全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 30(5)：710— 712 2010年 9月
薄层扫描法测定毛两面针三种生物碱的含量
欧阳熙林1，欧尚瑶1，王朝阳 ，
(1．广西师范大学 化学化工学院，广西 桂林 541004
张晓璞1，罗朝晖 ，王恒山
2．温州市进出口检验检疫局 ，浙江 温州 325028)
摘 要 ：从广西大瑶山产毛两面针中提取到了鹅掌楸碱(I)、白屈菜红碱(I)、氯化两面针碱(1lI)三种生物
碱，用薄层扫描法(TLCS)同时测定其含量 ，并与玉林、百色两面针 中的同种生物碱进行对比。研究表明，毛两
面针和两面针均含 Ⅱ、Ⅲ，在毛两面针还能检测到 I的存在，其含量为 0．00957％。
关键词：薄层扫描法；毛两面针 ；两面针 ；鹅掌楸碱；白屈菜红碱 ；氯化两面针碱
中图分类号 ：Q946．88 文献标识码：A 文章编号：1000—3142(2OlO)05一o71o一03
Determination of three alkaloids of Zan thoxylum
nitidum ．fas tuosum using TLCSvar t USI 1 ●
OUYANG Xi—Lin]，OU Shang-Yao ，WANG Chao—Yang ，
ZHANG Xiao—puI，LUO Zhao—Hui1，WANG Heng-Shan1
(1．College of Chemistry and Chemical Engineering，Guangxi Normal University，Guilin 541004，China；2．Zh~iang
Import and Export Commodities Inspection Corporation Wenzhou Branch，Wenzhou 325028，China)
Abstract：Three alkaloids were isolated from Z．nitidum var． st~osuTI of Dayao Mountain and their structures were
characterized as Liriodenine(I)，Ch (Ⅱ) (Ⅲ)．
．
elerythrine and Nitidine chloride Their contents were determined by
TLCS and compared with Z nitid“m from Yulin and Baise in Guangxi．The result showed that both lI and H1 were
found in Z_nitidum Var． stuosuln and Z．nitidum Furthermore，1 was detecteded in Z nitidum var．fastuosum，with
a content of 0．00957 ．
Key words：TLC．S；Z．nitidum var．fastuosum； nitidum；Liriodenine；Chelerythrine；Nitidine chloride
两面针(Zanthoxylum nitidum)又名蔓 椒、入
地金牛、两背针，属于芸香科花椒属植物 ，广泛分布
于我国广西、广东、云南、台湾等南方省份。两面针
最早以蔓椒之名记载于《神农本草经》：“蔓椒味苦，
性温 ，主治风寒湿痹 ，历节痛，除 四肢厥气、膝痛”。
其可用于治疗胃痛、牙痛、风湿骨痛、神经痛 、毒蛇咬
伤等多种痛症，也可外用治疗烫伤。两面针中含有
的氯化两面针碱、白屈菜红碱等多种生物碱是主要
活性成分。赖茂祥等(1992)用薄层一紫外分光光度
法测定两面针碱的含量。近年来，有些学者采用
HPLC对两面针中氯化两面针碱、L一芝麻脂素或其
它生物碱等活性成分的含量测定(刘绍华等，2005；
Liang等，2006)。而薄层扫描法(TCLS)仅见组方
中含两面针的药物其它组分的活性成分测定(莫少
