全 文 ：葫芦科植物合子草致突变抗突变效应的研究
吴启南 王明艳 王永珍
(南京中医药大学药学院中药鉴定教研室, 210029, 江苏南京 / /第一作者男, 1963年 生, 副教授)
摘 要: 本研究以 C57纯种小鼠骨髓细胞的姐妹染色单体互换( SCE)和微 核( M N)为指标,对合子草提取物进行致变、抗
变测试,实验数据经统计学处理, 结果表明: 合子草提取物以 SCE、MN 为指标均无致变效应;提取物以 M N 为指标均有抗变
效应; 以 SCE 为指 标水提取物低剂量组( 5g /kg)无抗变效应, 而高剂量组 ( 8. 75g /kg、12. 5g /kg)均有抗变效应; 乙醇提取物
则无抗变效应。
关 键 词: 合子草; 致突变; 抗突变; 效应; 研究
中图分类号:R931. 5 文献标识码:A 文章编号: 1009 - 5276( 2002) 06 - 0729 - 02
合子草 Actinostemma tenerum Grif f. 为
葫芦科植物 ,具有利尿消肿, 清热解毒, 去
湿之效。民间常用于治疗肾炎水肿, 腹水
肿胀及毒蛇咬伤等112。也有用合子草注
射液, 肌注治疗急性肾炎122。自 80 年代
初开始,日本学者对合子草中的皂苷成分
进行了研究,发现其具有与人参皂苷结构
相似 的化学成分132。国内有关学者对合
子草药理作用进行了研究,结果显示, 合子
草 的水提液,对巴豆油所致的急性炎症有很好的抑制作用;
并能延长凝血时间, 降低血液粘滞度; 体外试验合子草总皂
苷对肺炎球菌、链球菌等多种细菌均有良好的抑制 作用。
合子草提取物(主要含皂苷)具有明显的抗应激能力;能显著
增强小鼠免疫功能;并能 降血脂142。因此,合子草的开发应
用受到人们的普遍关注。为确保合子草使用安 全、有效, 本
文开展了其致突变、抗突变的实验研究。穿心莲具有多种药
理活性,有较高的药用和保健价值。过去的研究侧重于内酯
类成分的抗菌消炎作用, 近年来,穿心莲在心血管方面的作
用已逐渐引起重视。目前,已从穿心莲中提取纯化得到黄酮
类成分 API0. 134进行心血管药理及其作用机制的研究, 但其
确切机制及各种作用之间的相互关系仍亟待进一步探讨。
1 实验材料
动 物 C56 ,纯种小鼠( 20 - 22g) ,雌雄不限, 南京中医
药大学实验动物中心提供。
药 品 供试品: 合子草水提液 ( ATW) ,取全草按常法
煎煮,离心去沉淀, 浓缩至浓度为 1g /2m l,冷藏备用;合子草
乙醇提取液( ATE) , 取干燥的合子草粉末,加乙醇热回流提取
3次, 过 滤,乙醇提取液浓缩至浓度约为 1g /ml, 冷藏备用。
试 剂 乙醇、甲醇、冰醋酸、环磷酰胺( CPP)、活性碳
( 300 目过筛)标记 5 - Brdv、注射用秋水 仙素、染色剂等。
仪 器 恒温水浴锅、显微镜、计数器及紫外灯等。
2 实验方法
在试验中,实验用动物随机分为 7 组, 每组 10 只,设空
白及阳性对照组,实验组均分别按 实验剂量, 连续灌胃合子
草供试液 10 天, 空白对照组每天灌胃蒸馏水 0. 4ml /只, 阳
性对照 组均用公认的诱变剂 CPP腹腔注射 20mg /kg ,第 11
天各组均脱颈处死小鼠, 取骨髓进行 SCE 及 M N 常规制
片。抗变实验中,各实验组与阳性对照组一样, 均用公认的
诱变剂 CPP腹腔注射 20mg /kg。
SCE 制片:常规制片后紫外光照 25 分钟, 距离 6cm。活
性炭( 300 目过筛)标记 5 - Brdv(磁性搅拌 2~ 2. 5 小时) , 实
验对照组处死前 30 小时腹腔注射 CPP ,空白、实验对照组及
各实验组处死前 3~ 4 小时注射秋水仙素 5mg /kg ,常规制备
骨髓细胞染色体标本,标本在 37e 温箱中老化两天 后进行
分化染色,每只动物制片 4张, 每片至少计数 30个中期分裂
相,按 Lamber法计数 SCE。
MN制片: 骨髓细胞置生理盐水中, 去上清液, 加 37 e
预温约 0. 075M KCI 3ml置 37 e 下, 8 分 钟后加入固定液甲
醇- 冰醋酸( 3B1) 1ml预固定, 离心后去上清液, 加入固定液
4ml, 混匀, 固定两次后滴片, 用 PH= 6. 4 的 Giemsu 液染色
15 分钟,每个标本统计 5000 个细胞,计算出微核 率。
3 实验结果
致变检测结果 合子草提取物以 SCE、MN 为指标致变
检测结果分别见表 1、2。
表 1 合子草提取物 SCE致变检测结果
组别 空白对照组
( 1)
阳性对照组
( 2)
ATW组
5g /kg#d
ATW组
8. 75g /kg#d
AT W组
12. 5g /kg#d
ATE组
12. 5g /kg#d
AT E组
25g /kg#d
SCE均数 25. 95 71. 91 26. 37 26. 31 26. 2 25. 84 25. 35
SCE频率 2. 595 7. 191 2. 637 2. 631 2. 62 2. 584 2. 535
P(与 1)对照 < 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 > 0. 05
P(与 2对照) < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05
基金项目:江苏省教育厅自然科学基金项目( 94064)。
由表 1可以看出, 空白对照组与阳性对照组 SCE 频率
相比,两者有统计学显差 ( P < 0. 05) , 表明本实验在确知的
#729#2 0 0 2 年1 2 月第2 0卷第 6期 中 医 药 学 刊
DOI：10.13193/j.archtcm.2002.06.22.wuqn.011
诱变剂 CPP的作用下确可诱变。ATW 三个剂量组和 ATE
二个剂量组的 SCE 频率与空白对照组无显著性差异( P > 0.
