全 文 :广 西 植 物 Guihaia 32(2):253-256 2012年3月
DOI:10.3969/j.issn.1000-3142.2012.02.021
温度对绞股蓝和五柱绞股蓝生长
及总皂苷积累的影响
刘世彪,彭小列*,李馨芸,王开向
(吉首大学 植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室,湖南 吉首416000)
摘 要:温度是影响绞股蓝生长发育和总皂苷积累的重要环境因子之一。将绞股蓝和五柱绞股蓝幼苗置于
10、15、20、25℃和30℃的光照培养箱中处理40d,检测其形态指标和总皂苷含量。结果表明:在25℃条件
下,绞股蓝的叶面积、叶柄长、茎长、新萌叶片数、生物量和总叶绿素含量均为最高,五柱绞股蓝的生长发育也
具有类似的规律,因此推断25℃是绞股蓝和五柱绞股蓝生长发育的适温条件。绞股蓝和五柱绞股蓝的总皂
苷含量则以30℃下最高。绞股蓝的生物量和总皂苷含量决定了总皂苷产量,25~30℃最有利于提高绞股蓝
的总皂苷产量,30℃则是提高五柱绞股蓝总皂苷产量的最适温度。
关键词:绞股蓝;五柱绞股蓝;温度;生长;绞股蓝总皂苷
中图分类号:Q946.83 文献标识码:A 文章编号:1000-3142(2012)02-0253-04
① Effects of temperature on growth and total
gypenosides accumulation in Gynostemma
pentaphylumand Gynostemma pentagynum
LIU Shi-Biao,PENG Xiao-Lie*,LI Xin-Yun,WANG Kai-Xiang
(Key Laboratory of Plant Resources Conservation and Utilization of Hunan Province,Jishou University,Jishou 416000,China)
Abstract:Temperature is one of the important environmental factors that affect the growth,development and accumu-
lation of total gypenosides in Gynostemma pentaphyllum.Seedlings of G.pentaphyllumand G.pentagynumwere
grown in ilumination incubators with temperatures of 10℃,15℃,20℃,25℃and 30℃respectively for 40d.
Then the morphological index and total gypenosides content were determined.The results showed that G.pen-
taphyllumhad the highest values of leaf area,petiole length,stem length,sprouted leaves,biomass and total content of
chlorophyl at the temperature of 25℃.The growth trend of G.pentagynumwas similar to that of G.pentaphyl-
lum.So 25℃ was suggested to be the optimum temperature for the growth of above two species.Both G.pen-
taphyllumand G.pentagynumhad the highest content of total gypenosides at the temperature of 30℃.The yield of
total gypenosides was composed of biomass and content of gypenosides.The temperature which was in favor of accel-
erating the yield of total gypenosides for G.pentaphyllumwas 25-30℃,and that for G.pentagynumwas 30℃.
Key words:Gynostemma pentaphyllum;G.pentagynum;temperature;growth;total gypenosides
绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)为葫芦科
