全 文 ：断。本实验采用 100 ℃水浴加热 5 min 的方法，使
CaSO4·2H2O完全解离，易于判断滴定终点。
参考文献
［1］ 朱传静，常琳，康琛，等．不同产地紫石英中氟化钙的含量
测定［J］．中国实用医药，2010，34(5) :235 － 237．
［2］ 陆景坤，周昊飞，陈朝军，等．不同产地寒水石炮制前后主
成分、微量元素含量对比分析［J］． 中药材，2011，34(3) :
357 － 361．
［3］ 王轩翾，冉祥兰，刘少文，等．磷石膏中硫酸钙含量测定的
方法［J］．武汉工程大学学报，2010，32(5) :41 － 44．
［4］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典(一部) ［M］． 北
京:中国医药科技出版社，2010:87 － 88．
［5］ 顾崇梅．对石膏含量测定法的一点改进［J］． 中国药品标
准，2008，9(3) :185．
DOI 10． 3870 /yydb． 2013． 08． 035
4 种蓼科植物中大黄素型蒽醌类成分的测定
孟军华，金泽祥，赵汉琪，方一新，李志辉
(武汉市第三医院药学部，武汉 430060)
摘 要 目的 建立蓼科植物大黄、何首乌、羊蹄和虎杖中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等几种大黄素型蒽醌类成分
的测定方法，为相关药材质量控制提供参考。方法 采用超高效液相色谱( UPLC) 法，色谱柱 ACQUITY UPLC BEH C18
( 2． 1 mm × 250 mm，1． 7 μm) ，甲醇-0． 1%醋酸水为流动相，梯度洗脱，检测波长 254 nm，流速 0． 3 mL·min －1，柱温 35 ℃。
结果 大黄素、大黄酚、大黄素甲醚进样量分别在 0． 037 ～ 0． 495，0． 037 ～ 0． 494，0． 037 ～ 0． 492 μg 范围内与峰面积线性
关系良好( 均 r = 0． 999 9) ，平均加样回收率( n = 9) 分别为 100． 71%，100． 18%，100． 49%，RSD值均 ＜ 1． 50%。结论 该
方法快速简便，准确可靠，灵敏度高，重复性好，可作为蓼科植物药材的质量控制方法。
关键词 蓼科植物药材;蒽醌类成分;含量测定
中图分类号 R286; R927． 1 文献标识码 A 文章编号 1004 － 0781( 2013) 08 － 1080 － 03
蓼科植物主要分布于北温带，我国有 13 属约 235
种，37 变种，分布于全国各地。蓼科多数植物可作药
用，具有清热解毒、散结消肿、顺气解痉、收敛止泻、通
经利尿等功效，其中包括何首乌(Fallopia multiflora)、
虎 杖 (Reynoutria japonica)、药 用 大 黄 (Rheum
officinale)、羊蹄(Rumex japonicus)等常用中药材［1-2］。
近年来，蓼科植物化学成分逐渐受到关注。文献报道，
蒽醌及黄酮类化合物在该科植物中普遍存在［3］。从
各属化学成分来看，大黄属、何首乌属、虎杖属和酸模
属植物化学成分相近，都含有具很强生物活性的蒽醌
类化合物［4-9］，如大黄素、大黄酚和大黄素甲醚等。但
目前蓼科作为药用大科，只有少数几种著名药用植物
有详细化学研究，其他大多有较好民间药用背景的植
物尚无系统化学研究。随着植物化学成分研究的不断
深入，中药物质基础研究日益受到重视。笔者在本实
收稿日期 2012 － 11 － 12 修回日期 2012 － 12 － 20
作者简介 孟军华(1973 －) ，女，湖北武汉人，主管药师，
硕士，研究方向:中药制剂研发与质量控制。E-mail:mengjh315
@ foxmail． com。
通讯作者 李志辉(1955 －) ，男，湖北武汉人，副主任药
师，研究方向:医院药学。电话:027 － 68894887，E-mail:
lili820902@ sina． com。
验中立足同科或同属植物中化学成分具有相似性的植
物化学分类学角度，以何首乌、虎杖、药用大黄和羊蹄
等蓼科植物药材为研究对象，建立大黄素、大黄酚和大
黄素甲醚等成分的超高效液相色谱(ultraperf vinance
