全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 31(3)：418— 421 2011年 5月
DOI：10．3969／j．issn．1000—3142．2011．05．026
HPLC法测定牡荆中牡荆素的含量
罗娅君，边清泉，陈 佳，蒋云福，陈 驹
(绵阳师范学院 化学与化学工程学院 ，四川I绵阳 621000)
摘 要：建立了牡荆中牡荆素含量的高效液相色谱测定方法，对牡荆资源进行评价，为牡荆的质量标准的建
立提供参考。样品采用超声波提取法提取，色谱柱为菲罗门柱(5 Fm，250 mmx4．6 ram)，流动相为甲醇一水溶
液(4：6)，流速为 1．0 mL·min ，检测波长为 340 nm，进样量为 5 FL，在柱温 30℃时对牡荆中牡荆素的含量
进行检测。结果表明，待测组分与其他组分分离度良好，牡荆素在 0．04520～0．4068 Fg范围内呈良好的线性
关系，r=0．9998；平均回收率为 100．4 ，RSD为 1．63 。该方法简便、准确、重现性好，适用于牡荆中牡荆素
的含量测定及药材质量控制。
关键词：超声提取；高效液相色谱；牡荆；含量测定
中图分类号 ：Q946 文献标识码：A 文章编号：1000—3142(2011)03-0418—04
Determination of vitexin in Vitex negundo
var．cannabifolia by HPLC
LUO Ya-Jun，BIAN Qing-Quan，CHEN Jia，
JIANG Yun-Fu，CHEN Ju
(Colege of Chemistry& Chemical Engineering，Mianyang Normal University，Mianyang 621000，China)
Abstract：A method was established for determining contents of vitexin in Vitex negundo var．cannabifolia(Sieb．et
Zucc．)by HPLC in order tO evaluate this resource．Vitexin was obtained by ultrasonic extraction，separated on Filo
door column(5“m，250 mm×4．6 mm)with a mixture of methanol—water(volume ratio 4：6)as mobile phase at flow
rate 1．0 mL·min- ．The UV detective wavelength was 340 nm，injection volume was 5 FL，and the column tempera—
ture was set at 30℃ ．Vitexin content showed a good 1inear relationship within 0．04520— 0．4068 Fg．(r一0．9998)
and the average recovery was 100．4％o，RSD was 1．63 ．This method is simple，accurate and can be used for quality
control of Vitex negundo var．cannabifolia．
Key words：ultrasonic eextraction；HPLC；Vitex negundo var．cannabifolia；determination
牡荆素(vitexin)又称牡荆苷 ，是一种天然植物
黄酮苷类化合物，它广泛分布于自然界几十种植物
的叶茎中，例如牡荆、蔓荆子、算盘子、山楂，小叶榕、
桫椤叶、海金沙、乌蕨、构树叶、山里红、大青叶等，其
中最主要来源是马鞭草科牡荆素植物的叶、茎和山
楂。牡荆素具有多种生理活性，临床主要用于治疗
心血管疾病，具有防癌抗肿瘤(Diaz等，2003；谢晶
等，2010)、活血化瘀，理气通脉、抗炎、解痉、降压等
作用。用于瘀血阻脉所致的胸痹，症见胸闷憋气，心
前区刺痛、心悸健忘、眩晕耳鸣、冠心病心绞痛、高脂
血症、心动脉供血不足等症候者(Wang等，2005；
Haidara等 ，2006)。
收稿 日期 ：2010一i0—19 修回日期 ：2011-01—25