红等，2003)。虽然 HPLC测定化合物含量的检出
限很低，在重现性和精密度性优于 TC[ S，但 TCLS
运用较 HPLC早 ，普及程度高 ，作 为一种成熟的定
量方法 ，具有快捷，方便 ，投入成本低等优点，中国药
收稿 日期：2009-03-09 修回日期：2O10—02—17
基金项目：国家科技支撑计划(2006BA106A18—14)；药用资源化学与药物分子工程广西(教育部)重点实验窒资助课题(桂科能 0630006—51309)；桂林
市科学研究与技术开发项目(20090106—4)[Supported by Key Technologies R&D Program(2。c6BA106A18—14)；Key LaboratOry of Medicinal Chemical
Resources and Molecular Engineering，Guangxi Normal University，China(0630006 51309)：Scientific Research and Fcchnology Development Program of
Guilin City(20090106—4)]
作者简介：欧阳熙林(1972一)，男，江西兴国人，硕士，(E—maiDoyx1一xg@163．com。
通讯作者(Author for correspondence，E—mail：hshwang2002@1 26．com)
5期 欧阳熙林等：薄层扫描法测定毛两面针三种生物碱的含量 711
典仍以使用 TCLS测定两面针植物中两面针碱的
含量做为标准 ，附录ⅥB也把薄层 扫描法 作为一种
含量测定继续保留收录(国家药典委员会，2005)。
毛两面针 (Z．nitidum var．fastuosurn)为两 面
针的变种 ，两者在形态 、组织特征无 明显区别(孙小
文等，1996)，化学成分很少文献报道(王恒山等，
2OO6)，生物碱含量测定未见报道。本文介绍了从广
西大瑶山毛两面针中分离到鹅掌楸碱、白屈菜红碱
和氯化两面针碱，用 TCLS法对三种生物碱进行 了
定量检测 。
1 实验部分
1．1材料
毛两 面针采 自柳州地区的大瑶 山，玉林两面针
采 自容县十里乡，百色两面针购于德保县城药材市
场，经广西师范大学生命科学学院唐绍清教授鉴定。
鹅掌楸碱、白屈菜红碱和氯化两面针碱标准品均课
题组提取，核磁共振数据鉴定结构。Dragendorff试
剂按文献(肖崇厚等，2002)自制，除工业酒精外，其
余试剂均为国产分析纯试剂。GF254预制硅胶板
为青岛海洋化工厂生产。
1．2仪器
RE-52AA旋转蒸发仪；DZF一150型数显小型真
空干燥箱；日本 岛津 CS-9OOO型双波长薄层扫描仪 ；
WRS—lA数字 熔点仪 ；瑞 士 Bruker公 司 500MHz
超导核磁共振波谱仪。
1．3生物碱的提取与纯化
取毛两面针全草干药材 500 g，6O℃时用 75
工业酒精回流三次，每次 3 h，合并提取液，旋于回
收酒精，残渣用水溶成悬浮液，氯仿萃取，水洗氯仿
液，氯仿萃取液浓缩至 25 mL，用 10％的盐酸溶液
萃取(3×2O mL)，盐酸液用稀氨水调 pH=：=10，氯仿
萃取(5×2O mL)，水洗氯仿液，回收氯仿，残留物经
硅胶柱色谱和重结晶反复纯化，得化合物 I(36．5
mg)、化合物 Ⅱ(305 mg)、Il(487 mg)。
1．4化合物的结构鉴定
化合物 I 黄色针晶(氯仿)，mp．280～281℃，Dra—
gendorf试剂 显橘 红色，F B_MS m／ ：276[M+
H] ， HNMR(CDC1 ，500MHz)： 8．90(1H，d，J一
5．16 Hz)，8．59(2H，dd，J一 1．25，1．16Hz)，7．76(2H，
dd，J一5．15，1．07 Hz)，7．59(1H，d，J= 7．96 Hz)，
7．2O(1H，S)，6．39(2H，S)；”C NMR(125MHz)：
3182．4，151．7，147．9，145．5，145．0，135．7，133．9，