绞股蓝属多年生草质藤本植物,体内富含人参皂苷
成分,具有多种生理功效,因主要分布于我国秦岭以
南地区而被誉为“南方人参”,是重要的药用、保健植
① 收稿日期:2011-06-24 修回日期:2011-12-17
基金项目:湖南省自然科学基金重点项目(09JJ3051);湖南省高校产业化培育项目(10CY015)[Supported by Natural Science Foundation of Hunan
Province(09JJ3051);Industrializing Cultivation Project of Hunan Higher Education(10CY015)]
作者简介:刘世彪(1965-),男,湖南保靖县人,博士,教授,主要从事结构植物学和植物资源学研究,(E-mail)liushibiao_1@163.com。
*通讯作者(Author for correspondence,E-mail:pengxiaolie2005@163.com)
物。五柱绞股蓝(G.pentagynum)主要分布在我国
湘西北、鄂西南、渝东南、黔东北交界处的武陵山区,
体内也含有绞股蓝皂苷成分。作为耐阴植物,绞股
蓝的自然分布、生长发育和总皂苷积累主要受光照
和温度的影响,目前关于光照对绞股蓝影响的研究
报道较多(邓铭等,2000;郭素枝等,2008),但有关温
度对绞股蓝的生长发育和总皂苷积累的研究尚未引
起重视。绞股蓝受温度的影响,只能自然分布于南
方地区,正常条件下其最适生长温度为20~28℃,
连续出现3~5d低温,就会受冻害,而超过30℃则
易遭受日灼危害,低温和高温都会给生产种植带来
影响(刘敏华,2001;李羡月等,1994)。野外调查发
现,湘西地区冬季的五柱绞股蓝地上部分能保持生
活状态,而绞股蓝的地上部分则自然枯死,这种抗寒
性的差异与它们的渗透调节物质的多少和保护酶的
活性高低有关(刘世彪等,2008),但人们对这两种绞
股蓝生长发育和皂苷积累的最适温度尚不了解。本
实验以绞股蓝和五柱绞股蓝幼苗为材料,检测不同
温度处理下植株的生长和总皂苷积累状态,以探讨
其对温度影响的适应关系。
1 材料与方法
1.1材料培养及处理
于2010年3月将盆栽于口径15cm花钵内的
生长一致、高约10cm的绞股蓝和五柱绞股蓝扦插
苗,随机分为5组,每组10株,分别置于SPX-25OB-
G微电脑光照培养箱中,培养箱温度分别设定为
10、15、20、25、30℃。光照/黑暗时间12h/12h,光
照强度1 100lx,温度90%。隔天用稀释的营养液
喷水1次,保持土壤含水量20%~30%。连续培养
40d。
1.2实验方法
1.2.1形态指标的测定 用不锈钢数显卡尺测量温
度处理后植株新长出的茎蔓长度、新长出茎蔓第3
节间处的茎直径和第3片新叶的叶柄长度,用S-
120便携式叶面积扫描仪测定第3片新叶的叶面
积,用电子天平称取新生茎叶的干重作为生物量,同
时统计新萌出的叶片数。每个温度处理组测定10
株,取平均值,所得结果用SPSS统计软件进行多重
比较的差异显著性分析。
1.2.2叶绿素含量的测定 每处理组取各株的第3
片叶,剪碎后混合,按照张志良和瞿伟菁(2003)的方
法测定总叶绿素含量和叶绿素a/b值。重复3次,
取平均值。
1.2.3总皂苷的提取及含量测定 分别采取处理后
的绞股蓝和五柱绞股蓝的新生茎叶,置60℃烘箱内
恒温烘干36h至恒重。用粉碎机粉碎后过10目筛
保存。总皂苷的提取及含量测定参照宋小妹等
(1998)的方法,即用乙醇浸提、超声波辅助提取总皂
苷(KQ-250E型超声波清洗器),提取液用RE-52旋
转蒸发器蒸发浓缩,分光光度法测定总皂苷含量
(723A可见光分光光度计,检测波长550nm)。每
个处理重复测定3次,取平均值,所得结果用SPSS
统计软件进行各处理间的显著性分析。
2 结果与分析
2.1温度处理对两种绞股蓝生长和叶绿素含量的影响
按上述方法,测出不同温度处理对绞股蓝和五
柱绞股蓝的生长和叶绿素含量的影响如表1所示:
表1显示,10℃时绞股蓝的单叶面积、叶柄长、
茎长、茎直径、新萌叶数和单株生物量都明显低于其
他各温度下的相应指标,这是由于低温下绞股蓝的
生长迟缓导致的。随着温度的上升,绞股蓝的生长
发育明显加快,15℃时的各项指标均高于10℃,其
中单叶面积、茎长和单株生物量的差异达到显著水
平。20℃时的各项指标除单株生物量与15℃时差
异不显著外,其余各项指标均显著高于15℃。25
℃下绞股蓝的叶柄长和单株生物量显著高于20℃
下,其余各指标差异不明显。30℃下绞股蓝的各项
指标比25℃下均有明显下降,其中单叶面积、茎长、
新萌叶数和单株生物量的下降达显著水平;但30℃
下的各项指标却显著高于10℃和15℃,而单叶面
积、茎长和新萌叶数显著低于20℃下的绞股蓝,茎
直径和单株生物量相差不显著。总体来看,25℃下