基金项目：四川省教育厅重点项 目(092A180)；绵阳师范学院科研项 目(MA2009017)[Support ed by the Scientific Research Foundation of Education
Department of Sichuan Province(092A180)；the Scientific Research Foundation of Mianyang Normal University(MA2009017)]
作者简介：罗娅君(1973一)，女 ，四川资中人 ，博士，教授 ，研究方向为现代分离分析方法，(E-mail)luolaowu@126．com
3期 罗娅君等：HPLC法测定牡荆中牡荆素的含量 419
许多植物提取厂家都在生产牡荆素类植物提取
物，但多以山楂(陈钟等，2009；朱思遥等，2006)、小
叶榕(陈化等，2008)、乌韭(任冰如等，2007)、蔓荆子
(田振坤等，2005)、千针万线草(谭瑞璞等，2009)等
为研究对象，而牡荆叶和牡荆子都为富含黄酮类牡
荆素天然化合物，但牡荆 目前还处于野生状态，在北
方地区和南方山区分布广、生长零散，大规模种植的
牡荆几乎没有。使用高效液相色谱法测定牡荆中牡
荆素的含量未见报道。本论文采用高效液相色谱法
测定牡荆中牡荆素的含量，以期为牡荆的药用价值
的进一步开发利用提供科学依据和 良好的理论
指导。
1 仪器和试剂
Fw一177中草药高速粉碎机(天津市泰斯特仪
器有限公司)；LC一6AD型高效液相色谱仪(日本岛
津公 司)，包括 SPD-10AUP检测 器，CLASS—vp5．0
色谱数据处理工作站，CTD-6A色谱柱温箱；KQ-
250DE型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司)。牡荆素对照品(上海永恒生物科技有限公
司，经 HPLC检测纯度)98．5％)甲醇为色谱纯，其
余试剂为分析纯，实验用水为二次重蒸馏水。
2 方法与结果
2．1色谱条件
色谱柱为菲罗门色谱柱(5 m，250 mm×4．6
ram)，流动相为甲醇一水溶液(4：6)，流速为 1．0 mL
·mif ，UV检测 ，检 测波长为 340 nm，柱温 为 3O
℃，进样量为 5 L，灵敏度为 0．050 AUFS。
2．2对照品溶液的配制
精密称取牡荆素对照品 22．6 mg，置于 50 mL
烧杯中，加甲醇溶液 20 mL，溶解后转入 50 mL容
量瓶，用甲醇溶液稀释至刻度，超声至完全混匀，作
为对照品溶液(452 tLg·mL )，待测。
2．3供试品溶液的制备
将 自绵阳森林公园采集的牡荆茎和叶洗净，自
然风干后粉碎并过筛。精密称取样品，加人 10 mL
甲醇，再加入石油醚振荡，静置分层除去叶绿素等脂
溶性物质后，将下层溶液过滤于 25 mL比色管中，
置于超声波清洗器中超声 60 min，滤渣分别用约 5
mL甲醇超声波萃取 2次，合并滤液，用甲醇定容至
25 mL，摇匀。用 0．45 m微孔滤膜过滤头过滤，取
续滤液待测。牡荆素对照品的色谱图见图 1、供试品
的色谱图见图 2(其中，工为目标组分)，从图1和图2
中可看出牡荆素的保留时间为 10．40 m_in且分离效
果好。
0．O 2．5 5．0 7．5 10．012．515．017．520．0 22．525．0
Minutes
图 1 牡荆素对照品的色谱图
Fig．1 HPLC chromatogram of vitexin
reference standard
0．O 2．5 5．O 7．5 10．012．515。017．5 20．O 22．525．0
Minutes
图 2 供试品的色谱图(I：牡荆素)
Fig．2 HPLC chromatogram of vitexin
sample(I：vitexin)
2．4检测波长的选择
用二极管阵列检测器在本实验溶剂体系条件
下，分析了牡荆素对照品色谱峰的紫外光谱，牡荆素
对照品在 270 am和 340 am之间都有相应吸收，充
分地考虑在 270 nm处其它不明物组分有一定吸
收，将对测定产生干扰，导致测定误差。且在 340
nm处时吸收最强，所以选择 340 nm为牡荆素的检
测波长 。
2．5线性范围的考察
分别精密吸取一定量的对照品溶液，将其稀释
1O倍后(45．2 g·mL。)分别进样 1，3，5，7，9 L，
重复测定 3次，对相应色谱峰进行面积积分。以对
照品进样量 X(ug)对峰面积平均值y( v．s)绘制标
准曲线并计算线性回归方程，得到牡荆素对照品的
回归方程：Y：9．996×105X一3．007×103，相关系