liquid chromato graphy，UPLC)含量测定方法，为何首
乌、虎杖、药用大黄和羊蹄等药材的质量检测提供快速
简便的方法，同时为寻找中药新资源提供有益的线索。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 ACQUITY UPLC(美国 Waters 公司，包括
四元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二
极管阵列检测器、Empower2 色谱工作站) ，BP210S 电
子天平，ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2． 1 mm ×
250 mm，1． 7 μm) ，AB135-S十万分之一天平。
1． 2 试药 大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品(均
购自四川省维克奇生物科技有限公司，批号分别为
201007，201006，201003，纯度≥98． 5%) ，大黄、何首
乌、羊蹄和虎杖药材分别购于广州市清平药材批发市
场和广州致信药业有限公司，经武汉市第三医院药学
部陈永刚副主任中药师鉴定，均符合《中华人民共和
国药典》2010 年版一部各药材项下来源规定。何首乌
按《中华人民共和国药典》2010 年版炮制成首乌。土
大黄采集于广州中医药大学大学城校区药王山，依据
·0801· Herald of Medicine Vol. 32 No. 8 August 2013
中华本草土大黄项下鉴定，药材标本均保存于武汉市
第三医院药学部中药样本室。甲醇为色谱纯(Merck
公司) ，醋酸为优级纯(广州化学试剂厂) ，水为重蒸馏
水，提取用甲醇等其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备 取大黄素、大黄酚和大黄素
甲醚对照品适量，精密称定，分别用甲醇溶解并定容至
刻度，摇匀，得各对照品母液;分别准确吸取上述对照
品母液适量混合，甲醇定容，摇匀，制成每毫升含大黄
素、大黄酚和大黄素甲醚分别为 0． 925，0． 900，
0． 875 μg的混合对照品储备液。
2． 2 供试品溶液的制备 取干燥至恒重的各药材粉
末 0． 5 g，精密称定，置 50 mL 具塞锥形瓶，加甲醇
50 mL，称定质量，浸润 15 min，超声提取 30 min(功率
250 W，频率 40 kHz) ，放冷至室温，用甲醇补足减失的
质量，摇匀，过孔径 0． 22 μm 微孔滤膜，续滤液即为供
试品溶液。
2． 3 色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基硅烷键
合硅胶为填充剂，以甲醇为 A相，0． 1%醋酸为 B 相，梯
度 洗 脱 0 ～ 7． 5 min，A:30% ～ 75%，流 速
0． 3 mL·min －1。柱温35 ℃;检测波长254 nm。理论板
数按大黄素色谱峰计算不低于 10 000。结果见图 1。
图 1 对照品及样品 UPLC色谱图
A．溶剂空白; B．对照品; C．大黄样品; D．羊蹄样品; E．虎杖
样品; F．生首乌样品; G． 制首乌样品; H． 土大黄样品; 1． 大黄
素; 2．大黄酚; 3．大黄素甲醚
2． 4 标准曲线的绘制 精密吸取混合对照品储备液
适量，甲醇稀释，分别稀释 2，5，10，20 和 50 倍，得一系
列浓度混合对照品溶液，摇匀，经孔径 0． 22 μm 微孔
滤膜过滤，依上述色谱条件，进样 1． 0 μL，以各对照品
的进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准
曲线，得到 3 种成分的线性回归方程及线性范围，见表
1。
表 1 3 种成分的线性回归方程及线性范围
化合物 线性回归方程 线性范围 /μg r
大黄素 Y = 664 112X + 1 855． 7 0． 018 5 ～ 0． 462 5 0． 999 9
大黄酚 Y = 1E + 06X + 4 801． 4 0． 018 0 ～ 0． 450 0 0． 999 9