的绞股蓝各指标最高,生长发育最好。不同温度处
理下的绞股蓝总叶绿素含量也随温度的升高而增
加,25℃下的数值显著高于其他处理,至30℃时有
所下降。叶绿素a/b与温度的关系不明显,但以25
℃时最大。
五柱绞股蓝的生长发育具有类似的规律,随着
温度从10℃上升到25℃,五柱绞股蓝的各项生长
指标都明显增加。10℃处理下的各项指标均最低,
15℃时的单叶面积、叶柄长和茎长显著高于10℃
时的数值。20℃时的茎长、新萌叶数和单株生物量
452 广 西 植 物 32卷
显著高于15℃,其余差异不显著。25℃时的单叶
面积和叶柄长显著高于20℃,除茎直径外的其余各
项指标显著高于15℃。30℃下的各指标均比25
℃时有所降低,其中叶柄长、茎长、茎直径和新萌叶
片数达显著水平,单叶面积和单株生物量的下降未
达显著水平。各级温度处理下的总叶绿素含量随温
度的增加而升高,以25℃下的值最高,但30℃时降
至最低。叶绿素a/b的变化没有明显的规律,但也
以25℃最高,30℃最低。就绞股蓝和五柱绞股蓝
两个物种而言,绞股蓝新萌的叶片数较多,茎蔓较
长,而五柱绞股蓝的茎蔓较粗,生物量较大,总叶绿
素含量较高,这与两种绞股蓝在野外的生长势是一
致的,但差异显著性测验结果显示,这些数值差异均
未达到显著水平。
表1 不同温度对绞股蓝和五柱绞股蓝的生长和叶绿素含量的影响
Table 1 Effects of temperatures on growth and contents of chlorophyl in G.pentaphyllumand G.pentagynum
物种
Species
处理
条件
Tep.
单叶面积
(cm2)
Leaf area
叶柄长(cm)
Petiole
length
茎长(cm)
Stem
length
茎直径(mm)
Stem
diameter
新萌叶数
(片/株)
New leaves
单株生物量
(g,dw)
Single biomass
总叶绿素
含量(mg/L)
Total Chl.
叶绿素
a/b
Chl.a/b
绞股蓝 10℃ 0.88±0.10d 0.35±0.08c 1.05±0.22d 0.83±0.02b 2.3±0.2c 0.12±0.08c 6.35±0.01b 1.87
G.penta- 15℃ 2.94±0.22c 0.91±0.18c 5.36±0.61c 0.97±0.08b 3.4±0.6c 0.63±0.12b 7.74±0.01b 2.18
phyllum 20℃ 10.74±1.13a 2.86±0.25b 38.43±2.71a 1.51±0.09a 14.4±1.5a 0.83±0.09b 7.76±0.01b 1.16
25℃ 12.74±1.87a 3.80±0.38a 48.88±2.54a 1.38±0.10a 17.9±2.2a 1.23±0.08a 8.94±0.01a 2.59
30℃ 8.63±1.32b 3.68±0.39a 17.88±2.38b 1.30±0.07a 8.0±1.1b 0.95±0.06b 7.99±0.01b 1.70
平均 7.19±5.08 2.32±1.60 22.31±20.76 1.20±0.29 9.20±6.81 0.75±0.41 7.36±1.29 1.90
五柱绞股蓝 10℃ 2.06±0.21c 0.71±0.08c 3.36±0.27c 1.32±0.05a 3.0±0.5b 0.32±0.07b 9.08±0.02ab 2.03
G.penta- 15℃ 7.22±0.87b 2.63±0.25b 13.13±1.73b 1.38±0.18a 4.3±0.8b 0.65±0.13b 9.37±0.01ab 1.82
gymum 20℃ 7.49±1.22b 2.79±0.17b 27.51±2.22a 1.58±0.14a 9.3±1.7a 1.52±0.12a 9.82±0.02ab 2.41
25℃ 10.18±1.38a 4.12±0.28a 29.47±2.15a 1.56±0.12a 8.7±1.3a 1.87±0.46a 11.08±0.01a 2.66
30℃ 10.11±1.22a 2.72±0.12b 10.32±1.77b 1.06±0.08b 3.4±1.0b 1.64±0.55a 7.24±0.01b 1.43
平均 7.41±3.30 2.59±1.22 16.76±11.31 1.38±0.21 5.74±3.02 1.20±0.67 9.32±1.39 2.07
注:表中数据为10株平均值,不同小写字母显示0.05水平差异显著。
Notes:The data means of 10plants.Different letters indicate significant difference(P<0.05).