420 广 西 植 物 31卷
数：r：0．9998。结果表明，牡荆素在 0．04520～
0．4068 tlg范围内与峰面积之间呈良好的线性关系。
2．6精密度试验
精密吸取牡荆素对照品溶液 5 L，按 2．1中色
谱条件，注入高效液相色谱仪中，平行测定 5次，比
较色谱峰面积积分值，牡荆素平均峰面积为 220
161，RSD= 2．27 ( =：=5)。
2．7稳定性考察
取同一供试品溶液，按“2．1”所述色谱条件，分
别在 0，2，4，6，8 h平行进样分析，比较 5次平行进
样的峰面积积分值(表 1)，牡荆素的平均峰面积为
107 838，RSD为 2．75 。结果表明，供试品溶液的
峰面积积分值随放置时间的延长有明显的降低趋
势，但在 8 h内满足含量测定方法对分析时间的要
求，说明测定溶液配制好后，放置 8 h内测定均可。
2．8重现性试验
平行配制 5份供试品溶液，按“1．2”所述色谱条
件进样平行测定 5次，计算牡荆素的质量分数，RSD
一 2．42 ，表明该方法重现性较好 。
2．9加标回收率试验
精确称取已知含量的样品预处理物 5份，分别
精密加入 452 g·mL 的牡荆素对照品适量，制备
供试品溶液，进样 5 I 依色谱条件测定，重复 3次。
牡荆素的回收率为 98．85 ～103．1 ，平均回收率
表 1 稳定性试验结果
Table 1 The stability test of vitexin sample
序号 No． s g) c。n A g) Re sult
量
(~ Rec。ve
回收
ry r
率
ate(％) A
。平均
vera
回收
ge(％
率
) (
R SD
)
1 0．2522 278．9 271．2 550．1 1OO．0 1OO．4 l_63
2 0．2522 226．0 502．3 98．85
3 0．2522 271．2 551．4 100．5
4 0．2522 226．0 503．7 99．47
5 0．2522 316．4 605．1 1O3．1
为 100．4 ，RSD=1．63 。回收率试验结果见表2。
2．10含量测定
按“1．4”项制备供试品溶液，精密吸取 5 L，注
入HPLC，在波长340 nm处检测，重复测定3次，外
标法计算牡荆素的含量，含量测定结果见表 3。
表 3 含量测定结果
Table 3 Determination results of vitexin
3 讨论
3．1流动相的选择
试验比较了下列几种流动相，分别为乙腈一1％
醋酸(1：9)、甲醇一0．5 醋酸(6．5：3．5)、甲醇～水
(4：6)，前两种流动相分离的待测组分峰形较差，有
拖尾现象，且待测组分与其它组分峰的分离度偏小，
操作复杂，成本偏高。考察发现甲醇一水(4：6)条件
下检测得到的牡荆素峰形好，对称，保留值适宜，且
牡荆素样品中干扰物能达到较好基线分离效果，满
足分析要求。所以将流动相定为甲醇一水(4：6)。
3．2提取溶剂的选择
牡荆素为极性化合物，提取一般采用水或极性
强的有机溶剂提取。常用的提取溶剂有 ：水、甲醇 、甲
醇一水 、乙醇 、乙酸乙酯、正丙醇、二氯 甲烷一乙醇等。
实验结果表明甲醇提取牡荆素有着较好的提取率 。
3．3提取方法的确定
比较了热回流、索氏和超声提取 3种提取方法
对牡荆素提取的影响，结果发现 3种方法总皂苷提
取率没有明显差异，考虑到超声提取方法简单，耗时
短 ，所以选择超声提取法。
3．4提取时间以及提取次数的优化
将经石油醚萃取除去叶绿素等脂溶性物质后的
牡荆残渣，分别用甲醇超声提取 4O、60、80 min，各
再重复提取 2次，测定牡荆素含量。结果表明：甲醇
3期 罗娅君等：HPLC法测定牡荆中牡荆素的含量 421
提取 3次，超声处理 60 rain以后目标组分含量无明
显变化，因此选择超声 提取 60 rain，重复提取 3次
为试验条件。对样品提取目标组分后的残渣进行
HPLC测定，无待测组分特征峰出现，说明样品中
的牡荆素已提取完全。
3．5流动相流速的优化
本实验对流动相的流速分别进行了比较，在
0．2～2．0 mL·rain 范围内改变流动相流速 ，发现
在流速为0．6～1．20 mL·rain。时牡荆素出峰时间
合适，峰形较好；然后从 0．7、0．9、1．0、1．3 mL·
rain 四组实验条件下筛选最优条件，经过实验筛
选 ，得出对其有效成分分离效果最恰 当的流速是
1．0 mL ·rain～
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