ ２５０ １２５ ２５０
栀子Gardeniajasminoides １２５ ２５０ １２５ ＞２５０ １２５ ＞２５０ ６２．５ １２５
姜黄Curcumalonga １２５ ＞２５０ １２５ ２５０ ＞２５０ ＞２５０ ２５０ ＞２５０
何首乌Fallopiamultiflora ６２．５ ６２．５ １２５ ２５０ ＞２５０ ＞２５０ ６２．５ １２５
细毡毛忍冬Lonicerasimilis ２５０ ＞２５０ ２５０ ＞２５０ ６２．５ ６２．５ ２５０ ＞２５０
组中８号试管溶液浑浊,对照组８号试管溶液澄清
的情况下,与对照组比较,实验组眼观溶液澄清、颜
色未发生变化的最低药物浓度作为该药的 MIC.
１．２．５最小杀菌浓度(MBC)的测定　将上述实验组
眼观溶液澄清的各管中液体接种涂布于琼脂平板,
经３７℃培养２４h后观察结果.以肉眼观察菌落不
生长视为１００％被杀灭,此最低药物浓度值为其
MBC值.
２　结果与分析
表１结果显示,七种中药提取物对标准沙门氏
菌、标准大肠杆菌、临床大肠杆菌、临床巴氏杆菌呈
不同抑菌效果.七种中药提取物对标准沙门氏菌的
MIC由小到大依次为杜仲＝何首乌＜黄柏＝佛手
＝栀子＝姜黄＜细毡毛忍冬;对标准大肠杆菌的
MIC由小大达依次为黄柏＜杜仲＝佛手＝栀子＝
姜黄＝何首乌＜细毡毛忍冬;对临床大肠杆菌的
MIC由小到大依次为黄柏＜细毡毛忍冬＜佛手＝
栀子＜杜仲＝姜黄;对临床巴氏杆菌的 MIC由小到
大依次为黄柏＜栀子＝何首乌＜佛手＜杜仲＝姜黄
＝细毡毛忍冬.各中药提取物的 MBC 基本为
２MIC.
总体而言,七种中药提取物对临床巴氏杆菌的
抑菌效果更好,且七种中药中黄柏的抑菌效果最好.
３　讨论与结论
中药提取的传统方法包括煎煮法、浸渍法、渗漉
法、热回流法等,其中煎煮法是最常用的方法,但煎
煮法使有效成分损失较多,尤其是水不溶成分,提取
液浓缩处理困难,容易变质失效,同时长时间高温操
作会引起热敏性有效成分大量分解等缺点.因此,
选择适当的提取方法是保证中药药效的重要前提.
本研究主要粗提中药中的主要活性成分:黄柏中的
小檗碱、栀子中的栀子苷、姜黄中的姜黄素、佛手中
的挥发油、何首乌中的二苯乙烯苷、杜仲和细毡毛忍
冬中的绿原酸抗菌活性研究.故参考相关文献的优
化工艺,用乙醇热回流法和超声法进行提取各中药
有效成分.采用真空减压浓缩,有效避免了有效成
分的破坏.
常用中药抗菌实验法有纸片法、打孔法、管碟
法、稀释法等.纸片法虽操作简单,但纸片所吸附的
药量不易确定,吸附到纸片上的药液又不易扩散;打
孔法因中药药液黏稠度大,滴在孔内的药液难以扩
散,故这两种方法均有一定局限性(林炳炎,１９８９).
管碟法取量精确,试验结果较准确,但只能作为定性
测定.稀释法分为琼脂稀释法和肉汤稀释法,稀释
法操作较其他方法更繁琐,但能进行定量测定.琼
脂稀释法能避免中药色泽及浑浊度影响,但对中药
浓度的提高有所限制,不适用于测定 MIC值较高的
中药,且受细菌接种量的影响较大;而肉汤稀释法是
药物与细菌直接接触作用,与机体内药物作用模式
较为接近,结果更能反映临床应用(马驰,２０１１).故
本实验选择肉汤稀释法进行抗菌实验研究,同时设
置颜色对照排除药液颜色干扰,并结合 MBC的测
定,能最大可能减少误差,起到定量的测定效果.