2.2温度处理对两种绞股蓝中绞股蓝总皂苷含量的
影响
按上述方法,测出两种绞股蓝在四个不同温度
处理下的总皂苷含量(10℃时绞股蓝的生物量太
小,未测定其总皂苷含量),如图1所示。
从图1可以看出,30℃下的绞股蓝总皂苷积累
最多,其含量达1.40%,显著高于其他处理组。15、
20和25 ℃ 下的总皂苷含量相差不大,分别为
1.11%、1.13%和1.06%。30℃下绞股蓝的总皂苷
含量是15℃下总皂苷含量的1.26倍,20℃下的
1.24倍,25℃下的1.32倍。对五柱绞股蓝而言,也
是30℃下的总皂苷含量最高,为0.91%,显著高于
20℃(0.55%)和25℃(0.52%)下的含量。15℃
下的总皂苷含量(0.71%)虽然也低于30℃,却高于
20℃和25℃,但与三者间的差异不显著。30℃下
的总皂苷含量是15 ℃下的1.28倍,20 ℃下的
1.65%倍,25℃下的1.75倍。绞股蓝与五柱绞股
蓝相比,在相同温度处理下,绞股蓝的总皂苷含量均
显著大于五柱绞股蓝的总皂苷含量。
图1 不同处理温度下绞股蓝和五柱绞股蓝总皂苷含量
Fig.1 Contents of total gypenosides of G.pentaphyllum
and G.pentagynumunder different temperatures
2.3温度处理对两种绞股蓝单株总皂苷产量的影响
绞股蓝单株总皂苷产量是由绞股蓝的生物量和
总皂苷含量所构成。基于表1和图2的数据相乘,
可以得出温度对两种绞股蓝单株总皂苷产量的影响
(表2)。由表2可知,绞股蓝单株的总皂苷产量是
随温度的增加而增加的。30℃处理的绞股蓝单株
5522期 刘世彪等:温度对绞股蓝和五柱绞股蓝生长及总皂苷积累的影响
总皂苷最高,为13.30mg,25℃的总产量(13.04
mg)与之相近,两者均显著高于20℃下的9.38mg
和15℃下的6.99mg。30℃下的总皂苷产量分别
是25℃、20 ℃和15 ℃下的1.02倍、1.42倍和
1.90倍。30℃处理的五柱绞股蓝的单株总皂苷产
量高达14.92mg,显著高于25℃下的9.72mg、20
℃下的9.38mg和15℃下的4.62mg,是25℃下
产量的1.54倍、20℃的1.78倍和15℃下的3.23
倍。两个物种相比,绞股蓝的总皂苷含量高于五柱
绞股蓝,但五柱绞股蓝的生物量高于绞股蓝,因此,
虽然绞股蓝在15~20℃时的总皂苷产量略高于五
柱绞股蓝,五柱绞股蓝在30℃时的总皂苷产量略高
于绞股蓝,但其平均产量的差异并不显著。综合来
看,绞股蓝在25~30℃的温度环境中具有较高的总
皂苷产量,而五柱绞股蓝只在30℃具有较高的总皂
苷产量。
表2 不同处理温度下绞股蓝和五柱
绞股蓝的单株总皂苷产量
Table 2 The yields of total gypenosides of G.pentaphy-
llumand G.pentagynumunder different temperatures
物种
Species
处理
条件
Tep.