大黄素甲醚 Y = 44 395X + 1 799． 7 0． 017 5 ～ 0． 437 5 0． 999 9
2． 5 精密度实验 准确吸取同一供试品溶液，连续等
体积进样 6 次，求得大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面
积 RSD分别为 0． 64%，0． 89%，0． 91%(n = 6)。
2． 6 重复性实验 取同一样品(广州致信药业有限
公司大黄)6 份，精密称定，按“2． 2”项操作，在上述色
谱条件进样测定，大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量
RSD分别为 0． 71%，0． 14%，0． 37%(n = 6) ，表明实验
重复性良好。
2． 7 稳定性实验 准确吸取同一供试品溶液，分别在
0，2，4，8，12，24，36，48 h进样 1． 0 μL分析，大黄素、大
黄酚和大黄素甲醚峰面积 RSD 分别为 0． 64%，
0． 67%，0． 51%(n = 6)。表明样品在 48 h内稳定。
2． 8 加样回收率实验 取已知大黄素、大黄酚和大黄
素甲醚含量的广州致信药业有限公司大黄药材粉末
0． 25 g 9 份，精密称定，分别加入高、中、低浓度(分别
为已知含量的 80%，100%，120%)大黄素、大黄酚和
大黄素甲醚对照品母液，按供试品溶液制备项下方法
操作，进样测定，结果见表 2。大黄素平均回收率
100． 71%，RSD = 0． 92%;大 黄 酚 平 均 回 收 率
100． 18%，RSD = 0． 60%;大黄素甲醚平均回收率
100． 49%，RSD =1． 02%。
2． 9 样品含量测定 按照本方法测定条件，分别测定
市售各品种各批次药材样品，每个批次平行 3 份，每份
样品平行进样 2 针，以外标法计算样品中大黄素、大黄
酚和大黄素甲醚的含量，结果见表 3。
3 讨论
笔者在本实验中建立测定蓼科植物药材大黄、土
大黄、何首乌、羊蹄和虎杖等中大黄素、大黄酚和大黄
素甲醚等 3 种蒽醌类成分含量的 UPLC 法，10 min 内
即可完成测试，与普通高效液相色谱(HPLC)法比较，
·1801·医药导报 2013 年 8 月第 32 卷第 8 期
表 2 3 种对照品加样回收率实验结果
成分
称样量 /
g
原有量 加入量 测得量
mg
回收率 /
%
大黄素 0． 250 4 0． 338 5 0． 271 0 0． 609 3 99． 93
0． 251 2 0． 339 6 0． 271 0 0． 611 3 100． 26
0． 250 4 0． 338 5 0． 271 0 0． 609 3 99． 93
0． 250 6 0． 338 8 0． 335 0 0． 677 6 101． 13
0． 255 0 0． 344 7 0． 335 0 0． 689 5 102． 93
0． 250 4 0． 338 5 0． 335 0 0． 677 0 101． 04
0． 250 4 0． 338 5 0． 405 0 0． 744 7 100． 30
0． 251 2 0． 339 6 0． 405 0 0． 747 1 100． 62
0． 250 4 0． 338 5 0． 405 0 0． 744 7 100． 30
大黄酚 0． 250 4 0． 474 6 0． 380 0 0． 854 2 99． 90
0． 251 2 0． 476 1 0． 380 0 0． 856 9 100． 21
0． 250 4 0． 474 6 0． 380 0 0． 854 2 99． 89
0． 250 6 0． 474 9 0． 475 0 0． 949 9 100． 00
0． 255 0 0． 483 3 0． 475 0 0． 966 6 101． 75
0． 250 4 0． 474 6 0． 475 0 0． 949 1 99． 89
0． 250 4 0． 474 6 0． 570 0 1． 044 0 99． 89
0． 251 2 0． 476 1 0． 570 0 1． 047 4 100． 23