目前中药抑菌作用研究缺乏统一的评判标准,
参考刘忠义等(１９９６):当 MIC＞２５０mg􀅰mLＧ１为不
敏感,MIC介于７．８１~２５０mg􀅰mLＧ１为中敏,MIC
≤７．８１mg􀅰mLＧ１为高敏.本实验结果表明,不同
中药提取物的抗菌作用存在明显差异.除临床大肠
杆菌对杜仲提取物、姜黄提取物和何首乌提取物表
现不敏感,其 MIC＞２５０mg􀅰mLＧ１,其余细菌对各
中药提取物都有中度敏感性,MIC介于１５．６~２５０
mg􀅰mLＧ１,但 MIC差异较大.黄柏提取物抗菌效
６１７ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
果最强,栀子和佛手次之,且抗菌活性差异不大.
同种药物对同属但来源不同的细菌表现出不同
程度的抗菌活性.对于大肠杆菌,中药提取物对标
准菌株的抗菌效果普遍强于临床菌株,这可能与临
床菌株适应性和致病性强有关.梁莹(２００５)报道黄
柏对大肠杆菌抑菌效果不明显,李广京等(２００７)也
表明黄柏对大肠杆菌、巴氏杆菌、肠炎沙门氏菌无抑
菌效果,与本试验结果差异较大.黄青萍(２００８)报
道的栀子提取液对大肠杆菌的 MIC为５００mg􀅰
mLＧ１,高于本试验结果.究其原因,可能与提取方
法和细菌来源有关,不同地区中药有效成分含量也
可能存在一定差异.文献采用水提有效成分,损失
了某些水不溶性成分,而本试验采用的乙醇回流提
取,表明醇提抗菌效果可能优于水提.
本研究中药提取物的化学成分抗菌研究有相关
报道,如黄柏中的小檗碱能显著抑制空肠弯曲菌生
长,MIC为６２．５μg􀅰mLＧ１(邝耀陶等,１９９３);王少
虎等(２００１)对变形链球菌和茸毛链球菌的 MIC和
MBC均为６２５μg􀅰mLＧ１,对黏性放线菌的 MIC和
MBC 均 为 １２５０ μg􀅰 mLＧ１.Pepljnjaketal．
(１９９２)报道小檗碱还能抑制金黄色葡萄球菌、解凝
沙雷菌、摩氏变形菌等.而小檗碱产生抑菌作用的
方式则是通过抑制细菌内糖代谢过程中的丙酮酸氧
化,使细菌对维生素B６和烟酰胺等的利用受到限
制;抑制细菌体内DNA、RNA、蛋白质和类脂的合
成,从而干扰细菌的繁殖等(张茜等,２０１０).绿原
酸,同样被发现具有显著的抗菌活性,如对金黄色葡
萄球菌、停乳链球菌、无乳链球菌、大肠杆菌的 MIC
分别为１．２５、２．５、２．５、３．７５mg􀅰mLＧ１,其抗菌机制
与非竞争性抑制细菌体内的芳基胺乙酰转移酶等有
关(吴卫华,２００６;张涛等,２００９).钟英英等(２０１０)
的研究发现姜黄素对枯草杆菌和金黄色葡萄球菌的
MIC为１００mg􀅰mLＧ１,对沙门氏菌和大肠杆菌的
MIC分别为２００和＞２００mg􀅰mLＧ１.佛手果挥发
油对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌 MIC为１．２５％,金黄
色葡萄球菌 MIC为２．５％,具有良好的抑菌活性(郭
卫东等,２００９).而栀子苷和二苯乙烯苷尚未见有相
关的抗菌研究报道.
综上所述,不同提取方法对中药抑菌效果有一
定影响,适当的提取方法能更大限度的发挥中药的
抑菌作用.粗提物成分较复杂,与纯提物在抑菌效
果上具有一定差异,四川宜宾的黄柏和栀子抑菌谱
广、抗菌活性较强,佛手抗菌活性较好且稳定,可进
一步深入研究其药效物质和抗菌机理等,为其应用
于临床奠定基础.
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