单株生物量
(g.dw)
Biomass
of single
plant
总皂苷含
量(%)
Contents
of total
gypenosides
单株总皂
苷产量(mg)
Yields of total
gypenosides
of single plant
绞股蓝 10℃ 0.12±0.08c / /
G.penta- 15℃ 0.63±0.12b 1.11±0.04b 6.99b
phyllum 20℃ 0.83±0.09b 1.13±0.03b 9.38b
25℃ 1.23±0.08a 1.06±0.04b 13.04a
30℃ 0.95±0.06b 1.40±0.02a 13.30a
平均 0.75±0.41 1.18±0.15 10.68±3.04
五柱绞股蓝10℃ 0.32±0.07b / /
G.penta- 15℃ 0.65±0.13b 0.71±0.02ab 4.62c
gymum 20℃ 1.52±0.12a 0.55±0.04b 8.36b
25℃ 1.87±0.46a 0.52±0.03b 9.72b
30℃ 1.64±0.55a 0.91±0.05a 14.92a
平均 1.20±0.67 0.67±0.18 9.41±4.26
3 结论与讨论
绞股蓝自然分布于我国秦岭以南的广大地区,
造成这种分布格局的主要环境因子是温度。作为昼
夜连续生长型植物,绞股蓝在生长初期夜间的生长
量小于白天,盛夏时则夜间高于白天,阴雨天高于晴
天。绞股蓝在春季低温时萌发生长慢,而在夏秋季
生长快,其原因在于适当的温度条件有利于植物的
无氮物质如多糖、淀粉等的合成(鲁守平等,2006),
促进植物生物量的增加。本实验中绞股蓝的生长发
育随着温度的升高而加快,在10~30℃的温度区间
内,以25℃下绞股蓝的叶面积、叶柄长、茎长、新萌
叶片数最多,所以其生物量最高。而此时的总叶绿
素含量高,光合作用生成的物质最多。30℃时绞股
蓝的各项形态指标和生物量有所下降,这与其总叶
绿素含量的下降有关,因为高温对叶绿素具有破坏
作用(蒋彪等,2007),从而影响其光合作用和初生产
物的积累。五柱绞股蓝的生长发育也具有类似的规
律,因此,可以推断25℃是绞股蓝和五柱绞股蓝生
长发育的适温条件。但五柱绞股蓝的生物量和总叶
绿素含量都比绞股蓝要大,可能其光合效率也比绞
股蓝要高。
温度也是调节植物次生代谢水平的重要环境因
子。高温有利于生物碱、蛋白质等含氮物质的合成,
低温会导致不饱和脂肪酸的增加以产生抗低温防御
反应。在高温干旱条件下,颠茄、金鸡纳等植物体内
生物碱的含量较高,而欧乌头在高温条件下含乌头
碱有毒,在寒冷低温时则不含碱而无毒(鲁守平等,
2006)。在非最佳温度下,玉米向光面的叶片中会积
累花青素,从而有效防止光抑制造成的伤害(Pietri-
ni等,2002)。本实验证明,在15~30℃的温度范围
内,绞股蓝和五柱绞股蓝的总皂苷含量均以30℃下
最高,25℃下最低,而其余温度下的含量略高于25
℃下的含量,其原因可能是25℃下,绞股蓝的光合
产物主要用于营养生长来增加生物量,皂苷的转化
和积累较少,而在非最适温度下,初生代谢产物更多
地被转化为次生代谢产物,以皂苷的较多积累来抵
御低温或高温逆境,因此30℃时的皂苷含量最高。
绞股蓝总皂苷的产量是由生物量和总皂苷含量所决
定的,综合来看,25~30℃是绞股蓝获得较高的总
皂苷产量的最适温度范围,30℃是五柱绞股蓝获得
较高总皂苷产量的最适温度。因此,在绞股蓝的栽
培生产中,除了要选择适宜的光照环境外,还应考虑
适宜的气温环境,25~30℃的环境有利于绞股蓝的
生长发育、生物量和总皂苷产量的增加。
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(下转第279页Continue on page 279)
652 广 西 植 物 32卷
而且近来整合有地理信息的方法,不是基于传统的
可操作的标准,而是至少转向显示部分谱系分离的
基因型或表型特征的极具变化的方法。
3 结论
在概念化和逻辑性问题很清楚地分离情况下,
关于统一物种概念的普通主题,应该意识到所有的
物种概念是有变化的。统一的物种概念终止似乎无
止尽的不必要的对于物种阶元的争端,而且提供统
一背景,对与物种界定相关的方法多样性的理解,也
是对凭经验判断物种方法的整合。
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