05) ;而实验组与阳性对照组之间有明显差异,表明所有实验
剂量均无致变效应; ATW 三个实验组之间 , ATE 二组之间
无显著性差异, 也无剂量 ) 效应关系。
表 2 合子草提取液 MN致变检测结果
组别 空白对照组
( 1)
阳性对照组
( 2)
ATW组
5g /kg#d
ATW组
8. 75g /kg#d
AT W组
12. 5g /kg#d
ATE组
12. 5g /kg#d
AT E组
25g /kg#d
观察细胞数 5000 5000 5000 5000 5000 5000 5000
微核数 15 44 25 22 24 23 26
微核率 3j 8. 8j 5j 4. 4j 4. 8j 4. 6j 5. 2j
P(与 1对照) < 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 > 0. 05
P(与 2对照) < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05
由表 2 可见,空白对照组与阳性对照组相比, MN 频率
有显著性差异 ( P < 0. 05) , 表明本实验在确知的诱变剂
CPP 的作用下确可诱变, 5 个实验组与阳性对照组比较均有
显著 性差异( P < 0. 05) , 而与空白对照组比较无显著性差
异( P > 0. 05) , ATW 三个用药组之间、ATE 二个用药组之
间也无显著性差异,表明合子草水提液无致变效应, 也无剂
量 ) 效应关系。
抗变检测结果 合子草提取物的以 SCE、MN 为指标的
抗变检测结果分别见表 3、4。
表 3 合子草提取物 SCE抗变检测结果
组别 空白对照组
( 1)
阳性对照组
( 2)
ATW组
5g /kg#d
ATW组
8. 75g /kg#d
AT W组
12. 5g /kg#d
ATE组
12. 5g /kg#d
AT E组
25g /kg#d
SCE均数 25. 95 71. 91 70. 4 47. 55 38. 13 72. 97 72. 57
SCE频率 2. 595 7. 191 7. 04 4. 755 3. 813 7. 297 7. 257
P(与 1对照) < 0. 05 < 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 < 0. 05 < 0. 05
P(与 2对照) < 0. 05 > 0. 05 < 0. 05 < 0. 05 > 0. 05 > 0. 05
由表中可以看出, ATW 组 5g /kg#d、ATW 组 12. 5g /kg#
d、ATE 组 25g /kg#d的 实验组与阳性对照组比较,两者无显
著性差异( P > 0. 05) , 说明在此浓度下无抗变效应, 而 A
TE 组 8. 75g /kg#d 组和 12. 5g /kg#d组与阳性对照组比较有
显著性差异( P < 0. 05,表明此二 浓度下有抗变效应。
表 4 合子草提取物 MN抗变检测结果
组别 空白对照组
( 1)
阳性对照组
( 2)
ATW组
5g /kg#d
ATW组
8. 75g /kg#d
AT W组
12. 5g /kg#d
ATE组
12. 5g /kg#d
AT E组
25g /kg#d
观察细胞数 5000 5000 5000 5000 5000 5000 5000
微核数 15 44 24 26 23 27 21
微核率 3j 8. 8j 4. 8j 5. 2j 4. 6j 5. 4j 4. 2j
P(与 1对照) < 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 > 0. 05 > 0. 05
P(与 2对照) < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05 < 0. 05
由上表可见, 空白对照组与阳性对照组有显著性差异,
与致变检测相同。5 个用药组与空白对照组均无显差( P >
0. 05) ,而与阳性对照组有显差( P < 0. 05) , 表示合子草 水
提液、醇提液均具有明显抗变效应。
4 讨 论
以 SEC、MN 为指标, 对合子草水提液、醇提液进行致变
检测, 结果表明,水提液 3 个剂量组醇提液 2 个剂量组均无
致变效应。以 SEC、MN 为指标,对合子草水提液、醇提液进
行抗变检测,结 果表明,两种提取液 MN 均有抗变效应; 而
以 SCE 为指标,水提液低剂量( 5g /kg )无抗变效应, 高剂量
( 8. 75g /kg、12. 5g /kg)具有抗变效应, 醇提液无抗变效应。
本文旨在通过抗变、致变的实验结果来探讨药用资源的
开发应用,合子草全国资源丰富, 从 实验结果可以看出, 合
子草毒性小,其水溶性成分具有广阔的开发前景。
参考文献
112赵学敏. 本草纲目拾遗1M2. 北京: 人民卫生出版社,
1963: 243
1225全国中草药汇编6编写组. 全国中草药汇编(下册)1M2.
北京: 人民卫生出 版社, 1983: 585
132Iw amo to . M et al. Studies on the Constituents of Actinos-
temma lobatum Maxim. Chem. Pharm. Bull. 1987, 2: 553
142徐惠波, 孙晓波,李延忠, 等.合子草提取物药理作用的初
步研究1J2.长白山 中医药研究与开发, 1994, 2: 44
( 2002 - 10 - 11 收稿; 2002 - 11 - 20修回)
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#730# Chinese Archives of T raditional Chinese Medicine December. 2002, Vol. 20, No. 6