132．9，131．4，128．8，128．6，127．4，124．2，123．3，
108．2，103．3，102．4。 HNMR和 CNMR数据与鹅掌
楸碱的数据一致(宋晓凯等，2002)，这是我们首次从
毛两面针植物中分离到该化合物(欧尚瑶 ，2005)。
化合物 Ⅱ 黄色针 晶，mp．206～2O8℃，Dragendor-
ff试剂显橘红色 ， HNMR(CD3 0D，500MHz)，10．0
(1H，s)，8．74(1H，d，J一 9．25)，8．73(1H，d， 一
8．9)，8．29(1H，d，J一 8．6)，8．27(1H，S)，8．23
(1H，d，J一4．25)，7．62(1H，S)，6．3O(2H，s)，5．03
(3H，S)，4．31(3H，S)，4．17(3H，S)，¨ CNMR
(CD3OD，125MHz)，150．7，150．4，149．6，149．4，
146．2，133．0，131．3，128．9，126．1，125．8，124．3，
120．5，119．6，118．5，118．2，105．7，103．7，102．9，
61．4，56．2，51．5。 HNMR、¨ CNMR数据与氯化白
屈菜红碱的波谱数据一致 (Radek等 ，1999)。Ⅱ鉴
定为氯化白屈菜红碱 。
化合物Ⅲ 黄色粉末 ，mp．281～283℃ ， H NMR
(CD OD，500MHz)，9．67(1H，s)，8．77(1H，d，J一
8．9Hz)，8．31(1H，d，J一 8．9Hz)，8．26(1H，S)，
8．23(1H，s)，7．85(1H，s)，7．62(1H，s)，6．30(2H，
S)，4。97(3H，S)，4．30 (3H，S)，4．13(3H，
s)。 HNMR数据与氯化两面针碱波谱数据一致(崔
天义等，1994)。Ⅲ鉴定为氯化两面针碱。
1．5毛两面针和两面针生物碱的含量测定
1．5．1标准品溶液的制备 准确称取 I、Ⅱ、Ⅲ标准
品各 0．3 mg，用 甲醇溶解并定 容于 10 mL容量瓶
中，备用(避光保存)。
1．5．2样品液制备 分别准确称取毛两面针和容
县、百色两面针根部各 2 g，30 mL元水 乙醇 回流 3
次，每次 3 h，过滤后合并滤液，旋转蒸干乙醇。残
渣用甲醇溶解 ，定容于 25 mL容量瓶中，从中量取 2
mL溶液定容于 1O mL容量瓶 ，得样品溶液 。
1．5．3实验条件 薄层色谱条件：由于三种生物碱
的极性差别大，故采用两次展开法。点样于硅胶高
效板，以展开剂氯仿一甲醇(30：1)先将 I与Ⅱ分开，
然后以展开剂氯仿一甲醇(15：1)将 Ⅲ上行展开，展
距 10 cm。薄层扫描条件：采用反射式锯齿扫描，SX
一7，狭缝 1．2 x 1．2 i3,m，纸速 20 mm／min，灵敏度
中等。各标准品测定波长：XI一410 nm， Ⅱ一400
nm ，入Ⅲ一 310 nlTl。
1．5．4标准曲线的绘制 分别将 I、Ⅱ、Ⅲ标准品溶
液 1、2、4、6、8、1O L点于三块高效板上，展开，晾
712 广 西 植 物 3O卷
干，定位 ，扫描测定 。结果在点样量范围内点样量与
斑点吸收度峰面积呈 良好的线性关系，其回归方程
分别为 I： =8713．2．72+ 6366．8，r一0．9845；Ⅱ：Y
一 5442．5x 十 268．49，r一0．9832；Ⅲ：Y一67250 z
— 卜 135．32，r一0．9944。
1．5．5实验方法考察 (1)精密度测定 ：在 同一薄层
板上点 6个相 同量 的标准品，依法测定峰面积 ，其
RSD <5 ，说 明精密度较好 (表 1)。(2)稳定性
试验 ：使用精密度的分析用量 ，三种标准 品 工、Ⅱ、Ⅲ
经薄层分离、显色后，从薄层板在层析缸 中取 出算
起，每隔 1h重复扫描一次，以测定峰面积对时间做
图，得各标准样品在薄层板上的稳定 曲线。结果表
明：工、Ⅱ、Ⅲ在 6 h内基本稳定 ，各标 准品对应的
RSDY0分别为 2。43 、2．57 、l_43 。在 不同薄
层板上测定同一样品，结果相近。(3)回收率测定 ：