0． 250 4 0． 474 6 0． 570 0 1． 044 0 99． 89
大黄素甲醚 0． 250 4 0． 247 0 0． 195 0 0． 444 6 101． 33
0． 251 2 0． 247 8 0． 195 0 0． 446 1 101． 69
0． 250 4 0． 247 0 0． 195 0 0． 444 6 101． 33
0． 250 6 0． 247 2 0． 250 0 0． 494 4 98． 88
0． 255 0 0． 251 6 0． 250 0 0． 503 1 100． 60
0． 250 4 0． 247 0 0． 250 0 0． 494 0 98． 80
0． 250 4 0． 247 0 0． 295 0 0． 543 4 100． 47
0． 251 2 0． 247 8 0． 295 0 0． 545 2 100． 81
0． 250 4 0． 247 0 0． 295 0 0． 543 4 100． 47
表 3 6 种蓼科植物中 3 种指标成分质量分数 mg·g －1
样品来源 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚
大黄 1． 351 9 1． 895 2 0． 986 5
生首乌 0． 241 1 0． 012 9 0． 154 2
制首乌 0． 271 5 0． 015 4 0． 190 5
虎杖 6． 142 0 0． 010 1 1． 039 3
羊蹄 1． 351 2 1． 492 7 1． 339 2
土大黄 0． 135 4 0． 113 2 0． 108 0
分离效果好，效率大幅度提高，经方法学考察，可准确
测定蓼科植物药材大黄、土大黄、何首乌、羊蹄和虎杖
等中 3 种成分含量，本实验方法快速简便，可为大批量
药材检测工作带来较大的方便。
从样品含量测定结果可以看出，大黄与羊蹄中大
黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量相当，羊蹄可以考虑作
为大黄的替代品。虎杖中大黄素含量最高达
6． 14 mg·g －1。本实验所采集样品土大黄中三者成分
含量都较少，可能与其生长年限或环境有关。生首乌
和制首乌中 3 种成分含量没有显著差异。
蒽醌类化合物广泛存在于植物界中，具有显著的
药理活性，市场应用前景广阔。蓼科作为一个药用大
科，尚有一些较好的民间药未被开发与利用，在今后的
研究中应以蒽醌类化合物为标准，加强此类化合物的
开发利用。
参考文献
［1］ 汪纪武． 药用植物辞典［M］． 天津:天津科学出版社，
2005．
［2］ 周荣汉．药用植物化学分类学［M］．上海:上海科学技术
出版社，1988:256 － 259．
［3］ 张文根，杨赛钢，李波，等．中国蓼科植物化学成分研究进
展［J］．现代生物医学进展，2008，2(8) :393 － 395．
［4］ 梁荣感，刘卫兵，李丽亚，等．大黄蒽醌类化合物体外抗呼
吸道合胞病毒作用的研究［J］．广西医科大学学报，2007，
24(2) :280 － 281．
［5］ 李凤新，孙振国，苏红，等． 虎杖蒽醌提取物抗柯萨奇 B3
型病毒作用及机制研究［J］． 中草药，2008，39(11) :
1699 － 1701．
［6］ 欧阳东云，刘春永，曾耀英，等．大黄素等 5 种蒽醌衍生物
的体外抗 HIV-1 活性［J］． 中国病理生理杂志，2010，26
(6) :1187 － 1192．
［7］ 金雪梅，金光洙．天然蒽醌抗肿瘤作用机制研究进展［J］．
延边大学医学学报，2006，29(9) :221 － 222．
［8］ 万绍晖，许启泰，蒲晓辉，等． 掌叶大黄蒽醌类衍生物对
α-萘异硫氰酸酯所致大鼠黄疸模型的作用［J］．中国药理
学通报，2006，22(10) :1271 － 1274．
［9］ 唐大轩，谭正怀，梁媛媛，等．大黄蒽醌致泻作用及其机制
的初步研究［J］． 时珍国医国药，2007，18(6) :1312 －
1314．
DOI 10． 3870 /yydb． 2013． 08． 036
·2801· Herald of Medicine Vol. 32 No. 8 August 2013