精密称取 5份同一样品，4份中准确加入标准样品，
一 份为对照，按与样品测定的方法进行测定 ，测定的
平均回收率为 105．0 (表 2)。
表 1 精密度实验结果 (％)(，z一6)
Table 1 The experiment result of precision
1．5．6样品测定 分别 吸取三种标准液 2、2、1 L
及样品液 3 L于同一块薄层板上，氯仿一甲醇(15：
1)展开，展距 7 cm，用上述方法扫描斑点面积，计算
相应生物碱含量 。
2 结果与讨论
2．1毛两面针和两面针生物碱的含量测定结果
表 3是毛两面针和两面针中三种生物碱 I、Ⅱ、
Ⅲ的定量检测结果 。由表可知：毛两面针和两面针
中都检测到两面针碱和白屈菜红碱，三产地的样品
中氯化两面针碱与白屈菜红碱均以玉林两面针含量
为最高，分别达到 0．0974 和 0．103 。毛两面针
中还能检测到鹅掌楸碱，其含量为 0．00957 。
表 3 毛两面针和两面针中三种生物碱的含量
Table 3 Three alkaloids’contents of Z．nitidum
var．fastuosum and Z．nitidum
2．2结语
在对于缺乏标准品的 中草药的质量标准制订
中，如何建立稳定、简便、可靠的方法非常重要。本
实验从毛两面针中提取的三种生物碱作为标准品，
研究了广西不同产地的毛两面针和两面针植物中两
面针碱 、白屈菜红碱和鹅掌楸碱的含量，为两面针的
质量控制标准的建立提供了一种方法。
与张守尧等(2001)和刘绍华等(2005)的研究报
道一样 ，在测定两面针植物中两面针碱的含量中，也
低于药典规定的 0．25 [按两面针碱 (C2 Hl8N04)
计算]，是地域、季节因素所致还是有其它的原因需
进一步研究 ，也说明在控制两面针的药材质量标准
上仍亟待加强 。
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(下转第 695页 Continue on page 695)
5期 黄品鲜等 ：珍稀濒危植物单性木兰种皮的挥发性成分分析 695
到 83 ，其中，罗勒烯 37．3 、芋烯 9．03 、对一伞
花烯 8．1O％、p一月桂烯 7．79 、[}I反一罗勒烯 4．O8％、
对一孟一1一烯 4．O0 。倍半萜类含量约为 3．29 ，其
中 p一金合欢烯为 1．22％。从表 2看 出，水 中乙醚萃
取物 的含 氧化 合物 种 类 较 多，其 中 a一松 油 醇
6．13 、对一伞花烃 5．57 、D-芋烯 5．33 、6一甲基一
3，5-庚 二 烯一2一酮 4．44 、4一甲 基一4一戊 烯一2一酮
4．16 。比较表 1和表 2发现 ，油层和水层 乙醚萃
取物被鉴定为相同成分有 29个 ，被鉴定相同成分 中
的相对含量为 ：油层 76。9 ，水层仅为 67．84 。
3 讨论
珍稀濒危植物单性木兰种皮的挥发组分在水中
有一定溶解度 ，实验结果表明，从水中回收挥发组分
达到 2O (0．7／3．5)，因此 ，用水蒸汽蒸馏法提取植
物香料时应关注水溶性芳香组分 。
值得关注的是含量高达 37．3 的罗勒烯，该化
合物在其它木兰精油中没有被发现，非常有利于进
行组分单离。另外芋烯、对一伞花烯、l3一月桂烯的含
量都超过了7 。而罗勒烯和月桂烯都是合成名贵
香料芳樟 醇、香叶醇、橙 花醇、紫 罗兰酮的原料 ，因
此 ，木兰种皮精油的在香料领域有潜在的应用前景 。
溶解于水的乙醚萃取物 的含氧化合物种类较
多 ，而且成分的含量 比油层含量增加原因是 ：含氧化
合物如醇、醛、酸等容易与水形成氢键，在水中的溶
解度增加 ，因此用水蒸汽蒸馏法提取时，溶解在水相
中。如苯 甲醛在水 中有较高溶解度 ，在油层 中未检
测到，而在水中乙醚萃取物具有较高含量。又如 a一
松油醇，在精油层的含量仅为 o．95 ，而在乙醚萃
(上接第 712页 Continue from page 712)
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